épissage d'ARN Flashcards
Est ce que les procaryotes ont besoin de l’épissage de d’ARN?
non, ils n’effetuent pas de maturation de leurs ARN, car elle ne contient pas d’introns
À quoi correspondent les introns chez les eucaryotes?
les exons sont entrecoupés par les introns qui sont non codantes
est ce que les exons non codants sont maintenus dans l’ARN mature?
oui,
-elles sont aux extrémités des exons non-codants
-elles ne sont juste pas traduits en proétines
Comment est ce que le nombre d’introns varie?
-Il varie énormément
-rarement plus d’un intron par gène dans la levure
-plus l’organisme est complexe, plus il y a d’introns par gène
Quelle est la taille des introns vs exons?
-leurs taille varie
-introns plus longs que les exons
-exons environ 150 bases
-introns jusqu’à 800kb
Quelle est la composition du gène DHFR?
-gène de 31kb
-6 exons qui forment un ARNm de 2kb
-plus de 90% du gène est constitué d’introns
Est ce que la traduction et la transcription reconnaissent les introns vs les exons?
non, le pré-ARNm inclu alors les introns qui doivent être enlevés avant la traduction
À quoi sert l’épissage?
enlever les introns du pré-ARNm pour qu’il soit mature
Quelles sont les séquences aux jonctions introns/exons?
séquences spécifiques conservées
-site d’épissage 5′ (donneur) : séquence GU, 2 premières bases de l’introns
-site d’épissage 3′ (receveur): séquence AG, 2 dernières bases de l’introns
-site de branchement: dans l’intron, le A dans la séquence YNYURAY, qui est suivi d’une séquence riche en pyrimidine
*p.10
Quelles sont les 2 réactions impliquées dans la chimie de l’épissage?
1ère réaction de trans-estérification
-le 2′OH du site A au site de branchement fait une attaque nucléophile du phosphate du G du site donneur
-cela libère le 5′ de l’intron, qui se lie au site A du site de branchement et forme une jonction triple/lasso
2ème réaction de trans-estérification
-le 3′OH de l’exon 5′ fait une attaque nucléophile du phosphate du G du site receveur
-les deux exons se lient
-l’intron est dégradé rapidement
C’est quoi l’épissage en trans?
lorsque des exons provenant de 2 gènes distincts sont épissés ensemble et forment un seul ARNm (attaque nucléophile sur un autre gène)
-rare
-peut être une erreur ou contrôlée
Caractéristiques du spliceosome
-complexe de 150 proétines et 5 ARN
-taille très grande semblable au ribosome
-activité ATPase pour générer de l’énergie nécessaire à l’épissage
Est ce que c’est les protéines ou les ARN qui ont le plus grand rôle dans le spliceosome?
les ARN réalisent la majorité des fonctions:
-ARN repèrent les séquences conservées aux jonctions introns/exons
-ARN participent à la catalyse de la réaction d’épissage
Quelles sont les protéines/ARN impliquées dans le spliceosome?
snRNA: 5 petits ARN nucléaires
-U1, U2, U4, U5, U6
-100-300 nucléotides
snRNP: les snRNA en complexes avec des protéines
*implique beaucoup d’autres protéines ne faisant pas partie des snRNP
Quel est le rôle des snRNP?
-reconnaissent le site d’épissage 5′ et de site de branchement et rapprochent ces sites pour faciliter l’attaque nucléophile
-catalysent les réactions de clivage et de ligation de l’ARN via des interactions ARN-ARN, ARN-protéine, protéine-protéine
Exemples d’hybrides ARN-ARN
- au site d’épissage 5′, U1 et U6, qui sont des ARN peuvent se lier à la séquence complémentaire
- au site de branchement, U2 et BBP (qui n’est pas une snRNP, mais plutôt une protéine, mais qui est aussi importante) peuvent se lier
- Les snRNP peuvent avoir une complémentarité entre elles. U2 et U6 se lient et rapprochent le site d’épissage 5′ au site de branchement
Quels sont les 4 grands complexes formés durant les étapes moléculaires de l’épissage?
- complexe E (U1, U2AF65, U2AF32, BBP)
- complexe A (U1, U2, U2AF65, U2AF35)
- complexe B (U1, U2, U4, U5, U6)
- complexe C (U2, U5, U6)
Comment est formé le complexe E?
- site d’épissage 5′ est reconnu par la snRNP U1
- U2AF65 se lie au site riche en pyrimidines et une autre sous-unité, U2AF35 se lie au site d’épissage 3′
- la sous-unité U2AF65 recrute BBP au site de branchement
Comment est formé le complexe A?
- La snRNP U2 se lie au site de branchement
-elle est aidée par U2AF65 qui déplace BBP du site de branchement - lors de la liaison de U2 avec le site de branchement, le A est non-apparié avec U2 et devient disponible pour réagir avec le site d’épissage 5′
Comment est formé le complexe B?
- la particule tri-snRNP (U4, U5, U6) se lie au pré-ARNm et à U1 et U2
-U4 et U6 se lient à leur séquence complémentaire et U5 est lié par des interactions protéines-protéines - U2AF65 et U2AF35 sont libérés
- U6 prend la place de U1 au site d’épissage 5′ et U1 est libéré
Comment est formé le complexe C?
- U4 est libéré du complexe
- U6 et U2 peuvent se lier (le site de branchement et le site d’épissage 5′ sont juxtaposés), le lasso est crée
- U5 facilite la liaison du site d’épissage 5′ avec le site d’épissage 3′
- libération des exons épissées et l’introns sous la forme de lasso
Quel complexe effectue les 2 réactions de trans-estérification?
le complexe C
C’est quoi des introns auto-épissants et comment fonctionnent-ils?
-rare
-des introns qui s’éliminent eux-même sans ARN externes ou de protéines
-L’intron se replie en une configuration précise au sein du pré-ARNm pour rapprocher les 3 sites essentiels de l’épissage et auto-catalyse la réaction
D’où vient la fiabilité de reconnaissance de l’épissage?
assez fiable:
-le site d’épissage 5′ est reconnu par U1 et U6, peu probable qu’une séquence incorrecte soit reconnues par les deux