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NSC 2003 > Cours 7 > Flashcards

Cours 7 Flashcards

1
Q

Quelles sont les trois grandes étapes de la préparation des tissus?

A
  1. fixer
  2. envelopper
  3. faire des sections
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Q

Pourquoi faire une fixation du tissu?

A

parce que lors de la fixation on utilise des produtis chimique qui permettent de preserver et stabiliser en désactivant les enzymes protéolytiques et renforcant les interactions moléculaire. La fixation permet aussi d’éliminer les microorganisme responsables de la dégradation des tissus.

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3
Q

nommez deux types d’agents de fixations.

A
  1. cross-liking

2. déshydratation

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4
Q

Qu’est-ce que le cross-liking?

A

la formation de liaison covalente pour permettent la fixation.

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5
Q

Quelles sont les différents type de cross-liking et sont t’il utiliser plus pour la microscopie electronique ou la photonique?

A
  1. la aldéhydes : formaldéhyde, paraformaldéhyde, glutaraldéhyde (microscopie photonique
  2. osmium tetroxide (oxydation) pour la ME
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6
Q

Qu’est-ce que la déshydratation?

A

technique de fixation mettant a profit la perturbation lipidique, réduction de la solubilité des protéines (méthanol ou acétone). Permet de fixer les protéines en place en remplacant l’eau par l’alcool qui “colle” les protéines ensembles.

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7
Q

Comment fixe t’on les tissu (2 modes)

A
  1. immersion (dans un liquide)

2. perfusion transcardiaque (penetration ventriculaire)

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8
Q

Pourquoi enveloppe t’on les tissus? (2)

A

pou stabiliser la structure et faciliter les coupes.

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9
Q

Quelle sont les différentes substance d’enveloppement ? (4)

A
  1. OCT
  2. gélatine
  3. parafine
  4. plastique
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10
Q

Quelles sont les différentes machines utilisée pour faire les section de tissu? (3)

A
  1. microtome
  2. cryostat
  3. vibratome
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11
Q

Mettez en ordre croissant de section d’épaisseur de tranche les différentes machine de coupe.

A
  1. microtome
  2. cryostat
  3. vibratome
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12
Q

Quelle machine les morceau dde tissus doivent absolument etre congelée?

A

cryostat

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13
Q

quelle machines les tissus peuvent etre congelé ou déceongellé pour leur coupe?

A

vibratome

microtome (peut etre congelé aussi)

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14
Q

Quelle machine les tissus peuvent etre couper vivant?

A

vibratome

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15
Q

quelles sont les différents colorant du soma?

A

colorant basophiles

colorant fluorescent

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16
Q

Est-il possible d’identifier les fibres individuelle?

A

NON

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17
Q

Que marquent (précisement) les colorant basophiles?

A

marque le soma en marquant les molécules acides donc l’adn et l’arn dans les noyaux, ribosomes et RER.

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18
Q

nommez trois exemple de colorant basophiles

A
  1. cresyl violet (nissl)
  2. hematoxyline
  3. thionine
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19
Q

Que prefferee les teinture nissl : adn ou arn?

A

arn.

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20
Q

Que permet les teinture basophiliques

A
  1. visualisation des aspects macroscopiques des régions distinctes du cerveau
  2. examen de l’architecture cellulaire
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21
Q

Quelles sont les colorants du soma par fluorescence ? (3)

A

 DAPI

 Hoechst (bisbenzamide)  Propidium iodide

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22
Q

Comment fonctionne les marqueurs fluorescent du somas?

A

marque les noyau par intercalations entre les deux brins de l’ADN

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23
Q

que marque exactement les colorant permettant de visualiser les fibres?

A

marque la myéline.

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24
Q

Quelles sont les différnts colorant de la myéline?

A
  1. fluoromyéline (colorant fluorescent)

2. colorant weil

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25
Q

Que marque la coloration de golgi?

A

Marque complètement des neurones individuels et leurs processus de facon aléatoire.

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26
Q

Quelles sont les deux avantages de la coloration de golgi?

A

◦ Les neurones sont marqué complètement (soma,
axones, dendrites)
◦ Seulement de 5 à 10% des cellules totales sont colorées

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27
Q

Quelle est le désavantage de la coloration de golgi?

A

Ne peut pas contrôler les neurones marqués

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28
Q

Qu’est-ce que le marquage intracellulaire et juxta-cellulaire?

A

technique de marquage selon laquelle on peu marquer des cellules invivov avec de la neurobiotine par exemple lors d’enregistrement cellulaire et par la suite lorsque l’animal sera sacrifier on pourra visualier le meme neurone qui avait été enregistré.

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29
Q

Lors de méthode de marqage des sondes, les sondes sont t-elles visibles en elle-meme ?

A

non elles doivent être couplée avec un marquage ou etre réactif avec d’autres produits chimique pour rendre le produit visible.

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30
Q

Qu’est-ce que la biotine?

A

une molécule soluble marquant les sondes protéines ou anticorps.

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31
Q

Qu’est-ce qu’une sonde?

A

un marqueur qu’on introduit dans un milieu biologique pour que ses propriétés vis-à-vis des constituants de ce milieu soient révélées par l’émission d’un signal détectable par nos instruments de mesure. Cette sonde peu etre un Ac ou un brin antisense d’un adn ou arn.

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32
Q

Qu’est-ce que l’iontophorèse?

A

(ou ionophorèse) est un examen médical utilisant un faible courant électrique afin de faire passer certaines molécules à visée thérapeutique à travers la peau.

33
Q

Comment est visualier la biotine?

A

avec des marqueurs conjugés avec avidine qui eux peuvent ensuite etre visualier en microscopie photonique, fluorescente ou electronique dependant le type de marqueur conjuger a l’avidine.

34
Q

A quoi sert le marquage fluorescent?

A

on peu créer des neurones hybrides qui expriment des protéines fluorescentes comme la GFP ou attacher des fluorophore non protéique a différentes sondes pour les visualier.

35
Q

Qu’est-ce que les quantum dots?

A

un type de fluorophore qui est former de nanocrystaux semi-conducteur et permettant de resister au photobleaching et donc de visualier des cell vivante sur une longue période

36
Q

Que sont les marqueur chromogéniques?

A

Des marqueurs qui font une rxn enzymatique avec un substrat qui produit un composée colorée et visible par microscopie photonique.

37
Q

Quelle sont les différentes exemples de coloration chormogéniques? (3)

A
  1. Horseradish peroxidase (HRP) avec DAB qui donne une coloration brune
  2. B-galactosidase qui réagit avec X-gal donnant une coloration bleu
  3. Biotine avec avidin/stretavidine qui lui est conjuger avec soit HRP ou AP
  4. Digoxigenin qui est détecter avec un anticorps anti-digoxigenin quui est marqué avec une autre enzymes chromogénique
38
Q

Quelles sont les différents marqueur de sonde possible?

A
  1. marqueurs fluorescents
  2. marqueurs chromogénique
  3. marqueurs radioactifs
  4. marqueur d’or
39
Q

Quelles sont les deux avantages du marquage de sonde radioactif?

A
  1. rxn directe maquage1:1

2. utile pour la localisation des Rc, la prolifération et le traffic des protéines

40
Q

Comment est visualier le marquage radioactif?

A

visualier par autoradiographie

41
Q

Qu’est-ce que le marquage par l’OR?

A

permet de visualiser en noir par la ME parce que c’est un matériel dense au electrons.

42
Q

Quelle est la limitation importane de la visualisation des gènes et protéines par hybridation in-situ?

A

on peu savoir ou l’ARNm est exprimer dans le cerveau mais on ne peu pas savoir ou la protéines est exprimer dans la cellule.

43
Q

Qu’est-ce que l’hybridation in-situ permet de visualiser?

A

permet de visualier QUAND et OU un gène spécifique est exprimer soit en invivo et sur cell en culture ou sur tranche

44
Q

Quelles sont les étapes de l’ISH?

A

Il faut connaître la séquence génétique de l’ARNm
Faire une sonde d’acide nucléique simple-brin complémentaire (« anti-sense »)
Marquer la sonde pour la détection (nucléotides radioactifs, etc)
Mettre la sonde avec le tissus: faire un duplex de sonde et ARNm

45
Q

Quelles sont les controles de l’ISH? (2)

A
  1. une sonde sens qui ne devrai pas produire de signal
  2. une sonde antisense pour une autre région du meme ARNm qui devrai produire un signal dans les meme région que notre test initiale
46
Q

Qu’est-ce qu ela technque fish?

A

hybridation in-situ qui est marquer avec de la fluorescence et qui a lieu dans les chormosomes souvent pour marquer les anomalies masi aussi utile pour ls chromosomes.

47
Q

Qu’est-ce que l’immunohistochimie (IHC) ?

A

technique utilisant des anticorps pour marquer une protéines (antigène) spécifiquement dans les TISSUS

48
Q

Qu’est-ce que l’immunocytochimie (ICC) ?

A

technique utilisant des anticorps pour marquer une protéines (antigène) spécifiquement dans les CELLULE

49
Q

Qu’est-ce que l’immunofluorescece (IF)?

A

C’est une imunohistochimie avec la detection de fluorescence.

50
Q

Qu’est-ce qu’un AC monoclonale?

A

un AC qui reconnait une seule épitope d’un antigène.

51
Q

Qu’est-ce qu’un épitope?

A

une région su lantigène qui est reconnue par l’anticorps, les anticoprs peuvent en avoir plusieurs identique ou différents

52
Q

Qu’est-ce qu’un AC polyclonale?

A

un AC qui reconnait plusieurs épitope d’un antigène.

53
Q

Quelles sont les deux méthode de détection des AC en IHC?

A

directe

indirecte

54
Q

Qu’est-ce que la détection directe en IHC?

A

detection dns laquelle notre Ac est marqué par un fluorophore ou une enzyme chromogénique

55
Q

Qu’es-tce que la détection indirecte de l’IHC?

A

détection dans laquelle nous avons un second ac qui reconnait le premier, le second est celui qui est marquée.

56
Q

Que permet la détection indirecte que ne permet pas la primaire

A

une amplification parce que les Ac secondair peuvent reconnaitre plusieurs ac primaires

57
Q

Quelles sont les deux controles fait en IHC pour voir si notre AC est spécifique?

A

cotnrole positif

controle négatif

58
Q

Qu’est-ce que le controle positif en IHC?

A

un spécimen qu’on ait qu,il contientn notre antigène d’interet

59
Q

Qu’est-ce quelles sont les controle négatif en IHC? (3)

A

il ne devrai pas avoir de rxn :

  1. un spécimen qu’on sait qui ne contientn PAS notre antigène d’interet
  2. une pré-incubation Ac-antigène et on met cette mixture avec notre spécimen (IHC direct)
  3. ICH indirect : spéciment incubé sans anticorps primaire et seulement seondaire.
60
Q

Comment voir si on n’a pas de réaction non-spécifique en ICH directe et indirecte?

A

indirecte : mise en présece de notre ac secondaire sans le prmaire dans notre spécimen
directe : mise en présence de notre AC avec un spécimen qui ne contient pas notre antigène.

61
Q

Par quelles facteurs l’ICH peut etre affecté? (4)

A

◦ Méthode de fixation
◦ Concentration d’anticorps
◦ Durée de temps d’incubation de l’anticorps avec le spécimen
◦ Accessibilité de l’antigène

62
Q

Qu’est-ce que l’histochimie enzymatique?

A

C’est la méthode selon laquelle on visualise l’activité d’une enzyme par sa production d’un produit colorée. Le substrat de l’enzyme est donc chromogénique. Exemple la cytochrome oxidase qui permet de voir les neurones qui sont métaboliquement actifs.

63
Q

Que sont les gènes rapporteur? pourquoi les utiliser

A

Un gène non-endogène qui est exprimé et contrôlé par un promoteur indépendant. notre ntéret est de visualiser l’expression spatiale et temporelle d’un gène X (donc a l’aide de son promoteur)

64
Q

Comment visualier les circuit dans le SNC?

A
  1. traceurs antérogrades et rétrogrdes

2. traceurs transynaptique

65
Q

Mais comment les gènes rapporteurs sont visualiser?

A
  1. rapporteur créer des protéines qui peut devenir fluorescent après ecitation avec laser comme PA-GFP (donc phoro activation des protéines)
  2. rapporteur créer des protéines qui change leur émission de vert a rouge quand elle sont activée par un laser.
66
Q

Les traceurs peuvent etre ____ ou ____ ou circuler dans les deux direction

A

rétrograde

antérograde

67
Q

Les traceurs peuvent etre ____ ou ____ pour permettre des les visualiser

A

fluorescent

chromogéniques

68
Q

Traceur antérograde :

A

Devrait être dans le soma et les terminaisons pré-synaptiques des neurones injectés
Indique les zones vers lesquelles ces neurones projettent

69
Q

Traceur rétrograde :

A

Devrait être dans le soma des neurones qui projettent à partir de site d’injection

70
Q

Le traceur doit-il etre injecter invivo ou invitro?

A

Le traceur doit être injecté dans un animal vivant

71
Q

combien de temps il faut attendre avant de voir les traceurs?

A

1 a 7 jours après l’injection invivo.

72
Q

Quelles sont les différents types de traceurs transynaptiques? (3)

A
  1. acide aminée radioactive
  2. lectine
  3. virus
73
Q

Les traceurs transynaptique :

A

◦ Acides aminés radioactifs (3H-proline, 3H-leucine) mis dans
l’environnement local du neurone primaire
◦ Quelques acides aminés sont absorbés par des transporteurs
◦ Dans la cellule, ces acides aminés sont incorporés dans des protéines
◦ Certains traversent l’axone et sont secrétés à la terminaison synaptique et reçus par le neurone de deuxième-ordre
◦ Peut être répété pour marquer un neurone trois-ordre
◦ Détection par autoradiographie

74
Q

ou sont injecter les traceurs trans-synaptique avec acide aminés radioactive?

A

ils sont antérogrades et donc sont mit dans lenvironnement primaire du neurone

75
Q

ou sont injecter les traceurs trans-synaptique avec acide aminés radioactive?

A

ils sont rétrograde et donc son mit dans le milieux axonale du dernier neurone

76
Q

Quelles sont les exemples de virus utiliser pour le trans-synaptique?

A

pseudoraabies virus

herpes simplex virus

77
Q

Quel st l’avatge du traceur viral?

A

◦ Auto-amplification

78
Q

Quelle sont les désavatange des traceurs viraux (3)

A

◦ Peut tuer les neurones
◦ Infection généralisée chez les animaux
◦ La plus longue durée d’infection = le plus beau la marquage - mais les neurones primaires/ secondaires peuvent mourir

NSC 2003 (9 decks)

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