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NSC 2003 > Cours 10 > Flashcards

Cours 10 Flashcards

1
Q

Quelles sont les avantages d’utiliser la culture cellulaire? (5)

A
  • Simplifier l’environnement
  • CondiIons d’expérimentaIon plus faciles à contrôler
  • Réduire les interacIons avec d’autres organes qui pourraient
    exercer des effets sur les cellules d’intérêt.
  • Performer en parallèle plusieurs expériences avec un nombre exact
    de cellules: difficiles in vivo
  • Plus rapide, moins dispendieux et requiert un plus petit nombre
    d’animaux que les expériences in vivo
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Q

Quelles sont les trois types cellulaires qui sot utilisés en culture cellulaire?

A
  • lignées de cellules immortalisées
  • Culture primaire
  • Cellules souche
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Q

Les neurones en culture sont-il capable d’établir des contacts synaptiques?

A

oui.

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4
Q

Qu’est-ce qu’une lignées de cellules immortalisées?

A

Neurones qui sont modifier pour toujours se multiplier. ce sont souvent des lignées cancereuses.

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5
Q

Qu’est-ce qu’une lignées de culture primaire?

A

on prend les neurones (de l’hippocampe par exemple) d’un embryon et on les met en culture. Donc tissu directement prélevée de l’animal.

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6
Q

Quelles sont les composantes que l’on peu utiliser pour recouvrir le plastique ou le verre pour l’adhésion de nos neurones (4)?

A
  1. Acides aminés (exerce attraction cell)
  2. Lysine (exerce attraction cell)
  3. Collagène (matrice extracell)
  4. Lamine (matrice extracell)
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7
Q

Pourquoi est-ce important de garder nos température du référgirateur a 4?

A

Parce que sinon les microtubules se dégradent.

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8
Q

Quelles sont les avantages d’utiliser des lignées cellulaires immortalisées? (6)

A
  1. très bien caractérisées
  2. homogènes et population génétiquement identique
  3. plus facile que cellules primaires
  4. plus robustes
  5. poussent rapidement
  6. possible de produire une lignée qui exprime de façon permanente une protéine fusionnée à un tag fluorescent
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9
Q

Vrai ou faux : les lignées PC12 sont idéales pour étudier les dendrites.

A

Faux, elles n’ont pas de dendrites, elles ont seulement des axones.

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10
Q

Vrai ou faux : il est nécessaire d’ajouter du sérum aux cultures de neurones

A

Faux, on peu ne pas en utiliser si on utilise un milieu défini avec des facteurs de survies bien précis.

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11
Q

Quelles sont les inconvénients de la culture primaire? (3)

A
  • Survie limitée (15 jours)
  • L’âge de l’animal à laquelle les cellules sont prélevées influence la santé et la robustesse des cellules.
  • Peut etre plus hétérogènes que les lignées immortalisées
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12
Q

Quelles sont les trois types de cultures primaires?

A
  • cultures dissociées
  • explants
  • cultures de tranches de tissu
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13
Q

Quelles sont les trois catégories de stratégie utilisés pour introduire de l’ADN dans une cellule?

A
  1. physique : bille d’or
  2. chimique : liposomes
  3. vecteurs viraux
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14
Q

Que veut dire transfection?

A

Fait référence a une méthode non-virale pour introduire de l’ADN dans une cellule

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15
Q

Que veut dire le terme infection (dans le cas de la méthode d’introduction de gènes)?

A

Signifie que l’ADN est introduit par un vecteur virale. Les virus s’attachent a la cellule pour injecter de l’ADN

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16
Q

Quelles sont les rois facteurs qui déterminent la sélection de la stratégie pour introduire de l’ADN dans une cellule?

A
  1. Environnement cellulaire
  2. Type cellulaire
  3. Le but de l’expérience
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17
Q

Par quoi les différentes stratégie d’introduction d’ADN se distingue?

A
  1. le nbr de cell qui prendront l’ADN
  2. Le niveau d’expression du gène
  3. L’expression dans le temps
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18
Q

Quelles sont les trois méthodes utilisés pour introduire l’ADN physiquement dans les cellules?

A
  1. Microinjection
  2. Électroporation
  3. Biolistique
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19
Q

Quelle est l’un des désavantages ds méthodes physique d’introduction d’ADN?

A

Peuvent créer des dommages et ultimement la mort cellulaire.

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20
Q

Qu’est-ce que la méthode de microinjection?

A

on injecte les cellules une a une avec une pipette de verre aidée par un micromanipulateur et un microscope

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21
Q

Est-ce que la microinjection est souvent utilisée pour les neurones?

A

Non, car il est très difficile d’injecter les neurones et ils sont très fragiles.

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22
Q

Pourquoi la microinjection est fait dans les neurones de lamproie?

A

Car ils ont de très gros neurones

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23
Q

Qu’est-ce que l’électroporation?

A

Impulsion électrique formant des pores aux niveau de la cellule laissant entrer l’ADN migrant vers l’anode. Une fois l’ADN entrée, le champs est enlever et donc les pores disparaissent et l’ADN restent donc dans la cellule.

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24
Q

La méthode d’électroporation est utilisée pour incorporer l’ADN de facon invitro ou invivo?

A

Les deux.

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25
Q

Quels sont les avantages de l’électroporation? (4)

A
  1. Transfecter plusieurs types cellulaire invivo et invitro
  2. Possible de varier l’expression du gène en variant la force et le patterne du champs
  3. on peu dcider de quelle couche neuronale trasnfecter en choisisant une période spécifique embryonnaire
  4. tmps de l’injection peu etre controler
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26
Q

Qu’est-ce que la biolistique?

A

Transfert de gène par particules en utilisant un fusil a gène.

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27
Q

Est-ce que la biolistique permet de transfecter les cellules invivo?

A

NON, (sauf si foie ou peau)

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28
Q

Quel est l’incovénient majeur de la biolistique?

A

Elle peu causer des domages importants aux cellules, on doit avoir une optimisation.

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29
Q

Quelle est la seule méthode fonctionnant avec les neurones humain pour les transfecter?

A

La biolistique

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30
Q

Comment fonctionne généralement l’introduction de l’ADN par méthode chimique?

A

L’ADN forme des macrocomplexes avec un produit chargé positivement qui se fixent a la membranes et vont donc être endocyter ou fusionner avec la membrane.

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31
Q

Est-ce que la méthode chimique est efficace invivo?

A

nop.

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32
Q

Quelle sont les méthodes de transfection invivo pour les neurones? (2)

A
  1. méthode physique : électroporation. (on ne peu mentionner la microinjection, car elle n’est pas tellement utiliser pour les neurones)
  2. Infection par vecteur virale.
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33
Q

Combien de temps dure l’expression des gènes introduit par la méthode chimique?

A

Elle est transitoire (quelques jours a quelque semaines)

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34
Q

Quelles sont les produits chimiques les plus utilisée pour la transfection? (2)

A
  1. Lipides

2. Phosphates de calcium

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35
Q

Comment fonctionne la transfection par phosphate de calcium?

A
  1. Solution de chlorure de calcium est mélanger a l’ADN (source d’ions calcium)
  2. On ajoute du tampon HEPES (source de phosphate)
  3. Les ions de calcium chargé + et les ions de phosphates - forme précipité fin
  4. Les ions de calcium font précipité l’ADN
  5. Le précipité est ajoutés aux cellules
  6. Les cellules endocyte (pt?) et le précipité
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36
Q

Quel est le désavantage de la transfection par phosphate de calcium par rapport a celle des lipides?

A

Elle est plus difficile (le pH doit etre extremement précis pour que la transfection fonctionne)

37
Q

Est-ce que la transfection par phosphate de calcium fonctionne dans les tranche de tissu?

A

NON EXCLUSIVEMENT POUR LES CELLULES EN CULTURE

38
Q

Est-ce que la transfection par phoshate de calcium est un bon choix pour les neurones?

A

NOP.

39
Q

Est-ce que la transfection par lipides est un bon choix pour les neurones?

A

OUI, SAUF POUR NEURONES HUMAINS

40
Q

Est-ce que la lipofection fonctionne pour les tranches de tissu?

A

Non, les techniques de transfection chimique fonctionne SEULEMENT pour les CULTURE cellulaires

41
Q

L’infection par vecteur viral peut etre fait invivo ou invitro?

A

Les deux :-)

42
Q

Qu’est-ce qui est modifier dans les virus pour permettrent l’expression seulement du gène d’intéret (2)

A
  1. Elle ne peuvent plus proliférer dans l’hote

2. Sa région codante est remplacer par le gène d’intérêt.

43
Q

Qu’est-ce que la transduction?

A

Processus d’utiliser un vecteur viral qui ne peu pas se mutliplier pour introduire l’ADN dans la cellule.

44
Q

Qu’est-ce que l’adénovirus associée?

A

Virus créer pour ne plus se multiplier, pouvant seulement transducter la cellule hôte et nécessitant un virus helper pour se diviser. Il peu s’intégrer dans le génome.

45
Q

Quand est-ce que les cellules commencent a exprimer les gènes infecter par les virus?

A

Environ 7 a 14 jours.

46
Q

En fonction de quoi varie les différents vecteurs viraux ? (5)

A
  1. efficacité d’infection
  2. niveau d’expression
  3. période d’expression
  4. toxicité cellulaire
  5. préférence de la cellule hôte.
47
Q

Qu’est-ce que l’adénovirus et quelle est l’incovénient de son utilisation?

A

Virus pouvant infecter les cellules en division et les cellules post-mitotiques comme les neurones. Par contre, ils peuvent induire la mort par l’inflammation.

48
Q

Quelles sont les désavantages de l’adénovirus associé? (2)

A
  1. production laborieuse

2. peu contenir adn de seulement 5kb.

49
Q

Quelle est la particularité avec le lentivirus?

A

Virus qui a un génome ARN plutot que ADN et donc est nommé rétrovirus. Il possède une transcriptase et donc produit adn a partir de l’ARN

50
Q

Quelles sont les virus a ne pas intégrer l’ADN dans le génome de la cellule hôte? (2)

A
  1. Adénovirus

2. Herpes simplex (bien qu’il peu tout de même produire une expression a long terme).

51
Q

Est-ce que le lentivirus est capable d’infecter les cellules mitotique et post-mitotique?

A

yes

52
Q

Quelle est la grosseur de l’ADN que peu contenir le lentivirus?

A

8kb comme le HIV.

53
Q

Quelle est le virus neurotrophique ciblant naturellement les neurones?

A

le HSV : virus herpes simplex

54
Q

Quelle est l’avantage du virus herpes simplex? (1)

A
  1. On peu introduire de large partie d’ADN (100-200 kb)
55
Q

Quelles sont les désavantage du virus herpes simplex? (3)

A
  1. Difficile a produire
  2. Hautement infectieux donc un risque (expérimentateur)
  3. peu etre toxique pour les cellules.
56
Q

Pourquoi est-ce que la confluence doit etre garder a l’entour de 90% pour les cellules en culture?

A

Pour éviter que notre transfecteur devienne toxique.

57
Q

Par quoi diffère les différents milieux de culture cellulaire? (3)

A
  1. pH
  2. concentration de nutriments
  3. présence de facteurs de croissance.
58
Q

A combien doit etre le pH des milieux de culture cellulaire ?

A

7.4 (pH physiologique)

59
Q

A quoi sert le 5% CO2 des milieux cellulaire?

A

Permet de maintenir le pH a sa valeur de 7.4

60
Q

Quelle sont les incovéninents d’utiliser des cellules d’une lignés cellulaire immortalisée? (2)

A
  1. Elles ne sont pas normales, elles expriment un pattern de gènes qui n sont pas retrouver invivo.
  2. Caractéristique modifié après un certain temps de prolifération (nouvelles mutations)
61
Q

Quelle lignée est souvent utilisée pour étudier les mécanismes des neurones? (2)

A
  1. PC12

2. cellule de neuroblastomes

62
Q

Que sont les PC12?

A

lignée cellulaire immortelle qui avec l’ajout de NGf peuvent se différentier de facon reversible en neurones synthétisant des catécholamines, dpomaine et la norépinephrine.

63
Q

Qu’est-ce que la culture primaire permet de faire comme expérimentation? (4)

A
  1. Examiner propriétés electrophysiologique
  2. visualisé propriétés dynamiques
  3. voir la fonction
  4. utiliser des agents pharmacologiques.
64
Q

Comment sont fabriquer les culture primaire de cellules dissociés?

A

On prélève une zone que l’on va ensuite dissociés mécaniquement et enzymatiquement afin d’obtenir une suspension homogène de cellules pour ensuite les mettre en culture.

65
Q

Vrai ou faux : les neurones mis en culture dissociés retiennent l’identité de la région, leur morphologie et les propriétés moléculaires de l’endroit ou ils ont été prélevée.

A

Vrai.

66
Q

Quelle est le type de culture qui est souvent utilisée pour étudier la différentiation dendritique et axonale ?

A

Les cultures primaires de neurones dissociés.

67
Q

Qu’est-ce que l’immunopanning?

A

Technique permettant d’isoler une population bien précise : un Ac est attaché a la surface du prétri pour capturer une population de cellule bien précise.

68
Q

Quelles sont les désavantages des cellules dissociés de culture primaires? (3)

A
  1. Perte d’organisation et de connexion
  2. Petite quantité de cellules limitant les études biochimiques
  3. culture peuvent etre non-homogènes. (avec cellules gliales)
69
Q

Avec quel instrument sont produite les tranches de culture primaires?

A

Vibratome.

70
Q

Qu’est-ce qu’une tranche aigue?

A

Tranche de culture utilisée immédiatement pour des expériences électrophysiologiques.

71
Q

Quelles sont les deux types de cultures de tranches ?

A
  1. Aigue

2. Organotypique

72
Q

Que permettent d’étudier les culture de tranches organotypique?

A
  1. Permettent d’étudier la migration neuronale, formation de l’axone et des synapses.
73
Q

Quelle est l’avantage des cultures de tranches par rapport au technique invivo?

A

Permettent d’avoir accès a des structures sous-corticales profonde et difficile d’accès.

74
Q

Qu’est-ce que sont les cultures d’explants?

A

Préparation intermédiaires entre les cellules dissociés et les tranches. Donc on a n’a pas la structure complète.

75
Q

Vrai ou faux ; l’organisation précises n’est pas conserver dans les explants.

A

Vrai, même si ils contiennent la meme composition cellulaire que le tissu invivo.

76
Q

Est-ce que les explant nécessite une surface d’échange gazeux comme pour les tranches?

A

non.

77
Q

A quoi servent souvent les culture d’explant? (2)

A

étude de la migration neuronale et la formation de neurites.

78
Q

Selon quoi sont classer les cellules souches? (2)

A

Selon leur source : embryonnaire, adulte ou pluripotentes induites
Selon le tissu d’ou elle proviennent : neurales, peau, hématopoietique.. etc.

79
Q

Qu’est-ce qu’une culture de cellule souche?

A

Culture de cellules pluripotentes provenant d’un adulte, embryon ou pluripotentes induites. elles peuvent se diviser continuellement. Ex : cellules neurales peuvent produire des astocytes, oligo, neurones ou d’autres cell souche neurales. Elles peuvent se différentier a cellules unipotente (progénitrice)

80
Q

Qu’est-ce qu’une cellule pluripotente induites (iPSC)?

A

Cellule différentié qui a été isolée d’un organisme et qui a subit des changement pour retrouver sa pluripotentialité

81
Q

Dans quoi doivent etre cultivée les celluules souches ?

A

milieux contenant des facteurs de croissances (EGF et bFGF) afin de préserver leur multipotence et leur habitlité a se renouveler.

82
Q

Vrai ou faux : les cellules souches embryonnaires pluripotentes peuvent produire tous les tissus d’un organisme.

A

Vrai.

83
Q

Ou sont isolée les cellules souches neurales chez l’adulte ? (2)

A
  1. Zone sous-granulaire du gyrus denté dans l’hippocampe

2. Zone sous ventriculaire qui forme le mure des ventricules latéraux.

84
Q

Si on prend des cellules souches neurales (SNC) et que l’on n’ajoute pas de facteurs de croissances, en quoi vont-elles se différentier?

A

en astrocytes, oligodendrocytes et neurones.

85
Q

Quelles sont les deux caractéristiques des cellules souches neurales qui peuvent etre testée en culture pour etre certain qu’elle ne sont pas des cellules progénitrices? (2)

A
  1. Habileté a produire les trois types de cellules neurales.
  2. Habileté a produire d’autres cellules souches neurales. (neurosphères secondaires)
86
Q

Quelles sont les différentes stratégies utilisés pour créer des iPS? (2)

A
  1. utiliser des virus pour introduire 4 facteurs de transcription spécifiques dans des cellules somatiques pour qu’elle est le comportement de cellules souches.
  2. Combinaison de virus et manipulations chimiques afin de convertir des cellules somatiques en cellules pluripotentes.
87
Q

Comment vérifie t’on que les cellules souches iPS sont bien des cellules souches? (3)

A
  1. On examine le profil de facteurs de transcription avec IHC et RT-PCR
  2. On les force a se différentier en un type précis
  3. Examiner si elle sont capable de générer des souris chimères.
88
Q

A quoi servent les co-cultures?

A

Permettent de voir comment chaque culture affecte le comportement de l’autre.

NSC 2003 (9 decks)

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