Cours 6 Flashcards
Quels sont les deux types de polymères formés par les acides nucléiques?
ADN et ARN
Quels sont les 4 nucléotides de l’ADN?
A, C, T et G
Quels sont les 4 nucléotides de l’ARN?
A, C, G et U
Quelles sont les 3 propriétés physico-chimiques utilisées pour purifier les acides nucléiques?
- Polymères dont la taille varie avec le nombre de nucléotides
- Composés d’une forte charge négative
- Adoptent une structure double brin (ADN)
La charge négative des acides nucléiques joue un rôle à quel niveau?
La solubilité
Est-ce que l’ADN est soluble dans l’eau? Pourquoi?
Oui.
1. Molécule très chargée
2. Peu de groupements hydrophobes
Quelles sont les conditions qui peuvent affecter la solubilité de l’ADN dans l’eau?
Les concentrations salines et/ou la présence de substances organiques
Quelle est la façon habituelle de précipiter l’ADN pour le concentrer ou changer son tampon?
La précipitation à l’éthanol
Lorsqu’on fait la précipitation à l’éthanol, quelle composé est-il important d’ajouter et pourquoi?
De l’acétate de sodium pour éviter que les brins d’ADN se sépare
Une certaine quantité de sels sera aussi précipité avec l’ADN. Comment peut-on faire pour les enlever?
Des lavages subséquents avec de l’éthanol
Quel solvant organique utilise-t-on souvent pour la précipitation de l’ARN?
L’isopropanol
Est-ce que les acides nucléiques peuvent migrer dans un gel d’électrophorèse?
Oui puisqu’ils sont chargés négativement
Pourquoi est-il plus difficile pour les acides nucléiques de pénétrer dans les gels de polyacrylamide? Quel gel utilise-t-on alors?
L’ADN est de trop grande taille pour passer facilement à travers les pores. On utilise les gels d’agarose pour purifier et analyser les acides nucléiques.
Comment prépare-t-on le gel d’agarose?
L’agarose est dissout dans un tampon, puis on le bouilli. Quand il refroidit, il polymérise et forme un gel
Quels fragements migrent plus rapidement par électrophorèse?
Les plus petits migrent plus rapidement. (selon la masse moléculaire)
On utilise un tampon contenant de l’EDTA lors de la migration des acides nucléiques. Pourquoi? Donne le pH de la solution.
Pour inhiber l’activité des nucléases qui peuvent être présente dans la solution. Le pH du tampon est de 8.
Pour colorer les bandes d’ADN dans les gels d’électrophorèse, donne le nom d’un colorant qu’on pourrait utiliser et décrit.
Le bromure d’éthidium (très cancérigène). Les colorants sont des molécules aromatiques cationiques planaires qui s’intercalent entre les bases. Lorsqu’elles sont intercalées, elles fluorescent plus intensément qu’à l’état libre.
Vrai ou faux.
Plus la migration d’ADN est rapide, on distingue mieux les bandes sur le gel d’agarose.
Faux. Plus on fait migrer longtemps, on a une meilleure séparation.
Si l’on veut faire une chromatographie par échange d’ions, quel type d’échangeur devons-nous utiliser?
Un échangeur anionique puisque l’ADN et l’ARN sont de charge négative (surtout utiliser pour les oligonucléotides=court segment)
Dans quelle circonstance ferions-nous une purification d’acides nucléiques par filtration sur gel?
Pour déssaler des oligonucléotides (de 10 à 100 nucléotides)
Dans quelle circonstance ferions-nous une purification d’acides nucléiques par chromatiographie d’affinité?
Lorsqu’on veut purifier des ARNm des cellules eucaryotes
Quelle est l’utilité de l’ultracentrifugation sur gradient de chlorure de césium?
Pour purifier et séparer l’ADN.
La densité de flottaison de l’ADN dans un gradient dépend de quoi?
Sa composition en bases
Donne des exemples des résultats de l’ultracentrifugation sur gradient de chlorure de césium.
-Séparation de l’ADN nucléaire de l’ADN mitochondrial ou chloroplastique.
-Séparation des plasmides de l’ADN chromosomal des bactéries.
