Cours 4 Flashcards
Qu’est-ce que l’électrophorèse?
La migration d’un ion dans un champ électrique
Quelle est la condition pour qu’une molécule puisse migrer dans un champ électrique?
Force électrique (qE) > Force de friction (vf)
La vitesse de chaque ion est caractérisée par une mobilité électrophorétique. Quelle est-elle?
u=v/E=q/f
Vrai ou faux.
Au point isoélectrique des protéines, la mobilité électrophorétique est à son maximum.
Faux. Elle est presque nulle à q=0.
Quel type de méthode électrophorétique est la plus couramment utilisée et à quoi correspond-elle?
L’électrophorèse en zones est une technique dans laquelle l’échantillon est contraint à se déplacer dans une phase solide, comme le papier filtre, la cellulose, ou d’un gel
Quels sont les 2 avantages de l’électrophorèse en zones?
- On élimine largement l’agitation provoquée par la congestion, un facteur limitant du point de vue résolution
- Cette technique requiert une quantité faible de matériel permettant ainsi la migration des composantes en bandes discrètes
Quels sont les 2 gels les plus utilisés pour l’électrophorèse sur gel?
Agarose et polyacrylamide
À part la séparation moléculaire basée sur la mobilité électrophorètique, quelle principe exploite l’électrophorèse sur gel? Explique.
La filtration sur gel provoque des espaces pour le solvant entre les billes de gel.
Vrai ou faux.
La migration des molécules larges est retardée par rapport aux petites molécules.
Vrai
Quel est un autre nom donné à l’électrophorèse en gel de polyacrylamide?
PAGE
Lors de l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide, quel est le pH de la solution tampon dans le réservoir?
Autour de 9
Est-ce que les protéines migrent vers l’anode (+) ou la cathode (-)?
Vers l’anode (+) selon leur ration charge/masse.
Vrai ou faux.
Dans l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide, plus le gel est court, plus la définition et la résolution des bandes est mauvaise.
Vrai. Préférable d’avoir un long gel.
Afin d’augmenter la résolution des bandes, comment peut-on modifier le gel de polyacrylamide?
En utilisant deux gels dans des tampons différents (gel de séparation et gel de concentration)
Quelles sont les particularités du gel de concentration (stacking gel) dans l’électrophorèse en pH discontinu?
Ils surmontent le gel de séparation, il est de plus haute porosité et son tampon a un pH de 2 unités de moins que le gel de séparation.
Lorsque le protéines entrent dans le gel de séparation, sont-elles retardées ou accélérées selon leur taille?
Elles sont retardées par l’effet de filtration du gel
Les gels SDS-PAGE est la méthode la plus répandue pour déterminer quoi?
La pureté d’une protéine
Grâce à quelle élément les savons et les détergents (ex: SDS) sont capables de dénaturer la structure d’une protéine?
Leurs interactions hydrophobes
Qu’arrive-t-il aux protéines en présence de SDS?
Les sous-unités de la protéine sont désunies et la chaîne polypeptide de chaque sous-unité adopte une conformation étendue
Qu’est-ce qui masque la charge intrinsèque des protéines lors d’une migration SDS-PAGE?
La forte charge négative globale du SDS
Vrai ou faux.
En présence de SDS, le rapport charge/masse sera le même pour toutes les protéines de même masse et la séparation électrophorétique du gel avec du SDS dépendra uniquement du phénomène de gel filtration par les pores du gel.
Vrai
Quels sont les 2 avantages du gel SDS-PAGE par rapport à l’électrophorèse ordinaire?
- L’utilisation de SDS dissous les agrégats et les particules insolubles qui peuvent causer des problèmes en bloquant les pores du gel
- La mobilité électrophorétique possède une relation directe avec le poids moléculaire
Quels sont les deux colorants utilisés pour visualiser les bandes des gels d’électrophorèse?
Le bleu de Coomassie brillant, le nitrate d’argent et l’autoradiographie.
L’imunobuvardage (Western blot) est plus spécifique.
