Cours 4 Flashcards
Qu’est-ce que l’electrophysiologie?
le domaine des neurosciences qui explore l’activité électrique des neurones vivants et étudie les processus moléculaires et cellulaires qui régissent leur signalisation.
Quelles sont les 4 ions important pour les propriétés électrique du neurone?
- Na+
- K+
- Cl-
- Ca2+
Si on une ouverture des canaux sodiques au repos, a-t’on un influx ou efflux? Et les canaux potassique? et ceux du chlore?
- Na+ = influx
- K+ = efflux
- Cl- = rien
La pompe sodium-potassium fait entrer et sortir quels ions?
entrer = K+ sortie = Na+
Qu’est-ce que le potentiel de repos du K+?
Moment ou le même nombre net d’ion de K+ entre que ressort de la cellule parce qu’elle est en équilibre electro-chimique.
Quel sont les potentiel electrique a l’équilibre de 1. Na+, 2. K+, 3. Cl- et 4. Ca2+
- +55
- -75
- -60
- +100
Lors qu’on a un ion dont le potentel d’équilibre est positif et qu’on ouvre les canaux pour cette ion, quel sera l’effet (influx ou efflux)
Influx
Lors qu’on a un ion dont le potentiel d’équilibre est négatif et qu’on ouvre les canaux pour cette ion, quel sera l’effet (influx ou efflux)
Efflux
Quel ions créer des PPSE
l’influx de Na+
Quel ions créer un PPSI?
L’influx d’ion de Cl-
qu’est-ce que la trigger zone de l’axone
Zone ou ily a bcp de canaux Na+ voltage dépendant et plus facile d’induire un PA.
Pourquoi en electrophysiologie a t’on un amplificateur?
Parce que sinon c’est trop difficile de voir les potentiel, car ils sont en picovolt.
Qu’est-ce que la perfusion?
des solutions d’electrolyte différentes.
Qu’est-ce que l’ACSF?
une solution cerebrospinale artificielle.
Les microélectrode sont faite de quelle matière en électrophysiologie?
Elles sont fait de verre.
Quelle sera la solution des microelectrode implanter en whole-cell pour le patch-clamp
une solution intracellulaire
Pour les enregistrement extracellulaires, quelle solution seront utilisés (2) ?
- Nacl
2. ACSF
Les enregistrement intracellulaire nécessite quelle type de solution?
2-3M KCL ou k-acétate
Quelle outils permet de preparer des électrode de verre minces?
l’étireur ou puller
Comment fonctionne le puller ou étireur?
On chauffe le bout de verre de l’électrode pour l’éfiller.
Qu’est-ce que le préamplificateur (headstage)
Le préamplificateur est le premier niveau de détection du signal. Il transmet le signal vers l’amplificateur.
La pipette est t’elle directement reliée a au préamplificateur? Si non, dite a quel outil ont fait référence dans ce cas
Non, elle est attacher par le support a pipette qui lui est attacher au préamplificateur.
À quoi sert le microdrive?
Permet de positonner l’électrode dns le tissus
À quoi sert le micromanipulateur? À quoi est-il reliée?
-Relier au microdrive -Permet de diminuer les vibration et la position précise des microelectrodes.
Quelle est le role de l’amplificateur?
Amplifie les signaux du préamplificateur selon les changements imposée par l’expérimentateur.
Qu’est-ce que l’interface analogue digitale?
Un dispositif transformant le signal de l’amplificateur en digital pour l’ordinateur.
Qu’est-ce que l’oscilloscope?
Ancien instrument remplacer par l’ordi qui affichait signal provenant de l’ampli.
Quelle est la fonction de la cage de faraday?
Permet d’isoler le bruit de l’extérieur au poste d’électrophysiologie
Quelles sont les trois différentes préparation in vitro?
- systèmes d’expression hétérologue
- cellules primaires isolées
- transches de cerveau
Nommez deux avantages des enregistrement invitro?
- accès physique et visuelle inégalée de cellules individuelles.
- controle sur la solution du bain.
Comment sont créer les preparations de cellules primaires isolée
on prend un région d’interet (ex cortex) et on fait une culture de neurones dissociés a partir de ceux-ci.
Quelles sont les avanatages de la préparation de cellule primaire isoleés (2)
- Bonne viabilité de cellules pour le patch-clamp. (cell visibles)
- Peu facilemet étudier une protéine endogène (ex canaux)
Quelles sont le désavantage de la préparation de cellule primaire isoleés (1)
- création de nouvelles connexions synaptique entre le neurones.
Quelle sont les avanvantages de la préparation des tranches de cerveau? (3)
- peu étudier le role des neurones dans un circuit.
- enreg. intracell plus facile que invivo
- L’on peu faire exprimer des protéines ectopique (ex avec canon gène)
Quelle est l’avantage de la préparation des tranches de cerveau qui ne peu pas se retrouver dans les deux autres types de préparation
On peu étudier le role des neurones dans un circuit.
on peu aussi faire exprimer des gènes et les comparere avec les gènes endogènes.
Quelle est le maximum de temps pour garder des tranches de cerveu ?
3 semaines
Quelles sont les désavantages des tranches de cerveau (3)?
- visibilité moins bonne que culture cell primaire
- Substance du bain doivent penetrer dans le tissus
- Si culture trop longue = changement des connexion entre neurones.
Quelles sont les trois types e technique d’électrophysiologie?
Enreg. extracell
ereg. intracell (electrode dans soma)
Patchclamp
Qu’est que mesure vraiment les enregistrement extracellulaire?
les potentiels de champs locaux (somme de l’activité de nombreux neurones)
Quelles l’avantage (1) et le désavantage des enrg.(1) extracell?
- Facile a faire
2. Ne peu pas mesurer les evenement sous-seuil d’une cellule.
Que va t’on voir des graphique d’enregistrement cellulaire extracell en comparaison avec les intracell.
Excactement l’inverse.
Dans le graph de l’extracell, pourquoi as-ton une diminution du potentiel et après une augmentation de celui-ci?
les canaux Na+ s’ouvre on a une influx et donc on perd le potentiel parce que on change de direction. Si on ouvre les canaux potassique on a un efflux de potassium dans la cellule et donc on prend du potentile
Dans les enregistrement extracellulaire, que représente l’amplitude de la vollé afférente (A)
la réponse présynaptique
Dans les enregistrement extracellulaire, que représente l’amplitude de C ?
la réponse post-synaptique
Dans les enregistrement extracellulaire, que représente le delai entre A et C
le temps de diffusion des neurot.
Si l’on mesure l’effet d’une drogue et qu’on a diminution de A dans les enregistrement, as-ton une drogue affectant le pré ou postsynaptique?
affectant le pré.
Qu’est-ce qu’un enregsitrer sharp electrode? Comment sera le graphique du potentiel en comparaison avec celui de l’enregistrement extracell.
enregistrement intracell, le graphique sera l’inverse de l’enregistrement en extracell.
Qu’elle est l’avatange de l’enregistre intracell plutot que patchclamp?
Échange minimal entre cytoplasme et pipette
Quelles sont les désavantages de la méthode sharp electrode?
- difficile a réaliser avec petit neurones
2. voltage imposée impossible. (2 electrodes)
Qu’est-ce que le giga-ohm seal?
Resistance forme par le fait qu’il y a un contact étroit entre pipette et membrane.
Quelles sont les 5 configurations d’enregistrement de patchclamp?
- cell-attached
- Whole-cell
- outside-out
- inside-out
- patch perforé
Comment on créer une configuration inside-out avec la pipette?
Mettre pipette en configuration cell-attached et la tirer un peu.
Comment fait on une configuration outside-out?
Mettre en configuration whole-cell et tirer
Qu’est-ce que la configuration de patch perforée?
dans la pipette on a des solution de produit chimique qui font des petit trou dans la membrane qui permettent de mesurer conductance ionique sans fuites.
Quelle milieux peu t’on changer rapidement (bain ou pipette) et comment s’appelle la technique?
le milieu du bain par le fast-step perfusion. (intracell ou extracell selon la configuration de la patch clamp)
Pourquoi doit t’on se dépecher a faire la perfusion?
Pour empeche desensibilisation des récepteur.
quelles sont les avantage de la méthode de cell-attached (3)
- facile
- milieu intracell est intact
- on peu enregistrer un canaux ionique
quelles sont les desavantage de la méthode de cell-attached (2)
pas de controle sur intracell
potentiel membrane pas connu
Pour une recepteur AMPA (recepteur Na+), si le récepteur s’ouvre, verrons nous une délflection vers le bas ou vers le haut dans la I/V curve? Un influx ou efflux?
Vers le bas, influx
Completez : en voltage imposé, un courant positif entrant dans le neurone est toujours tracés ver le ____ Ceci est inverser dans le cas des ions _____
bas.
négatif
Pour une recepteur GABA (recepteur Cl-), si le récepteur s’ouvre, verons nous une délflection vers le bas ou vers le haut dans la I/V curve? un efflux ou influx?
Déflection vers le haut, influx
Comment peut-on être certain que nos electrode sont bien positionner sur notre cellule en patch-clamp
On verifie que l’ordinateur nous indique qu’il y a un giga-ohm seal. (Rt)
Le ratio des resistance Rm/Ra doit etre d’environ combien pour avoir un bonne enregistement?
Environ 10X.
Ra= fragments membranaires
Rm= membrane p.
Quelle est la méthode d’analyse la plus utilisée en électrophysiologie?
La I/V curve.
Qu’est-ce que la I/V curve?
une courbe du courant ionique en focntion du voltage.
La I/V curve peut-elle est produite seulement par un neurone ?
Non elle peu etre produite par un ou plusieurs canaux dans la membrane.
La I/V curve d’un canal non-voltage dependant aura quelle forme?
Elle sera linéaire et on ne vera pas de deflection vers le bas en fonction du voltage.
À quoi ressemblera la courbe I/V d’un récepteur NMDA sans magnésium dans le bain? Pourquoi
une courbe linéaire (donc indépendante de V) si il y a du glutamate dans le bain. Parce que le mg2+ permet au canal d’agir comme un récepteur dépendant du voltage en bloquant le passage des ions.
À quoi ressemblera la courbe I/V d’un récepteur NMDA avec magnésium dans le bain?
On aura une courbe voltage dependante avec deflection vers le bas si il y a du glutamate dans le bain parce que le récepteur est voltage dependant avec du mg2+ bloquant son trou.
Qu’est-ce que sont les evenement miniature spontanée?
Lorsqu’une vésicule ou deux est libérée sans qu’il y ait de PA.
Si l’amplitude des evenement miniature spontanée augmente, notre molécule a t’elle un effet présynaptique ou post-synaptique?
une effet postsynaptique
Si la fréquence des evenement miniature spontanée augmente, notre molécule a t’elle un effet présynaptique ou post-synaptique?
un effet présynaptique
Quelles information nous donne l’évaluation des évenement miniature spontanée?
Nous renseigne de la nature post ou pré synaptique de notre molécule.
Quelles molécules doit-on ajouter dans notre bain pour pouvoir enregistrer des evenement miniature spontanée? en quelle mode on enregistre
du TTX, bloqueur de canaux sodique.
cellule entier, patch clamp
Qu’es-tce que le système d’expression hétérologue?
on fait exprimer des protéines d’intéret dans une source et l’on peu regarder le foncitonnement en electrophysiolgoie. Les sources souvent utiliser sont ovocyte de xénopus, les cellules d’ovaire d’hamster chinois et les cellules de reins embryonaires (HEK 293T)
Quelle est l’avantage de la configuration cellule entière ? (2)
- on peu faire voltage imposée
2. échange entre cytoplasme et solution de la pipette.
Quelle est le désavantage de la configuration cellule entière ? (1)
échange entre le cytoplasme et la solution peu diluer les constituants.
Si l’on veut enregistrer le neurones CA1 en patch clamp, quelle sera notre bain et notre solution dans la pipette
solution intracelle dans la pipette
Bains de ACSF
