Cours 6

Question 1

Quels sont les deux types de polymères formés par les acides nucléiques?

Answer 1

ADN et ARN

Question 2

Quels sont les 4 nucléotides de l’ADN?

Answer 2

A, C, T et G

Question 3

Quels sont les 4 nucléotides de l’ARN?

Answer 3

A, C, G et U

Question 4

Quelles sont les 3 propriétés physico-chimiques utilisées pour purifier les acides nucléiques?

Answer 4

1. Polymères dont la taille varie avec le nombre de nucléotides
2. Composés d’une forte charge négative
3. Adoptent une structure double brin (ADN)

Question 5

La charge négative des acides nucléiques joue un rôle à quel niveau?

Answer 5

La solubilité

Question 6

Est-ce que l’ADN est soluble dans l’eau? Pourquoi?

Answer 6

Oui.
1. Molécule très chargée
2. Peu de groupements hydrophobes

Question 7

Quelles sont les conditions qui peuvent affecter la solubilité de l’ADN dans l’eau?

Answer 7

Les concentrations salines et/ou la présence de substances organiques

Question 8

Quelle est la façon habituelle de précipiter l’ADN pour le concentrer ou changer son tampon?

Answer 8

La précipitation à l’éthanol

Question 9

Lorsqu’on fait la précipitation à l’éthanol, quelle composé est-il important d’ajouter et pourquoi?

Answer 9

De l’acétate de sodium pour éviter que les brins d’ADN se sépare

Question 10

Une certaine quantité de sels sera aussi précipité avec l’ADN. Comment peut-on faire pour les enlever?

Answer 10

Des lavages subséquents avec de l’éthanol

Question 11

Quel solvant organique utilise-t-on souvent pour la précipitation de l’ARN?

Answer 11

L’isopropanol

Question 12

Est-ce que les acides nucléiques peuvent migrer dans un gel d’électrophorèse?

Answer 12

Oui puisqu’ils sont chargés négativement

Question 13

Pourquoi est-il plus difficile pour les acides nucléiques de pénétrer dans les gels de polyacrylamide? Quel gel utilise-t-on alors?

Answer 13

L’ADN est de trop grande taille pour passer facilement à travers les pores. On utilise les gels d’agarose pour purifier et analyser les acides nucléiques.

Question 14

Comment prépare-t-on le gel d’agarose?

Answer 14

L’agarose est dissout dans un tampon, puis on le bouilli. Quand il refroidit, il polymérise et forme un gel

Question 15

Quels fragements migrent plus rapidement par électrophorèse?

Answer 15

Les plus petits migrent plus rapidement. (selon la masse moléculaire)

Question 16

On utilise un tampon contenant de l’EDTA lors de la migration des acides nucléiques. Pourquoi? Donne le pH de la solution.

Answer 16

Pour inhiber l’activité des nucléases qui peuvent être présente dans la solution. Le pH du tampon est de 8.

Question 17

Pour colorer les bandes d’ADN dans les gels d’électrophorèse, donne le nom d’un colorant qu’on pourrait utiliser et décrit.

Answer 17

Le bromure d’éthidium (très cancérigène). Les colorants sont des molécules aromatiques cationiques planaires qui s’intercalent entre les bases. Lorsqu’elles sont intercalées, elles fluorescent plus intensément qu’à l’état libre.

Question 18

Vrai ou faux.
Plus la migration d’ADN est rapide, on distingue mieux les bandes sur le gel d’agarose.

Answer 18

Faux. Plus on fait migrer longtemps, on a une meilleure séparation.

Question 19

Si l’on veut faire une chromatographie par échange d’ions, quel type d’échangeur devons-nous utiliser?

Answer 19

Un échangeur anionique puisque l’ADN et l’ARN sont de charge négative (surtout utiliser pour les oligonucléotides=court segment)

Question 20

Dans quelle circonstance ferions-nous une purification d’acides nucléiques par filtration sur gel?

Answer 20

Pour déssaler des oligonucléotides (de 10 à 100 nucléotides)

Question 21

Dans quelle circonstance ferions-nous une purification d’acides nucléiques par chromatiographie d’affinité?

Answer 21

Lorsqu’on veut purifier des ARNm des cellules eucaryotes

Question 22

Quelle est l’utilité de l’ultracentrifugation sur gradient de chlorure de césium?

Answer 22

Pour purifier et séparer l’ADN.

Question 23

La densité de flottaison de l’ADN dans un gradient dépend de quoi?

Answer 23

Sa composition en bases

Question 24

Donne des exemples des résultats de l’ultracentrifugation sur gradient de chlorure de césium.

Answer 24

-Séparation de l’ADN nucléaire de l’ADN mitochondrial ou chloroplastique.
-Séparation des plasmides de l’ADN chromosomal des bactéries.