Extracción de DNA Flashcards

1
Q

extracción DNA por la técnica fenol cloroformo consiste en (4)

A

lisis de las células y liberación de DNA

extracción de proteínas y lípidos con solventes orgánicos

precipitación de DNA

lavado de DNA

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2
Q

2 tipos de cuantificación en extracción de DNA

A

espectrofotometría
fluorometria

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3
Q

en la espectrofotometría

A

mientras más luz absorba mayor concentración hay

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4
Q

en la espectrofotmetría que onda de luz absorbe el DNA/RNA, proteínas y fenol

A

DNA/RNA 260 nm
proteínas 280 nm
fenol 270 nm

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5
Q

la fluorometria consiste en la

A

unión específica de colorantes fluorescentes al ácido nucleico

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6
Q

una PCR consisten en

A

secuencia molde
síntesis
secuencia complementaria

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7
Q

requerimientos para una PCR

A

secuencia de DNA
DNA polimerasa
desoxiribonucleótidos
primers

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8
Q

qué hace la DNA polimerasa en la PCR

A

polimerasa una cadena de DNA tomando como molde una preexistente

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9
Q

ADN polimerasa termoestable que cataliza la incorporación cebador-dependiente de nucleótidos en ADN doble hebra en la dirección 5′→3′ en presencia de Mg2+

A

Taq polimerasa

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10
Q

amortiguador

A

pH adecuado (8.4)

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11
Q

el soporte debe de ser de

A

95°

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12
Q

el cloruro de magnesio es un cofactor de la

A

Taq polimerasa

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13
Q

los iniciadores se usan para (3)

A

dieñar
reconocer secuencias blanco del molde de DNA
proporcionan extremo 3’

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14
Q

los iniciadores pueden ser

A

forward 5-3
reverse 3-5

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15
Q

los iniciadores tienen alto contenido de

A

GC

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16
Q

la desnaturalización en un PCR consiste en

A

separar cadenas de DNA a 95° (20-30 seg)

17
Q

la hibridación en la PCR consiste en

A

los primers se alinean al extremo 3’
esto pasa de 50 a 60°

18
Q

la extensión de la PCR consiste en

A

la Taq polimerasa actuando sobre el complejo templado de primers

72°C

19
Q

al final de la PCR se realiza un

A

gel de electroforesis

20
Q

técnica mediante la cual se separan bio moléculas en dosolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico

A

electroforesis

21
Q

elementos necesarios para electroforesis

A

cámara de electroforésis
gel de agarosa

22
Q

función de cámara de electroforesis

A

genera campo eléctrico alrededor de un gel

23
Q

función de gel de agarosa

A

separar fragmentos de DNA

24
Q

mezcla de moléculas de DNA o proteínas que permiten determinar por comparación el tamaño de moléculas contenidas en muestras de electroforesis

A

marcador de peso molecular

25
Q

amplificación de un segmento de ADN utilizando 2 partidores.
detección de amplificación mediante geles de agarosa.

A

PCR estándar

26
Q

PCR estándar aplicación

A

detección de un segmento de DNA

27
Q

amplificación de 2 o más segmentos de ADN utilizando varios partidores en una sola reacción de amplificación.
detección de amplificación mediante geles de agarosa.

A

PCR múltiple

28
Q

PCR estándar con paso posterior de digestión con enzimas de restricción

A

RPC-RFLP

29
Q

aplicación de PCR múltiple

A

detección cualitativa de varios segmentos de ADN en una sola reacción de PCR

30
Q

aplicación de RPC-RFLP

A

detección de polimorfosis genéticos

31
Q

síntesis de cADN a partir de ARN mediante transcripción reversa, seguido de una PCR

A

RT

32
Q

apliación de RT

A

expresión de genes
detección de virus ARN

33
Q

PCR estándar donde se utilizan tinciones o sondas con fluoróforos para detección de fragmentos amplificados.

A

RPC-TR

34
Q

aplicación de RPC-TR

A

detección cualitativa de uno o varios segmentos de ADN.
Cuantificación de ADN en la muestra o expresión de genes.

35
Q

la detección de los productos amplificados sucede en

A

cada ciclo de la reacción

36
Q

método más sensible para detectar y cuantificar los ácidos nucleicos

A

qPCR (PCR en tiempo real)

37
Q

en el sistema reportero fluorescencia como funcionan los específicos

A

sondas fluorescentes de oligonucleótidos con un reportero fluorescente

38
Q

en el sistema reportero fluorescencia como funcionan los no específicos

A

moléculas intercalantes tienen afinidad por el dsDNA
generan señal fluorescente