Cours 3 Flashcards
Mesurer l’abondance des ARNm comment?
ARNm est instable on peut rien faire avec ca donc
transcriptase inverse (on va rendre ARNm poly adénylé en ADNc grace a une amorce polyT ou amorce aléatoires si l’ARNm n’a pas de queue poly A )
plusieurs méthodes possibles:
- PCR quantitative
SyBR green: détection de la formation D’adn double brin grace au SYBR green un agent intercalant fluorescent lorsque intercallé
PCR en temps réel: fluorescence mesurée à chaque cycle de PCR, un produit fluorescent apparait apres moins de cycles si le produit est abondant dans la phase exponentielle
- Analyse à haut débit du transcriptome par ARN-seq
- purifier ARN d’intéret
2.reverse transcriptase - séquencage a haut débit des ADNc et alignement des séquences au génome
4.mesure du nombre de fois qu’un ADNc associé à un gène donné est séquencé pour quantifier son expression
% des ARN qui sont des ARNm vs ARN ribosomaux dans la cellule
1-5% sont des ARNm
80% sont des ARN r
on retrouve l’uracil à la place de quel nucléo dans l’ARN
à la place du T (thymine) (truc=tu)
ARN est double ou simple brin
généralement simple brin mais des regions complementaires peuvent s’apparier formant des structures 3D complexes (cela change leur fonction)
ARN pol synthetise ..’ vers …’ à partir du brin… qui est …‘-…’
quel brin est pareil au brin d’ARNm
5’ vers 3’
matrice
3’ vers 5’
brin codant
identique ou différent:
les différents types cellulaires expriment habituellement des gènes
le génome des cellules est …
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Transcription continuelle de tous les gènes dans la cellule ?
quels stimulis peuvent activer la transcription de certains genes
10% différents-spécifiques et 90% identiques (ex:genes housekeeping)
identique (à quelques exceptions pres)
non, perte d’energie, on exprime seulement les genes qui code pour les prot necessaire de cette cellule
hormones, stress, dommages, etc…
à quoi servent les genes housekeeping
Fonctions de base de la cellule (croissance, cycle cellulaire, métabolisme)
Certains arnm sont abondants, chaque séquence presente en …. copies par cellules
represente en general moins de … sequences differentes
Certains arnm sont peu abondant, chaque séquence presente en …. copies par cellules
represente en general environ … sequences differentes
1000-10 000
100
moins de 10
10 000
Avantage et desavantage PCR en temps réel
a: facon peu couteuse de mesurer l’expression d’ARN spécifique
d: seulement quelques ARn peuvent etre mesurés à la fois (low throughput)
quelle est la methode pour mesurer l’abondance de l’ARN est la plus utilisé en ce moment
ARN seq
explique l’étape d’initiation de la transcription
Polymérase à ARN et protéines accessoires lient l’ADN. LADN est ouvert pour exposer le brin à transcrire et l’ARN polymérase commence à synthétiser l’ARN
vrai ou faux
LARN pol II peut lier l’ADN seule
FAUX
les régions UTR de l’ARNm ont quelle fonctions
régulent l’ARNm
leur séquence ou la structure quils forment peut influencer la stabilité. traduction, localisation
se fait souvent en liant des protéines
ou commence et se termine la transcription de l’ARNm ?
les ARNm contiennent donc beaucoup de séquences… en plus des introns.
Les UTR font partie des introns ou des exons ?
peut débuter plusieurs kb avant le codon de départ (ATG) et se terminer plusieurs kb après le codon stop
non codante
exons (ils ne sont pas enlevés lors de l’épissage)
l’initiation de la transcription dépend de la liaison de l’ARN pol à …
cette région contient… (2)
quels sont les éléments régulateurs de la transcription qui ne font pas partie de cette région
la région du promoteur
éléments de base et séquences régulatrices
les enhancers et les insulateurs qui sont à distance du promoteur
explique ce qu’est le complexe de pré-initiation (PIC)
l’aRN pol 2 et facteurs de transcription de base se lient aux éléments de base du promoteur pour former le complexe de pré-initiation
Nomme les éléments de base d’un promoteur eucaryote et ou on les retrouves
les promoteurs eucaryotes contiennent diverses combinaisons de ces éléments (pas necessairement tous la )
TSS (transcription start site) : site +1 ou la pol commence à synthétiser ARNm
Boite TATA: +30, seulement presente dans 10-25% des promoteurs parceque souvent seulement dans les gènes régulés (expression dans types cellulaires précis induit par stimuli)
Site BRE: avec boite TATA (amont ou aval)
Inr: englobe le site d’intiation de la transcription, peut fonctionner avec ou sans boite tata
DPE: entre +28 et +32, peut fonctionner avec ou sans boite tata
MTE: peut fonctionner avec ou sans boite tata
combien et quels facteurs de transcription de base se lient à des elements de base du promoteur pour former l’appareil de transcription de base?
la plupart de ces facteurs sont constitués de …
quel est le premier facteur a se lier à divers éléments de base du promoteur et quel est son rôle
6 facteurs : TFIIA, B, D, E, F, H
plusieurs sous-unités (>20 prot au total dans le complex)
TFIID : facilite l’association des autres facteurs de transcription de base, ce qui constitue le complexe de pré-initiation (PIC)
quelle partie de l’ARN pol II est une région essentielle pour la transcription chez les mammifères et pourquoi
la queue Cterminale de la sous unité RPB1 de l’ARN pol II
elle est hypophosphorylée dans le complexe d’initiation et hyperphosphorylé lors de l’élongation
les deux modes d’initiation de la transcription
mode focalisé: transcription débute à un ou peu de sites rapprochés les uns des autres. Souvent promoteurs avec boite TATA: génes dont l’expression est régulée et le niveau de transcription doit etre fort.
Mode dispersé: plusieurs sites faibles d’initiation de la transctiption dans une région 50-100 bp en amont de la séquence codante. Souvent promoteurs sans boite TATA: niveau de transcription plus faible mais constant. Peut inclure des génes housekeeping (plusieurs transcription en mm temps)
EXPLIQUE COMMENT LES DIFFÉRENTS TYPES DE SÉQUENCES RÉGULATRICES PERMETTENT DE RÉGULER L’EXPRESSION D’UN GÈNE
séquences régulatrices lient des protéines qui favorisent (activateurs) ou empêchent (répresseurs) la liaison des facteurs de transcription (TFII…) de base aux éléments de base du promoteurs pour la formation du PIC.
DANS PROMOTEUR:
1)séquences proximales lient des régulateurs protéiques DISTINCTS des facteurs de transcription de base à environ 100 bp en amont du TSS
2)séquences de type silencers lient des represseurs transcriptionnels= inhibent la formation du PIC
HORS DU PROMOTEUR
Enhancers: région régulatrice DISTALE pouvant agir a distance et favoriser ou inhiber l’expression. Situé en amont ou en aval du promoteur
qu’est ce qu’un response element ***
éléments controlant la réponse transcriptionnelle à un signal-stimulus spécifique
Il s’agit d’une séquence dans ou autour des gènes exprimés en réponse à l’activité d’un facteur de transcription particulier
différencie les recepteurs nucléaire de classe 1 et de classe 2 et leurs actions au niveau de la transcription
les deux permettent de moduler la transcription en réponse a un signal spécifique
Classe 1: en absence de ligand, le recepteur est séquestré au cytoplasme
liaison du ligand cause translocation du recepteur au noyau ou il active la transcription
Classe 2: recepteur est constitutivement nucléaire et lie un co-represseur (inhibe la transcription)
la liaison du ligand cause dissociation du co-represseur et liaison d’un co-activateur, ce qui active la transcription
quelle technique permet de quantifier la liaison d’une protéine d’intérêt à une séquence d’ADN
CHIP (chromatin immuno purification)
1)anticorps contre la prot d’intérêt envoyé avec ADN collé à la prot
2)purification des fragments d’ADN associés au facteur d’intérêt
3)analyse de l’ADN par qPCR ou séquencage haut débit
q PCR: permet une analyse ciblée de quelques sites d’intérêt (+ ou- de liaison a ce site)
Chip seq: permet de voir TOUT les sites liés par la protéine d’intérêt à l’échelle du génome