Cours 9 Flashcards
quelle est la théorie fondamentale de la biologie moléculaire?
L’adn est transcrit en ARNm dans le noyau. l’ARNm quitte le noyau et sera transcrit en protéines par les ribosomes. On passe donc d’information codées sous forme d’Acide nucléique a de l’information codé sous forme d’Acide aminé
quels sont les deux tests de criblage génétique?
le test Classique et le test inversé
la méthode de criblage classique permet-elle de tester des hypothèses?
Non, elle permet de générer des hypothèses et d’identifier les gènes importants pour un
phénotype biologique
Quel est le rôle de la méthode de criblage inversé?
Sélectionner un gène et on détermine les
phénotypes qui surviennent en son absence + évaluer des hypothèses
complétez:
le criblage inversé s’effectue sur —1-alors que le criblage classique s’effectue sur-2—
1) 1 gene a la fois
2) des miliers de genes a la fois
dans quel type de criblage le phénotype est connu et la séquence est inconnu?
criblage classique
dans le criblage inverse on a un phénotype —1- et une séquence -2—
1)inconnu
2_connue
comment distingué un phénotype normal d’un phénotype anormal chez des organismes modele dans une études?
en mesurant le phénotype grâce au criblage classique
quels sont les types de mutagenèses ?
chimique, par irradiation(uv a haute intensité) et par insertion (transposon)
Quels effets provoque une mutagenèse par irradiation?
provoque des ruptures dans l’ADN double brin et génère des grandes délétions de morceaux du chromosome ou réarrangements chromosomiques.
quels sont les avantages et désavantages d’une mutagenèse par les UV?
Avantage: Facile à cartographier par l’examen cytologique des chromosomes Désavantage: Souvent ne sont pas limités à des gènes uniques. Pas approprié pour la mutagenèse d’échelle fine
la mutagénèse chimique provoque quoi?
provoque des mutations ponctuelles (un seul nucléotide)
quels types de mutations la mutagenèse chimique provoque?
non-sens, faux sens et des les régions non codée
c’est quoi le résultat de muter une séquence non-codée
on va influencer les éléments régulateurs et l’epissage
quelles sont les 6 étapes du criblage classique?
1) élaboration d’un test afin de mesurer le phénotype
2) mutagenese des larves\oeufs
3) dépistage pour un phénotype anormal
4) test de complementation, 5)localiser le gene, 6) cloner le gene
comment dépister un phénotype anormal?
1)je commence par produire des centaines ou milliers de mutants.2) je vais évaluer chacun par un test de phénotype
donnez un test de phénotype que je peux faire chez le ver de terre
ex:est ce que le verre de terre fait des mouvements sigmoïde quand il se déplace ou non.
quelles souches dois-je garder dans un criblage classique?
pour effectuer le test de dépistage de phénotype anormal je dois garder TOUTES LES SOUCHES QUI DONNENT UN PHÉNOTYPE ANORMAL.
quel est le rôle du test de complementation?
il permet de déterminer si les mutations identifiées sont uniques ou non par des croisement
dans quelle étape du criblage classique on effectue une analyse de linkage?
à l’étape 5)localiser le gene
si deux phénotypes different se trouvent souvent dans la meme souche, cela veut dire quoi?
cela veut dire que les deux gene du phénotype sont en lien (analyse linkage)
comment déterminer la localisation du gene dans le génome?
en suivant le transposon et en faisant une analyse linkage
c est quoi le rôle du criblage inversé ?
déterminer le rôle d’un gene connu dans un certains phénotype.
comment fait-on un criblage inversé?
en perturbant un gene par knockouts ou genome editing pour déterminer son rôle selon le phénotype observé après la perturbation.
quels sont les types de criblage?
criblage classique, inversé, in silice, moléculaires
Je veux comparer un séquences protéiques ou une séquence d’un gene pour savoir si elle est conservé entre toutes les espèces. quelle approche utiliser? quelle outil utiliser?
je dois utiliser le criblage in silice donc la methode bio-informatique. Pour ce faire, je vais utiliser le logiciel BLAST.
c’est quoi Ensembl?
c est un logiciel dans lequel tout le génome des organismes modele ont été séquences au complet. il met l’accent sur les analyses génomique, alignement des séquences et homologies entre les genes
quelles techniques utiliser dans le le criblage moléculaire?
1) high-throughput strategy
2) biopuce a ADNc
3) criblage ARN interférence
c’est quoi la high-throughput strategy?
permet d’utiliser un logiciel ou un robot pour accélère l’expérience de criblage moléculaire
c’est quoi le rôle des biopuces à ADNc?
Analyser l’expression des gènes en réponse aux conditions environnementales, ou temporelle.
quel est le principe des biopuce a ADNc?
des sondes d’ADN sont sur plaque et elles s’hybride à l’ADN
c’est quoi la différence entre un criblage a ARN interférence et un knockout?
dans le criblage a ARN interférence je DIMINUE l’expression de genes pour regarder l’effet de cette diminution d’expression sur un phénotype particulier. Cependant dans le knockout j’INACTIVE le gene.
comment diminue l’expression d’un gene dans la technique de criblage a ARN interférence?
le lien d’une sonde ARN à l’ARN dans la cellule va former un ARN double brin qui est reconnu et qui est clivé.
comment quantifier l’expression des genes?
par qRT-PCR (qPCR) qui permet de faire une analyse quantitative d’ARNm. laquantification se fait par quantification de fluorescence qui est proportionnelle aux produits amplifiés par pcr.
comment la fluorescence est mesuré dans un qPCR?
Une sonde contient un raporteur fluorescent inactif qui lie une séquence spécifique d’adn. durant le pcr la sonde est clivé et la fluorescence est révélé. a chaque cycle d’amplification on a plus de fluorescence
comment fait on du clonage?
en créant un vecteur peut contenir une séquence d’ADN d’intérêt isolé
quel est le but du clonage?
Un processus qui vise à faire plusieurs copies d’ADN d’intérêt
c’est quoi le marquer de sélection qu’on utilise dans un vecteur de clonage?
gene de resistance pour un antibiotique
quelles sont les caractéristiques du vecteur de clonage?
1) réplication autonome(origine de réplication)
2) possibilités de combiner le vecteur avec d’autres morceaux d’adn( marqueur de sélection et sites d enzymes de restrictions)
quelle est la différence entre un vecteur de clonage et un vecteur d’expression?
un vecteur de clonage est répliqué mais PAS EXPRIMÉ. le vecteur de clonage est répliqué aussi ET PEUT ETRE EXPRIMÉ
de quoi ai je besoin pour exprimer un vecteur d’expression?
j’ai besoin d’un promoteur approprié. et de mettre celui-ci dans des bactéries
comment s’assurer que les bactéries ont incorporer le vecteur?
seules les bactéries ayant incorporer un vecteur avec un gene de résistance à la penicilline par exemple vont proliférer dans un milieu de culture contenant l’antibiotique(pénicilline par exemple).
quel est le sens de déplacement de l’an lors d’une l’ectrophorese?
de la cathode (-) vers l’anode (+)
completez:
la migration de l’an dans un champ électrique est—-au—–paires de bases
1) inversement proportionnel
2) au logarithme du nombre
à quoi sert l’électrophones?
séparer les nouveaux fragments d’ADN d’intérêt
comment estimer la quantité d’ADN sur après une electrophorese?
on peut estimer la quantité d’ADN en comparant la bande d’intérêt avec une quantité connue de marqueur

comment purifier mon ADN d’intérêt?
1)Purification chimique d’ADN à partir de bactéries
2)Kits
quelles sont les étapes de purification d’an avec des colonnes
1) Lyse avec alkali
2) Neutralisation
3) Précipitation de protéines
4) Récupération d’ADN avec silice
5) Élution d’ADN
le silice des colonnes de purification est de quelle charge?
positive
quel est le rôle du séquensage de sanger?
son rôle est d’identifier la séquence d’ADN par une méthode qui ressemble au PCR, cependant la chaine se termine par un nucleotide fluorescent(ou radioactif)
la fluorescence dans le séqiensage de senger est détecté de quelle manière?
par chromatographie. chaque couleur correspond a une base
le séquensage de senger représente-il la seule façon de trouver la séquence de monADN d’intérêt?
NON, hybridation des acides nucléiques aussi le permet(in situ,northern blot, southern blot)
