Genoteca

Question 1

Tipi di genoteca

Answer 1

Genomica e cDna

Question 2

Screening

Answer 2

Ibridazione molecolare (south o North western)
Immunologica a cDna con anticorpi

Question 3

PCR componenti e fasi. Cosa ottengo alla fine

Answer 3

Primer e caratteristiche (reverse sopra 5-3, foward 3-5) 40-42% GC. TM=4x(C+G)+2x(A+T)
DNA filamento templato
Oligonucleotidi
Tampone e mg
DNA polimerasi
-denaturazione 95 per 30sec5min
-appaiamento primer 45-60 per 30sec 1,3min
-estensione primer da 3’

Filamento stampo, nuovi filamenti e filamenti con 5’ delimitatoda primer e 3’variabile

Question 4

Quantificare pcr per avere resa teorica

Answer 4

-Elettroforesi vedo intensità banda prodotto e quella di riferimento
-rt PCR con taqman sonde. 5’ fluoroforo e 3’quencer. Traccio curva di amplificazione segnale, fino ciclo soglia in cui fluorescenza è rilevabile. Per normalizzare applicazione faccio curva STD con campioni a concentrazione nota -> QUANTIFICAZIONE ASSOLUTA. Aggiungo controllo endogeno -> QUABTIFICAZIONE RELATIVA