Extracción de DNA Flashcards
extracción DNA por la técnica fenol cloroformo consiste en (4)
lisis de las células y liberación de DNA
extracción de proteínas y lípidos con solventes orgánicos
precipitación de DNA
lavado de DNA
2 tipos de cuantificación en extracción de DNA
espectrofotometría
fluorometria
en la espectrofotometría
mientras más luz absorba mayor concentración hay
en la espectrofotmetría que onda de luz absorbe el DNA/RNA, proteínas y fenol
DNA/RNA 260 nm
proteínas 280 nm
fenol 270 nm
la fluorometria consiste en la
unión específica de colorantes fluorescentes al ácido nucleico
una PCR consisten en
secuencia molde
síntesis
secuencia complementaria
requerimientos para una PCR
secuencia de DNA
DNA polimerasa
desoxiribonucleótidos
primers
qué hace la DNA polimerasa en la PCR
polimerasa una cadena de DNA tomando como molde una preexistente
ADN polimerasa termoestable que cataliza la incorporación cebador-dependiente de nucleótidos en ADN doble hebra en la dirección 5′→3′ en presencia de Mg2+
Taq polimerasa
amortiguador
pH adecuado (8.4)
el soporte debe de ser de
95°
el cloruro de magnesio es un cofactor de la
Taq polimerasa
los iniciadores se usan para (3)
dieñar
reconocer secuencias blanco del molde de DNA
proporcionan extremo 3’
los iniciadores pueden ser
forward 5-3
reverse 3-5
los iniciadores tienen alto contenido de
GC
la desnaturalización en un PCR consiste en
separar cadenas de DNA a 95° (20-30 seg)
la hibridación en la PCR consiste en
los primers se alinean al extremo 3’
esto pasa de 50 a 60°
la extensión de la PCR consiste en
la Taq polimerasa actuando sobre el complejo templado de primers
72°C
al final de la PCR se realiza un
gel de electroforesis
técnica mediante la cual se separan bio moléculas en dosolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico
electroforesis
elementos necesarios para electroforesis
cámara de electroforésis
gel de agarosa
función de cámara de electroforesis
genera campo eléctrico alrededor de un gel
función de gel de agarosa
separar fragmentos de DNA
mezcla de moléculas de DNA o proteínas que permiten determinar por comparación el tamaño de moléculas contenidas en muestras de electroforesis
marcador de peso molecular
