Analisi Espressione Genica Flashcards
A livello trascrizionale
-Saggio protezione da RNasi: ibrido RNA marcato e mRNA
- nortem blotting: elettroforesi RNA tot o mRNA purificato in condizioni denaturanti. Membrana nylon (meglio per RNA) o Nigro ell per vuoto corrente elettrica o processo capillare.Incubo in soluzione con sonda RNA marcato e rivelo
- Ibridazione in situ: cellule su vetrino, rimuovo proteine. Ibrido con sonde a DNA o RNA singolo filamento marcate.
- Microarray: microdeposizione e sintesi oligonucleotidi su supporto.sonda non marcata ma lo è prodotto di pcr
A livello traduzionale
-western blotting
-analisi immunocito/isto chimica: cellule incubate con IG specifica, formò immunocomplessi, rivelo per colorimetria indiretta perché uso ig 2°
-immunoprecipitazione: estratto Cell con anticorpi 1° legato a resina o biglie magnetiche, dissocio da ig e faccio elettroforesi. Gel passa a membrana e faccio western blot
- immunoprecipotazione della cromatina: crosslinking con formaldeide. Liso cellule e frammento e isolo cromatina con sonicatore. Analizzo frammenti con IG per proteina .separo per centrifuga o resina, proteasi digeriscono e purifico DNA
-immunoprecipitazione dell’ RNA (RIP): linking prote e RNA con raggi UV. Rnasi tagliano singoli filamenti. Il resto incubo con IG. Complesso ig-prote-rna. Uso proteasi su complesso, RNA è purificato e amplificato con RT pcr
