Diagnostique et sérologie - Marcelo Gottschalk Flashcards
Qu’est ce la sérologie?
Deux définitions utilisées:
L’étude de la réaction antigène-anticorps in vitro.
Détection d’anticorps dans le sang (sérum) ou autres fluides du corps
Qu’est ce qu’une test sérologique?
Deux définitions
Tests qui utilisent des anticorps et des antigènes
Tests utilisés pour étudier la présence d’anticorps dans le sang (sérum) ou autres fluides du corps (jargon du terrain)
Qu’est ce qu’on cherche lors de la détection d’antigènes? (2)
La détection d’antigènes: rechercher la présence d’un antigène ou un épitope dans un échantillon clinique
ATTENTION: L’antigène recherché doit être immunogène : si nous avons des anticorps pour effectuer le test, en général l’antigène a été capable d’induire une réponse immunitaire…
Vrai ou faux: un antigène peut seulment être un pathogène entier.
Faux: Un antigène peut être un pathogène entier ou une partie du pathogène.
Nommer les 3 substances qui peuvent être qualifé sous le terme “d’antigène”.
Quand on parle d’antigène, de fois on réfère au microorganisme complet (jargon populaire…), une partie du microorganisme (exemple: pili, avec les sous-unités, adhésines, etc.: plusieurs épitopes) ou un seul épitope (adhésine du pili/fimbriae)
Vrai ou faux: Il est très rare que l’antigène détecté soit présent chez toutes les souches de la même espèce bactérienne ou virale
Vrai
Qu’est ce qu’un sérotype?
Variantes antigéniques d’une même espèce bactérienne (ou virale)
– différentes capsules, LPS (Gram-négatifs) ou protéines (fimbriae ou flagelles par exemple): bactéries
– différentes protéines de la capside, adhésines: virus
Qu’est ce que la sérotypie?
L’identification du sérotype
Comment est-ce qu’on effectue la sérotypie? une détection d’antigènes?
Sérotypie: On utilise en général une culture bactérienne (ou isolement viral) isolée d’un patient
Détection d’antigènes: on utilise en général un échantillon clinique
Qu’est ce qu’un facteur de virulence? (4)
Un facteur (normalement un antigène) présent dans un microorganisme qui collabore significativement à la virulence de celui-ci
– Souvent: des antigènes sur lesquels on se base pour effectuer la sérotypie
– On peut donc aussi faire la détection d’antigènes sur la base d’un facteur de virulence qui serait au même temps responsable du sérotype…
– Détection d’antigènes = détection du sérotype = détection du facteur de virulence
Vrai ou faux: Selon le pathogène, il peut avoir des facteur de virulence non-relié au sérotype
Vrai
Nommer 4 caractéristiques de la recherche d’antigène (récapitulation).
-
Elle peut (ou non) être synonyme d’espèce bactérienne
- ->toutes les souches d’un espèce sont positives
- ->Utile seulement si toutes les souches sont identiques antigéniquement et aussi virulentes -
Elle peut (ou non) être synonyme d’un sérotype
- ->les souches appartenant au même sérotype sont positives
- ->Utile si toutes les souches d’un sérotype sont virulentes - Elle peut (ou non) être basée sur la recherche d’un facteur de virulence
- Faire la sérotypie:ce n’est pas faire la détection d’antigènes (en général)
Comment est-ce qu’on fait pour avoir un sérum hyperimmun (anticorps polyclonaux)? Nommer les 5 espèces les plus utilisés
Inoculation répétée d’un antigène (immunogène) pour l’obtention d’un titre élevé d’anticorps.
Soit:
Immunization de l’antigène A (épitopes 1, 2, 3, 4, 5, etc..)–>collection du sérum–>anticorps polyclonaux contre l’antigène A (épitopes 1, 2, 3, 4, 5, etc..)
Soit:
Prendre sang d’un chien (sérum du chien contient anticorps de chien)–>Purification des IgG–>Immunization d’un lapin avec anticorps du chien–>collection du sérum du lapin qui contient anticorps “anti-chien”
Les espèces animales les plus utilisées:lapin, mouton, chèvre, souris (volume réduit), rat (volume réduit)
Utilisation ou non d’un adjuvant
Expliquer la production d’anticorps monoclonaux. (4)
- Innoculation d’un souris avec l’antigène A
- Collection de la rate de la souris (produise beaucoup de cellules B
- Culture de cellules B/cellules tumorales hybride spécifiques à un épitope
- Reproduisent à l’infinit et produisent des anticorps contre un seule épitope.
Nommer les principales différences entre les anticorps polyclonaux et les anticorps monoclonaux (variabilité entre les lots de production, utilisation d’animaux, standardisation d’un test)
Comment est-ce qu’on fait le diagnostic indirect à partir de la détection d’anticorps de l’infection?
Nous détectons le contact au préalable (au moins deux semaines avant ) du patient avec l’antigène utilisé dans le test.
L’antigène utilisé sera responsable de l’interprétation du test
- ->Un antigène spécifique de l’espèce bactérienne: tous les animaux qui développent des anticorps contre l’espèce bactérienne vont donner un résultat positif
- ->Un antigène spécifique de sérotype: tous les animaux qui développent des anticorps contre ce sérotype en particulier vont donner un résultat positif
Comment est-ce qu’on fait une diagnostique d’une infection aiguë à l’aide de la détection d’anticorps?
Deux prises de sang au 2-3 semaines d’intervalle: augmentation
Comment est-ce qu’on fait une diagnostique d’une infection chronique à l’aide de la détection d’anticorps?
Deux prises de sang au 2-3 semaines d’intervalle: stable élevé ou déclin
Comment est-ce qu’on fait une diagnostique d’une infection sous-clinique à l’aide de la détection d’anticorps?
Anticorps sont stable faible en général; on n’utilise pas normalement deux prises de sang
Nommer 3 utilisations pour la détection d’anticorps.
- Diagnostic d’une infection
- Vérification de la réponse vaccinale
- Présence d’anticorps maternels
Comment est-ce que la détection des IgM et ou des IgG nous aide à déterminer le stade de l’infection?
IgM = infecté récamment (première réponse)
IgG = réaction immunitaire + rétarder, deuxième exposition
Vrai ou faux: les IgA sont les anticorps dans les muqueuse chez toutes les espèces.
Faux: les IgA sont les anticorps dans les muqueuse chez toutes les espèces SAUF les ruminants = IgG2.
Nommer 4 substances qui peuvent être utilisé pour le détection d’anticorps.
- Plasma/sérum normalement
- Salive
- Colostrum
- Fluide musculaire
Qu’est ce qu’un tritration d’anticorps?
Effectuer différentes dilutions du sérum (ou matériel à analyser) pour déterminer le niveau d’anticorps présents
–>C’est une mesure comparative (n’indique pas la concentration exacte d’anticorps)
Vous fesez une titration d’anticorps chez un chien pour évaluer de la « quantité » d’anticorps dans son sérum. Voici les résultats:
- ->Aujourd’hui: 1/8
- ->Dans deux semaines: 1/128
Qu’est ce que vous pouvez constater de ses résultats?
–>Aujourd’hui: 1/8
–>Dans deux semaines: 1/128
Augmentation des anticorps présents
Rappel: si le nombre de dilutions augmente et les anticorps sont encores présentes = grande quantité d’anticorps présent dans l’échantillon initial.
Qu’est ce qu’une réaction croisée?
Une réaction d’un anticorps avec un antigène différent de celui qui l’a généré
–> Souvant causé par des épitopes très similaires entre deux antigènes
Ex: Je détecte la bactérie « A » quand je voulais détecter la bactérie « B » OU Je détecte un animal positif en sérologie pour la bactérie « B » (mon test) quand, en réalité, il a été infecté par la bactérie « A »
Qu’est ce qu’un test faussement négatif?
Un test qui ne détecte pas un animal infecté
Qu’est ce qu’un test faussement positif?
Test qui détecte positivement un animal qui est sain (réaction croisée?)
Nommer les deux mesures qui vont donner à un test la capacité à identifier correctement le statut réel des animaux testés.
Sensibilité et spécificité
Qu’est ce que la sensibilité?
Probabilité qu’un individu malade ait un résultat positif avec le test
Un test avec 90% de sensibilité: si l’on teste 100 animaux malades, les chances sont que 90 soient positifs au test
Qu’est ce que la spécificité?
La probabilité qu’un individu sains ait un test négatif. On mesure la capacité du test à détecter les animaux non infectés.
Un test avec 80% de spécificité: si l’on teste 100 animaux sains, les chances sont que 80 soient négatifs au test
Vrai ou faux: En général: plus spécifique est un test, il est aussi moins sensible; plus sensible est un test, il est aussi moins spécifique
Vrai
Nous contrôlons la présence de l’infection contre la brucellose bovine (maladie
exotique) au Canada: test spécifique ou sensible?
Test pour détecter un carcinome terminal chez un chien: test spécifique ou
sensible?
Nous contrôlons la présence de l’infection contre la brucellose bovine (maladie exotique) au Canada: test spécifique ou sensible?
Test pour détecter un carcinome terminal chez un chien: test spécifique ou sensible?
Vrai ou faux: Test de tamisage (« screening test »): très haute spécificité; de fois, faible sensibilité
Faux: Test de tamisage (« screening test »): très haute sensibilité; de fois, faible spécificité
Comparer les anticorps polyclonaux et les anticorps monoclonaux au niveaud de leur sensibilité.
Sensibilité:
Polyclonaux: elevée: on détecte plusieurs épitopes
Monoclonaux: on ne détecte qu’un seul épitope
Comparer les anticorps polyclonaux et les anticorps monoclonaux au niveau de leur spécificité.
Spécificité
Polyclonaux: plus faible –> on peut détecter des épitopes communs avec d’autres pathogènes.
Monoclonaux: élevée –> si l’épitope est spécifique, l’anticorps sera spécifique
Les anticorps polyclonaux sont ____ (plus/moins) susceptibles de présenter une réaction croisée.
Les anticorps monoclonaux sont ____ (plus/moins) susceptibles de présenter une réaction croisée.
Les anticorps polyclonaux sont plus susceptibles de présenter une réaction croisée.
Les anticorps monoclonaux sont moins susceptibles de présenter une réaction croisée.
Qu’est ce qu’un test sérologiques direct? Nommer 3 exemples.
On observela conséquence de la liaison antigène-anticorps à l’œil nu
- Agglutination
- Précipitation
- Fixation du complément
Qu’est ce qu’un test d’agglutination? (5)
Antigène particulés; sur lame ou en tube
Ces tests qualitatifs ou semi-quantitatifs sont basés sur la capacité des anticorps à former des agrégats en présence de leur antigène
Observation (en général) à l’œil nu
Test peu sensible; rarement utilisé pour la détection d’anticorps
Utilisé souvent pour la sérotypie (à partir de cultures pures)
Qu’est ce qu’un test de précipitaiton? (5)
Utilisé quand l’antigène soluble (ex: protéine)
En solution ou (plus souvent) en gel d’agar
La formation d’un précipitât dépend surtout d’un bon équilibre antigène-anticorps
Encore utilisé en médecine vétérinaire
Recherche d’antigènes (sérotypie, pas avec échantillon clinique) ou d’anticorps
Qu’est ce qu’un test sérologique indirect? Donner 3 exemples.
On doit ajouter artificiellement une étape avec un « déclencheur » pour visualiser la réaction antigène-anticorps
- ELISA
- Immunofluorescence
- Immunoblot
Nommer quelques caractéristiques du test ELISA. (5)
ELISA = Enzyme-linked immunosorbent assay
C’est le test sérologique le plus utilisé en médecine vétérinaire
Sensible et souvent spécifique
Facile à transformer en kit commercial
Adapté à être utilisé à grande échelle (plusieurs tests au même temps)
Détection d’anticorps et d’antigènes (capture)
Qu’est ce qu’un conjugué? On l’utilise dans quel test?
L’ELISA (détection d’anticorps) à besoin d’un conjugué
Un « conjugué » est un anticorps produit chez une espèce (exemple: lapin) contre les anticorps de l’espèce d’intérêt (exemple: chien)
Ces anticorps vont reconnaître la présence d’anticorps (contre n’importe quoi) chez le chien
On lie cet anticorps à un agent rapporteur (qui va donner un signal visible: « conjugué » ):
– Une enzyme + substrat/chromogène = couleur
Nommer les étapes d’un test ELISA pour la détection d’anticorps (7).
- Dépôt d’antigène dans le puit (ex: antigène A)
- Lavage pour éliminé l’excès
- Sérum du patient est ajouté (contient les anticorps anti-A)
- Lavage pour éliminé l’excès
- Conjugué à un agent rapporteur (anticorps lapin anti IgG du patient)
- Lavage pour éliminé l’excès
- Ajout de substrat chromogène (soit couleur libérer ou immunofluorescence)
Nommer les 5 étapes de l’ELISA sandwich pour la détection d’antigènes.
- Coating avec un anticorps anti-antigène (ex: anti-Shiga toxin)
- Suspension fecal contenant la toxine
- Anticorps DÉJÀ marqué avec l’enzyme (aussi anti-Shiga toxin)
- Substrat/Chromogène
- Couleur
Vrai ou faux: le test ELISA sandwich peut être utilisé pour la détection d’anticorps exceptionnellement.
Vrai, c’est le cas pour le SNAP combo pour détecté les anticorps au virus d’immunodéficience félne dans le sérum, le plasma ou le sang entier félin.
Expliquer les étapes du test ELISA par compétition (si animal est positif). (7)
Si animal à des anticorps présents (ex: anticorps contre mycoplasma)
- Anticorps monoclonale contre mycoplasma déjà marqués avec un enzyme est mis dans les puits avec antigène
- LAVAGE
- Ajout du sérum du porc positif pour la maladie
- Lavage
- Anticorps du sérum du porc rentre en compétition avec les anticorps monoclonale contre mycoplasma déjà marqués = sérum gagne –>plus grande affinité pour l’antigène
- Réaction négative avec le substrat
- Pas de couleur = échantillon positif
Expliquer les étapes d’un test ELISA par compétition (animal négatif) (7)
Si animal à des anticorps présents (ex: anticorps contre mycoplasma)
- Anticorps monoclonale contre mycoplasma déjà marqués avec un enzyme est mis dans les puits avec antigène
- LAVAGE
- Ajout du sérum du porc négatif pour la maladie
- Lavage
- Anticorps du sérum du porc rentre en compétition avec les anticorps monoclonale contre mycoplasma déjà marqués = anticorps monoclonaux gagne car sérum ne contient pas d’anticorps
- Réaction positive avec le substrat
- Couleur = échantillon négatif
Quand est-ce qu’on utilise l’immunoblot ou “western blot”?
L’immunoblot est un test compliqué, long et fastidieux qui agit comme un test de confirmation suite à un ELISA positif.
–>Test de détection d’anticorps
Patient positif en sérologie pour l’agent infectieux « A » (si positif avec agent « A »: des graves conséquences…)
– ELISA positif: notre antigène contient plusieurs protéines…réaction croisée? Vrai positif?
– On veut confirmer que l’anticorps de l’animal a été généré contre la protéine très spécifique de l’agent « A »…et pas contre un autre protéine de l’agent « B »
Est-ce qu’on peut faire un immunoblot en clinique?
Non, les sérums sont envoyés souvent dans un laboratoire plus sophistiqué
–> Test ELISA est souvent fait dans la clinique
Le labo possède déjà l’antigène de l’agent infectieux « A »
Le principe du test ELISA…revient avec l’immunoblot
