Cours 9

Question 1

quelle est la théorie fondamentale de la biologie moléculaire?

Answer 1

L’adn est transcrit en ARNm dans le noyau. l’ARNm quitte le noyau et sera transcrit en protéines par les ribosomes. On passe donc d’information codées sous forme d’Acide nucléique a de l’information codé sous forme d’Acide aminé

Question 2

quels sont les deux tests de criblage génétique?

Answer 2

le test Classique et le test inversé

Question 3

la méthode de criblage classique permet-elle de tester des hypothèses?

Answer 3

Non, elle permet de générer des hypothèses et d’identifier les gènes importants pour un
phénotype biologique

Question 4

Quel est le rôle de la méthode de criblage inversé?

Answer 4

Sélectionner un gène et on détermine les

phénotypes qui surviennent en son absence + évaluer des hypothèses

Question 5

complétez:

le criblage inversé s’effectue sur —1-alors que le criblage classique s’effectue sur-2—

Answer 5

1) 1 gene a la fois

2) des miliers de genes a la fois

Question 6

dans quel type de criblage le phénotype est connu et la séquence est inconnu?

Answer 6

criblage classique

Question 7

dans le criblage inverse on a un phénotype —1- et une séquence -2—

Answer 7

1)inconnu

2_connue

Question 8

comment distingué un phénotype normal d’un phénotype anormal chez des organismes modele dans une études?

Answer 8

en mesurant le phénotype grâce au criblage classique

Question 9

quels sont les types de mutagenèses ?

Answer 9

chimique, par irradiation(uv a haute intensité) et par insertion (transposon)

Question 10

Quels effets provoque une mutagenèse par irradiation?

Answer 10

provoque des ruptures dans l’ADN double brin et génère des grandes délétions de morceaux du chromosome ou réarrangements chromosomiques.

Question 11

quels sont les avantages et désavantages d’une mutagenèse par les UV?

Answer 11

Avantage: Facile à cartographier par l’examen cytologique des chromosomes 􏰁 Désavantage: Souvent ne sont pas limités à des gènes uniques. Pas approprié pour la mutagenèse d’échelle fine

Question 12

la mutagénèse chimique provoque quoi?

Answer 12

provoque des mutations ponctuelles (un seul nucléotide)

Question 13

quels types de mutations la mutagenèse chimique provoque?

Answer 13

non-sens, faux sens et des les régions non codée

Question 14

c’est quoi le résultat de muter une séquence non-codée

Answer 14

on va influencer les éléments régulateurs et l’epissage

Question 15

quelles sont les 6 étapes du criblage classique?

Answer 15

1) élaboration d’un test afin de mesurer le phénotype
2) mutagenese des larves\oeufs
3) dépistage pour un phénotype anormal
4) test de complementation, 5)localiser le gene, 6) cloner le gene

Question 16

comment dépister un phénotype anormal?

Answer 16

1)je commence par produire des centaines ou milliers de mutants.2) je vais évaluer chacun par un test de phénotype

Question 17

donnez un test de phénotype que je peux faire chez le ver de terre

Answer 17

ex:est ce que le verre de terre fait des mouvements sigmoïde quand il se déplace ou non.

Question 18

quelles souches dois-je garder dans un criblage classique?

Answer 18

pour effectuer le test de dépistage de phénotype anormal je dois garder TOUTES LES SOUCHES QUI DONNENT UN PHÉNOTYPE ANORMAL.

Question 19

quel est le rôle du test de complementation?

Answer 19

il permet de déterminer si les mutations identifiées sont uniques ou non par des croisement

Question 20

dans quelle étape du criblage classique on effectue une analyse de linkage?

Answer 20

à l’étape 5)localiser le gene

Question 21

si deux phénotypes different se trouvent souvent dans la meme souche, cela veut dire quoi?

Answer 21

cela veut dire que les deux gene du phénotype sont en lien (analyse linkage)

Question 22

comment déterminer la localisation du gene dans le génome?

Answer 22

en suivant le transposon et en faisant une analyse linkage

Question 23

c est quoi le rôle du criblage inversé ?

Answer 23

déterminer le rôle d’un gene connu dans un certains phénotype.

Question 24

comment fait-on un criblage inversé?

Answer 24

en perturbant un gene par knockouts ou genome editing pour déterminer son rôle selon le phénotype observé après la perturbation.

Question 25

quels sont les types de criblage?

Answer 25

criblage classique, inversé, in silice, moléculaires

Question 26

Je veux comparer un séquences protéiques ou une séquence d’un gene pour savoir si elle est conservé entre toutes les espèces. quelle approche utiliser? quelle outil utiliser?

Answer 26

je dois utiliser le criblage in silice donc la methode bio-informatique. Pour ce faire, je vais utiliser le logiciel BLAST.

Question 27

c’est quoi Ensembl?

Answer 27

c est un logiciel dans lequel tout le génome des organismes modele ont été séquences au complet. il met l’accent sur les analyses génomique, alignement des séquences et homologies entre les genes

Question 28

quelles techniques utiliser dans le le criblage moléculaire?

Answer 28

1) high-throughput strategy
2) biopuce a ADNc
3) criblage ARN interférence

Question 29

c’est quoi la high-throughput strategy?

Answer 29

permet d’utiliser un logiciel ou un robot pour accélère l’expérience de criblage moléculaire

Question 30

c’est quoi le rôle des biopuces à ADNc?

Answer 30

Analyser l’expression des gènes en réponse aux conditions environnementales, ou temporelle.

Question 31

quel est le principe des biopuce a ADNc?

Answer 31

des sondes d’ADN sont sur plaque et elles s’hybride à l’ADN

Question 32

c’est quoi la différence entre un criblage a ARN interférence et un knockout?

Answer 32

dans le criblage a ARN interférence je DIMINUE l’expression de genes pour regarder l’effet de cette diminution d’expression sur un phénotype particulier. Cependant dans le knockout j’INACTIVE le gene.

Question 33

comment diminue l’expression d’un gene dans la technique de criblage a ARN interférence?

Answer 33

le lien d’une sonde ARN à l’ARN dans la cellule va former un ARN double brin qui est reconnu et qui est clivé.

Question 34

comment quantifier l’expression des genes?

Answer 34

par qRT-PCR (qPCR) qui permet de faire une analyse quantitative d’ARNm. laquantification se fait par quantification de fluorescence qui est proportionnelle aux produits amplifiés par pcr.

Question 35

comment la fluorescence est mesuré dans un qPCR?

Answer 35

Une sonde contient un raporteur fluorescent inactif qui lie une séquence spécifique d’adn. durant le pcr la sonde est clivé et la fluorescence est révélé. a chaque cycle d’amplification on a plus de fluorescence

Question 36

comment fait on du clonage?

Answer 36

en créant un vecteur peut contenir une séquence d’ADN d’intérêt isolé

Question 37

quel est le but du clonage?

Answer 37

Un processus qui vise à faire plusieurs copies d’ADN d’intérêt

Question 38

c’est quoi le marquer de sélection qu’on utilise dans un vecteur de clonage?

Answer 38

gene de resistance pour un antibiotique

Question 39

quelles sont les caractéristiques du vecteur de clonage?

Answer 39

1) réplication autonome(origine de réplication)
2) possibilités de combiner le vecteur avec d’autres morceaux d’adn( marqueur de sélection et sites d enzymes de restrictions)

Question 40

quelle est la différence entre un vecteur de clonage et un vecteur d’expression?

Answer 40

un vecteur de clonage est répliqué mais PAS EXPRIMÉ. le vecteur de clonage est répliqué aussi ET PEUT ETRE EXPRIMÉ

Question 41

de quoi ai je besoin pour exprimer un vecteur d’expression?

Answer 41

j’ai besoin d’un promoteur approprié. et de mettre celui-ci dans des bactéries

Question 42

comment s’assurer que les bactéries ont incorporer le vecteur?

Answer 42

seules les bactéries ayant incorporer un vecteur avec un gene de résistance à la penicilline par exemple vont proliférer dans un milieu de culture contenant l’antibiotique(pénicilline par exemple).

Question 43

quel est le sens de déplacement de l’an lors d’une l’ectrophorese?

Answer 43

de la cathode (-) vers l’anode (+)

Question 44

completez:

la migration de l’an dans un champ électrique est—-au—–paires de bases

Answer 44

1) inversement proportionnel

2) au logarithme du nombre

Question 45

à quoi sert l’électrophones?

Answer 45

séparer les nouveaux fragments d’ADN d’intérêt

Question 46

comment estimer la quantité d’ADN sur après une electrophorese?

Answer 46

on peut estimer la quantité d’ADN en comparant la bande d’intérêt avec une quantité connue de marqueur


Question 47

comment purifier mon ADN d’intérêt?

Answer 47

1)Purification chimique d’ADN à partir de bactéries

􏰀 2)Kits

Question 48

quelles sont les étapes de purification d’an avec des colonnes

Answer 48

1) Lyse avec alkali
2) Neutralisation
3) Précipitation de protéines
4) Récupération d’ADN avec silice
5) Élution d’ADN

Question 49

le silice des colonnes de purification est de quelle charge?

Answer 49

positive

Question 50

quel est le rôle du séquensage de sanger?

Answer 50

son rôle est d’identifier la séquence d’ADN par une méthode qui ressemble au PCR, cependant la chaine se termine par un nucleotide fluorescent(ou radioactif)

Question 51

la fluorescence dans le séqiensage de senger est détecté de quelle manière?

Answer 51

par chromatographie. chaque couleur correspond a une base

Question 52

le séquensage de senger représente-il la seule façon de trouver la séquence de monADN d’intérêt?

Answer 52

NON, hybridation des acides nucléiques aussi le permet(in situ,northern blot, southern blot)