Cours 4

Question 1

Qu’est-ce que l’électrophorèse?

Answer 1

La migration d’un ion dans un champ électrique

Question 2

Quelle est la condition pour qu’une molécule puisse migrer dans un champ électrique?

Answer 2

Force électrique (qE) > Force de friction (vf)

Question 3

La vitesse de chaque ion est caractérisée par une mobilité électrophorétique. Quelle est-elle?

Answer 3

u=v/E=q/f

Question 4

Vrai ou faux.
Au point isoélectrique des protéines, la mobilité électrophorétique est à son maximum.

Answer 4

Faux. Elle est presque nulle à q=0.

Question 5

Quel type de méthode électrophorétique est la plus couramment utilisée et à quoi correspond-elle?

Answer 5

L’électrophorèse en zones est une technique dans laquelle l’échantillon est contraint à se déplacer dans une phase solide, comme le papier filtre, la cellulose, ou d’un gel

Question 6

Quels sont les 2 avantages de l’électrophorèse en zones?

Answer 6

1. On élimine largement l’agitation provoquée par la congestion, un facteur limitant du point de vue résolution
2. Cette technique requiert une quantité faible de matériel permettant ainsi la migration des composantes en bandes discrètes

Question 7

Quels sont les 2 gels les plus utilisés pour l’électrophorèse sur gel?

Answer 7

Agarose et polyacrylamide

Question 8

À part la séparation moléculaire basée sur la mobilité électrophorètique, quelle principe exploite l’électrophorèse sur gel? Explique.

Answer 8

La filtration sur gel provoque des espaces pour le solvant entre les billes de gel.

Question 9

Vrai ou faux.
La migration des molécules larges est retardée par rapport aux petites molécules.

Answer 9

Vrai

Question 10

Quel est un autre nom donné à l’électrophorèse en gel de polyacrylamide?

Answer 10

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Question 11

Lors de l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide, quel est le pH de la solution tampon dans le réservoir?

Answer 11

Autour de 9

Question 12

Est-ce que les protéines migrent vers l’anode (+) ou la cathode (-)?

Answer 12

Vers l’anode (+) selon leur ration charge/masse.

Question 13

Vrai ou faux.
Dans l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide, plus le gel est court, plus la définition et la résolution des bandes est mauvaise.

Answer 13

Vrai. Préférable d’avoir un long gel.

Question 14

Afin d’augmenter la résolution des bandes, comment peut-on modifier le gel de polyacrylamide?

Answer 14

En utilisant deux gels dans des tampons différents (gel de séparation et gel de concentration)

Question 15

Quelles sont les particularités du gel de concentration (stacking gel) dans l’électrophorèse en pH discontinu?

Answer 15

Ils surmontent le gel de séparation, il est de plus haute porosité et son tampon a un pH de 2 unités de moins que le gel de séparation.

Question 16

Lorsque le protéines entrent dans le gel de séparation, sont-elles retardées ou accélérées selon leur taille?

Answer 16

Elles sont retardées par l’effet de filtration du gel

Question 17

Les gels SDS-PAGE est la méthode la plus répandue pour déterminer quoi?

Answer 17

La pureté d’une protéine

Question 18

Grâce à quelle élément les savons et les détergents (ex: SDS) sont capables de dénaturer la structure d’une protéine?

Answer 18

Leurs interactions hydrophobes

Question 19

Qu’arrive-t-il aux protéines en présence de SDS?

Answer 19

Les sous-unités de la protéine sont désunies et la chaîne polypeptide de chaque sous-unité adopte une conformation étendue

Question 20

Qu’est-ce qui masque la charge intrinsèque des protéines lors d’une migration SDS-PAGE?

Answer 20

La forte charge négative globale du SDS

Question 21

Vrai ou faux.
En présence de SDS, le rapport charge/masse sera le même pour toutes les protéines de même masse et la séparation électrophorétique du gel avec du SDS dépendra uniquement du phénomène de gel filtration par les pores du gel.

Answer 21

Vrai

Question 22

Quels sont les 2 avantages du gel SDS-PAGE par rapport à l’électrophorèse ordinaire?

Answer 22

1. L’utilisation de SDS dissous les agrégats et les particules insolubles qui peuvent causer des problèmes en bloquant les pores du gel
2. La mobilité électrophorétique possède une relation directe avec le poids moléculaire

Question 23

Quels sont les deux colorants utilisés pour visualiser les bandes des gels d’électrophorèse?

Answer 23

Le bleu de Coomassie brillant, le nitrate d’argent et l’autoradiographie.
L’imunobuvardage (Western blot) est plus spécifique.