cours 6 GPCR Flashcards
quel est le but de la signalisation par GPCRs
elle permet d’amplifier le signal recu;
action directe très rapide
ou
transcription de gènes via translocation d’un FT
quels sont les 3 éléments nécessaires à l’activation des GPCRs
récepteur
GTPase
enzyme+second messager
nommer les étapes d’activation d’une voie ligand-second messager avec GPCRs
1) liaison d’un ligand extracellulaire au récepteur membranaire; va traverser la membrane plasmiquer et provoque un changement de conformation de la protéine G
2) la sous-unité alpha remplace le GDP par GTP; ce qui active la protéine G
3) la sous-unité alpha se dissociée de la sous-unité by et stimule une enzyme; l’adénylyl-cyclase
4) l’adénylyl cyclase convertit l’ATP en AMPc
5) AMPc va activer une protéine kinase (pKa), qui phosphoryle protéines cibles;
6a) phospho des enzymes métaboliques
6b) phosphoryle des FT à l’intérieur du noyau, ce qui modifie l’expression génique
nommer des exemples de processus utilisant des protéines G
-protéine RAN-GTP/GDP pour la translocation nucléaire
-protéines RAB (mouvement des vésicules; associés aux organelles)
-protéines Rho/CDC42 (cytosquelette d’actine)
-Ras (prolifération)
quel est le rôle de GEF au sein des voies de GPCRs
c’est une protéine activatrices des protéines G; elle va catalyser la dissociation de GDP afin de permettre à GTP de se lier à la G-protein
ainsi la G-protein change de conformation et peut activer ses effecteurs
quel est le rôle de GAP au sein des voies de GPCRs
c’est une protéine inhibitrice; elle catalyse la l’hydrolyse de GTP en GDP, afin que la G-protein redevienne inactive
quel est le rôle des RGS au sein des voies de GPCRs
sont responsables de la désactivation rapide des voies de signalisation des récepteurs couplés aux protéines G
elles sont spécifiques à certaines catégories de protéines G
par quoi sont modulés les GPCRs
par GTP et GDP;
ils dictent leur état d’activation
en quoi GTP est essentiel à la conformation de la protéine G
son P permet la liaison des sites de phospho Gly-60 sur switch II et Thr-35 sur switch I
va permettre de maintenir la conformation active
lorsque GDP est lié à la protéine G, qu’arrive-t-il à la conformation
l’hydrolyse du P change les interactions des sous-unités de la protéine;
ne permet plus la liaison entre switch I et switch II
quel est le but de la transduction de signal
elle amplifie le signal recu par un récepteur;
transduction de signal médié par les protéines G passent par un second messager, qui active une kinase, qui activer PLUSIEURS protéines cibles
nommer quelques seconds messagers et leur cible
-AMPc; active PKA
-GMPc; active la protéine kinase G et ouvre des canaux cationiques
-DAG; se trouve sur la membrane, active PKC
-IP3: ouvre des canaux calciques dans le RE
la structure des GPCRs est similaire pour chaque membre;
nommer ses éléments
- boucle extracellulaire; lie le ligand
- 7 hélices transmembranes
- boucle cytosolique; liaison protéine G
comment ecq les interactions entre les aa du récepteur et le ligand peuvent être reproduites
par les agonistes et antagonistes
dépend de si on veut activer ou inhiber la voie de signalisation
nommer les étapes de signalisation d’une voie hormone-effecteur avec protéine G
1) liaison d’une hormone au récepteur membranaire; va provoquer un changement de conformation du récepteur
2) le récepteur activé se lie à la sous-unité Ga de la protéine G
3) la liaison du récepteur actif va causer un changement de confroamtion de Ga; elle remplace le GDP par GTP, stimulée par GEF; ce qui active la protéine G
4) la sous-unité alpha se dissocie de la sous-unité by et du récepteur et stimule un effecteur, qui devient actif
5) le complexe reste actif aussi longtemps que Ga-GTP y reste lié
6) il y aura hydrolyse de GTP en GDP par RGS ou GAP, ce qui dissocie Ga de l’effecteur et le réassocie à Gby; retour à la normale
quelles sont les 2 classes de protéines G
protéines G liant directement le récepteur
protéines G qui ne le lient pas
quel est le facteur régulant le temps d’activité de la protéine G
c’est la vitesse d’hydrolyse; module le switch des états d’activation de la protéine
comme GAP, qui controle le temps que la signalisation soit active
qcq la désensibilisation
c’est la réduction de la réponse observée en présence de ligand ;
il y a réduction du nombre de récepteur présent sur la cellule;
-réduction de la transcription -augmentation de l'endocytose du récepteur -dégradation du récepteur
que font les agonistes, utilité dans le domaine médicale
ils vont induire la signalisation cellulaire
que font les antagonistes, utilité dans le domaine médicale
vont se lier au récepteur, mais ne pas induire la signalisation;
empêche le ligand de s’y lier, inhibe la voie cellulaire
nommer l’agoniste de l’épinéphrine
IP
nommer l’antagoniste de l’épinéphrine
alprenolol
quel est le % de rx ciblant les GPCRs
30% des rx
quel facteur de croissance induit la forme GTP de Rac
PDGF, facteur de croissance des plaquettes
décrire la méthode d’analyse des protéines G; pour mesurer le nombre de GPCRs liées
1) lysat contient des Rac GTP et a été préalablement stimulé pat PDGF
2) on ajoute PAK1 PDB; PAK1 est liée à des billes d’agarose et PDB est un domaine d’activation de kinase
3) on fait le western-blot; seules les protéines Rac-GTP apparaissent, puisque ce sont les seules qui ont été liées au PAK1
comment peut-on mesurer la cinétique de la rx de liaison au GTP
on mesure la fluorescence avec 2 fluorochromes, l’un attaché à Ga, l’autre à Gyb ;; la longueur d’onde du 1er fluorochrome, attaché à Ga, pourra exciter le 2e fluorochrome sur Gybpar transfert d’énergie fluorescente—————————————————————- slmt possible en conformation inactive/trimèrique
à quelle longueur d’onde excite-t-on le premier fluorochrome, CFP, sur Ga
on l’excite à 440 nm; lumière bleu
à quelle longueur d’onde sera émise la fluorescence du 2e fluorochrome YFP sur Gyb après excitation de CFP
il émettra à 527 nm; lumière jaune
qu’arrive-t-il lorsque les 2 fluorohromes sont éloignés, donc en conformation active
CFP ne pourra pas excité YFP dans cette conformation
qu’arrive-t-il si on ajoute de l’AMPc dans la mesure cinétique de transfert d’énergie
AMPc est un agoniste; il va lier des récepteurs et ainsi provoquer une chute de fluorescence, puisque le complexe sera en mode actif, ———————————————————————————– les fluorochromes seront donc trop éloignés pour que CFP excite YFP et qu’on note la fluorescence sur le tableau
comment ecq l’épinéphrine (adrénaline) préprare le corps à un effort ou un stress
ACTIVE LA VOIE HORMONE-2E MESSAGER POUR:
