Cours 10 (Signalisation Cellulaire) Flashcards
Décrire simplement l’anémie de Fanconi.
Problème dans le complexe de réparation de bris d’ADN de toutes les cellules
Le réseau du trans-golgi est un quoi?
Centre de triage qui a plusieurs embranchements
Nommez les 3 rôles du système endocytique et de sécrétion.
- Sécrétion de molécules
- Transport de molécules vers différents organites vers la membrane plasmique
- Transport de molécules vers les lysosomes
Décrire les Lysosomes.
Compartiment acide qui permet la dégradation du matériel biologique
Sur quoi repose les Coat protéins (Protéines du manteau)?
Repose sur le principe des GTPase
Le bourgeonnement des molécules repose sur quel concept?
Concept de formation d’un manteau
Décrire le transport de COP2
Protéine du RE qui va vers le Golgi
Antérograde
Décrire le transport de COP1
Transport du Golgi vers le RE
Rétrograde
Pour le transport avec COP1 et COP2, c’est le trans-Golgi ou le cis-Golgi?
cis-Golgi
Que permet SNARE (sommairement) dans le système de transport vésiculaire?
Permet la fusion avec la vésicule et la membrane
NE sert PAS au bourgeonnement
Décrire simplement V-snare
Vésicule SNARE
Décrire T-snare
Sur la membrane cible
La GTPase Sar1 permet quoi?
Permet le début du bourgeonnement vésiculaire de la membrane du RE au cis-Golgi
À quoi set la partie N-terminal hydrophobe du GTP?
S’ancrer dans la membrane et permet le recrutement du manteau
Que permet l’hydrolyse du GTP lors du bourgeonnement vésiculaire?
Permet le relâchement de Sar1 et du GTP
Par rapport au bourgeonnement des cellules, qu’est-ce que ça fait s’il y a une mutation où GTP ne peut pas être isoler, mais il peut se lier à la membrane?
Mutation cause que le manteau ne peut pas se dissocier, donc la vésicule ne peut pas aller se lier et fusionner avec sa cible
Les protéines SNARE permettent quoi?
Permettent la fusion de vésicules avec la membrane
Lorsque le manteau est retiré, qu’arrive-t’il à la GTPase?
GTPase devient accessible et sert d’avoir une interaction spécifique avec un membrane cible et aide à la fusion sur la membrane cible
Décrire en 1 mot VAMP
V-Snare
Décrire en 1 mot Syntaxin et SNAP-25
T-SNARE
Que permet l’interaction de Rab-GTP avec l’effecteur de Rab?
Permet de + en + rapprocher la membrane de la vésicule avec la membrane cible pour mettre de la pression afin de permettre la fusion
À quoi sert la complexe NSF-aSNAP?
Pour défaire la liaison entre le complexe SNARE et la vésicule
Les protéines SNARE et les composantes des COP1 et COP2 permettent quoi?
Permettent le transport entre le RE et le cis-Golgi (Antérograde et rétrograde)
Décrire COP.
Forme la couche extérieure de la vésicule, déterminer le sens du mouvement et inclue plusieurs protéines
Vrai ou faux, il y a formation de vésicules de cargo seulement dans le transport antérograde?
Faux, formation de vésicules de cargo dans le transport antérograde et rétrograde
Pourquoi la cellule a besoin du transport rétrograde?
Nécessaire pour glycosylation des protéines et aussi une façon de moduler l’activité des protéines et pour rapporter la protéine d’activation de signalisation afin de terminer la signalisation puis retourner la protéine à son point de départ.
Qu’est-ce qui change afin de rendre le transport cible au bon endroit?
Rab et GTPase
Nommez une voie inflammatoire impliquée dans la détection de l’ADN.
Voie de cGAS-STING
À quoi sert la production d’interféron dans la voie de cGAS-STING?
Sert à protéger contre les microbes pathogènes et protège des micro-organismes
À quoi sert STING-gas?
Sert à détecter ADN, dont l’ADN de virus
Qu’arrive-t’il si STING-gas détecte de l’ADN?
Si détecte de l’ADN cytosolique, alors il va se changer en dimère et va faire un second messager
STING voyage par quel type de transport?
Par transport antérograde jusqu’au Golgi
Décrire précisément le syndrome COPA.
Maladie qui amène une dérégulation au niveau du système immunitaire et dont les patients présentent une inflammation chronique, hémorragies alvéolaires, pneumopathie interstitielle diffuse et arthrites
Qu’arrive-t’il si STINGest toujours présent?
Production d’interféron et donc d’inflammation donc il ne doit pas être présent en tout temps sinon problème
Par quoi est ramener STING et où il est ramener pour terminer l’activation?
Ramener par COP1 au RE
Les variants a-COP activent quoi?
Activent une réponse Interféron qui est dépendante de STING
À quoi sert la luciférase?
Capable de transformer des substrats en lumière afin de rapporter une activité biologique
À quoi est proportionnel la quantité de lumière émise par la luciférase?
Proportionnelle à l’activité biologique de la cellules
Où est situé le gène de la luciférase pour voir si activité biologique avec STING?
Après le promoteur du gène cible (Interféron)
La voie de signalisation de STING est activée dans quelle circonstance?
Activée en absence d’ADN stimulant avec les mutants de a-COP
Quelle kinase est activé par STING?
TBK1
Qu’est-ce que TBK1 active?
NF-kB
Qu’est-ce que la phosphorylation de TBK1 va causer?
- Phosphorylation de NF-kB
- Production d’interféron
L’expression des mutants de COP induit quoi?
Induit l’expression de gènes de l’Interféron et de gènes inflammatoires
Quels sont les 4 étapes de quantification par RT-qPCR des gènes inflammatoires?
- Modulation de l’expression des gènes
- Augmentation ou diminution d’ARNm
- cDNA (rétro-transcription de l’ARNm)
- qPCR avec amorces spécifiques pour chaque gène
Où sont localisé STING et P-TBK1 quand les mutants de a-COP sont exprimés?
Localisé au Golgi
Décrire mock
Contrôle négatif
Décrire TGN38
Protéine du trans-Golgi
Décrire P-TBK1
Forme phosphorylée et activée de la kinase TBK1
Quand STING est présent dans le Golgi, ça veut dire quoi?
Veut dire qu’il y a signalisation par STING activé au Golgi
Que permet Surf4 et a-COP?
Font partie des molécules du manteau du transport rétrograde
Qu’arrive-t’il s’il y a une perte d’expression de SURF4?
STING va resté dans sa forme active, car problème à faire le transport rétrograde
Production de molécules inflammatoires
Qu’arrive-t’il si un patient atteint d’anémie Fanconi survie après 40 ans?
+ de chances (presque 100%) de développer un cancer
Décrire l’anémie Fanconi.
Perte de cellules souches hématopoïétiques donc pu de formation de cellules souches immunitaire et cellules sanguine donc = Grosse anémie
Quel est le type de mutation présent dans la maladie d’anémie de Fanconi?
Mutation du système de réparation d’ADN
Le syndrome d’anémie de Fanconi est causé par quoi?
Causé par une dysfonction des protéines du complexe FANC
Si un patient est atteint de FA alors quel type de recombinaison il favorise?
Patient favorise la recombinaison non-homologue (donc accumule les mutations d’ADN)
La voie de Fanconi est impliqué dans quoi?
Dans la réparation des dommages à l’ADN, spécifiquement des pontages inter-brins
La voie de Fanconi compte combien de protéines et décrit le un peu?
Compte 23 protéines qui ont différents rôles durant la réparation des dommages à l’ADN
Nommez les 3 autres fonctions des protéines de la voie de Fanconi.
- Cytocinèse
- Autophagie
- Réplication de l’ADN
La voie de Fanconi dirige quoi?
Dirige la réparation des dommages vers la voie de recombinaison homologue qui permet de garder l’intégrité du matériel génétique
Qu’arrive-t’il s’il y a un défaut de la voie de Fanconi?
Dirige les réparations de dommages à l’ADN vers une voie plus mutagénique = la recombinaison non-homologue (NHEJ)
Complétez : NHEJ rassemble les extrémités de la molécule d’ADN brisée par la formation d’un complexe synaptique composé de deux extrémités d’ADN, de deux molécules ______ ______ et de deux molécules d’______. Les extrémités d’ADN non compatibles sont traitées pour former des terminaisons qui se lient, suivies d’une réparation de la cassure par le complexe _____ _____.
Ku70 Ku80
DNA-PK
Des terminaisons
Complexe ligase IV/XRCC4
Complétez : HR utilise un brin ________ sur une chromatide sœur pour réparer avec précision le DSB. Les extrémités de
l’ADN sont d’abord traitées afin de créer des
protubérances simple brin, un processus probablement médié par le complexe ____ (Mre11/Rad50/Nbs1). _____, ____ et RPA s’associent à ces protubérances, suivis par la
formation d’une molécule commune par les brins endommagés et non endommagés. Synthèse d’ADN guidée par modèle et résolution des deux brins puis réparation complète du DSB.
Homologue
MRN
Rad51, Rad52
Quel type de recombinaison utilise la polymérisation de l’ADN?
Recombinaison homologue
Les cellules avec un défaut de la voie de Fanconi activent quoi?
Activent plus fortement p53 en réponse à un agent de pontage de l’ADN
Décrire MMC
Mitomicyn
Induit des pontages inter-brins d’ADN
Décrire PBL
Lymphocytes sanguins
Décrire PHA
Phytohemagglutinin
Stimule la prolifération des lymphocytes
Qu’est-ce qui cause l’aplasie médullaire chez les patients qui ont l’anémie Fanconi?
Manque de globules blancs et rouges, car manque de cellules souches hématopoïétiques
Vrai ou faux, les patients atteints d’anémie Fanconi ont une prédisposition au cancer?
Vrai
Vrai ou faux, les patients atteints d’anémie de Fanconi possèdent une augmentation basale de p53?
Vrai
Décrire FANCD2
Une des protéines de la voie de Fanconi
Pourquoi on fait une analyse par cytométrie en flux des cellules de la moelle osseuse des patients atteints de FA?
Afin de quantifier le nombre de cellules souches hématopoïétiques
Décrire Sca-1 et c-kit
Marqueurs de cellules souches
Pour les cellules souches, LIN doit être + ou -?
LIN-
Décrire les cellules Annexin+ et 7AAD+
Cellules apoptotiques (Cellules mortes ou entrain de mourir)
À quoi sert 7AAD?
Entre dans les cellules mortes et lie l’ADN
À quoi sert Annexin V?
Se lie au phosphatidylsérine
Un défaut de cytocinèse corrèle avec quoi?
Corrèle avec une augmentation de cellules apoptotiques chez les cellules Fanc2-/-
Que provoque la perte de p53 (si on l’enlève)?
Diminution de la mortalité cellulaire
Diminution du % de binucléation des cellules
Décrire CD45.
Marqueur de globules blancs/leucocytes
Qu’arrive-t’il si on enlève p53 des cellules souches hématopoïétiques? (Si pas de FANCD)
Permet la production de beaucoup plus de cellules sanguins et immunitaires
Chez les souris Fancd2-/-, qu’est-ce que la perte de p53 produit?
Réduit significativement la perte des cellules souches hématopoïétiques
MAIS la perte de p53 va accélérer le développement de tumeur
Nommez 3 gènes de la voie TGF-B.
BMP2
SMAD3
PDCD4
Nommez 2 gènes impliqués dans le métabolisme de MMC?
NQO1
NFE2L2
+ Fanca signifie quoi?
Signifie qu’on a réexprimé la forme sauvage de Fanca
Décrire les cellules GM6914
Cellules de patients FA (Fanca)
Décrire shSMAD3
sh : Bloque/réprime SMAD3
Empêche la signalisation du TGF-B
À quoi sert la mitomycine?
À induire des bris dans l’ADN
La signalisation TGF-B nuit à quoi?
Nuit à la prolifération et le maintien des cellules souches hématopoïétiques chez les souris FancD2-/-
Qu’est-ce que la signalisation du TGF-B n’amène pas?
N’amène pas une susceptibilité au cancer comme pour p53, donc la voie TGF-B est mieux
La déplétion de SMAD3 favorise quoi?
Favorise la capacité de prise de greffe des cellules de moelle osseuse FancD2-/-
Lors qu’une transplantation de cellules, les souris ont besoin de quel type de support? Donnez un exemple.
Besoin de cellule de support
Ex. CD45.1
Que veut dire une souris FancD2-/-?
Le “-/-” signifie knock-out homozygote → les souris n’expriment pas du tout la protéine FancD2
Bloquer la signalisation du TGF-B améliore quoi dans les cellules FA?
Améliorer la prolifération cellulaire et la réparation des bris d’ADN des cellules FA
Décrire 1D11.
Anticorps bloquant la signalisation du TGF-B
À quoi sert l’acétaldéhyde?
Sert à créer dommages à l’ADN (de façon naturelle) afin de nuire à la formation et la prolifération cellulaire
Décrire Rad51
Marqueur de la réponse HR (réparation par recombinaison homologue)
Que signifie Pulse?
Signifie que la drogue est ajoutée puis retirée du milieu de culture
Décrire MMC
Mitomycin C
Agent qui fait des pontages d’ADN
