Chapter 2 Étude de la structure microbienne

Question 1

La microscopie optique

Answer 1

• Le microscope à fond clair
• Le microscope à fond noir
• Le microscope à contraste de phase
• Le microscope d’interférence différentielle
• Le microscope à fluorescence

Question 2

La microscopie électronique

Answer 2

• Le microscope électronique à transmission

* Le microscope électronique à balayage

Question 3

Les nouvelles techniques microscopiques

Answer 3

• La microscopie confocale

- La microscopie à balayage de sonde

Question 4

Fixation

Answer 4

Le proceedé par lequel les structure internes et externes des cellules et des organismes sont conservées et fixés en place
A) Fixation à la chaleur
Conserve la morphologie, mais pas les structures. Utilise une flamme
B) Fixation chimique
Pour protéger les structures cellulaires fines et la morphologie. Rend protéines et lipides inactifs, insolubles et immobiles. Éthanol, acide acétique, chlorure mercurique, formaldéhyde, glutaraldéhyde

Question 5

Principe de la coloration

Answer 5

Présence des groupement chromophores qui possèdent des doubles liaisons conjuguées, permet la liaison aux cellules par interaction ionique, covalente ou hydrophobe

Question 6

Colorants qui se fixent par liaisons ioniques

Answer 6

Divisé en deux classes
• Colorants basiques
• Colorants acides

Cette méthode est la méthode le plus couramment utilisé.

Question 7

Les colorants basiques

Answer 7

• Bleu de méthylène
• Fuschine basique
• Cristal violet
• Safranine
• Vert de malachite

Chargées positivement, se fixe aux substances chargées négativement comme les acides nucléiques, des protéines, et la surface des cellules bactériennes, plus efficace à pH élévée

Question 8

Les colorants acides

Answer 8

• Éosine
• Rose Bengale
• Fuchsine acide

Chargées négativement (carboxyles et hydroxyles), liaisons aux structures chargées positivement.

Question 9

Coloration Simple

Answer 9

Un seul agent colorant est utilisé.

Crystal violet, bleu de méthylène et carbolfuchsine sont souvent utilisés pour déterminer la taille, arrangement, etc.

Question 10

Coloration différentielle

Answer 10

L’utilisation de 2 ou plus agents colorants pour afin comparer et distinguer les organismes

• Coloration de Gram
• Coloration Zhiel-Neelson

Question 11

Coloration de Gram

Answer 11

1) Échantillon dans Crystal violet pour 1 min, rincer à l’eau
2) Ajout de l’iode (mordant, augmente int. Entre cellule et colorant, plus de contraste) pour 1 min, rincer à l’eau
3) Ajout de l’alcool (éthanol/acétone) qui décolore les bactéries Gram (–) pour 10-30sec, rincer à l’eau
4) Ajout de Safranine pendant 30-60sec, rincer à l’eau
5) Gram (+) est bleu/violet, Gram (-) est rouge

Question 12

Coloration Ziehl-Neelson

Answer 12

Utilisé pour les bactéries acido-alcoolo-résistante
Mycobactéries
• Ont une paroi qui contient l’acide mycolique
• M. tuberculose, M. leprae
1)Chaleur et phénol pour forcer la fuchsine basique à entrer dans la cellule
2) Ces cellules deviennent acido-alcoolo-résistantes.
3) Bactéries non-acido-alcoolo-résistantes sont décolorés par l’alcool acide et colorées par le bleu de méthylène

Question 13

Coloration par liaisons covalence

Answer 13

Réactif de Schiff- se lie au désoxyribose (de l’ADN)

Question 14

Coloration par interactions hydrophobes

Answer 14

Noir de Soudan

-Coloration des lipides (pas soluble dans l’eau)

Question 15

Coloration des capsules

Answer 15

Coloration négative; les cellules apparaissent claires sur un fond noir

Question 16

Coloration des endospores

Answer 16

-Procédé de Shaffer-Fulton
C’est difficile de décolorer les endospores.
1) Endospores colorées par chauffage des bactéries avec du vert de malachite
2) Les endospores sont ensuite lavés à l’eau, puis contre-colorées à safranine
(savoir la position; centrale, terminales, sub-terminale)

Question 17

Coloration des flagelles

Answer 17

• Épaississement avec de l’acide tannique + et l’alun de potassium
• Méthode de Leifson (utilise aussi pararosaniline)
• Méthode de Gray (utilise aussi la fuchsine basique)

Question 18

Microscope à fond clair

Answer 18

Caractéristiques: L’objet est directement illuminé et apparaît sombre sur un fond plus clair
Application: Organismes avec de fortes différences de contrastes

Question 19

Microscope à fond noir

Answer 19

Caractéristiques: l’objet est fortement éclairé sur un fond noir
Application: Observer des cellules d’organises vivants non colorés. Peut révéler de grandes structures internes de cellules eucaryotes ou de grosses bactéries (Treponema Pallidum agent de la syphilis)

Question 20

Microscope à contraste de phase

Answer 20

C: Convertit de faibles indices de réfraction et de densité cellulaire, en différences d’intensité lumineuse, facilement observables
A:Observer la mobilité microbienne, forme de cellules vivantes, constituants bactériens (endospores, corps d’inclusion), eucaryotes

Question 21

Microscope à contraste d’interférence différentielle (DIC)

Answer 21

C: Deux rayons de lumière plane qui seront combinés après passage à travers l’objet. Leur interférence crée l’image
A: Observer un échantillon vivant en 3D (paroi cellulaires, endospores, granules vacuoles, noyaux de cellules ex) amibe

Question 22

Microscope à fluorescence

Answer 22

C: La lumière permet de former une image grâce à la lumière fluorescente produite par un échantillon coloré par une substance fluorescente (fluorochrome)
A: Identification de bactéries pathogènes après coloration ou après marquages avec des Ac fluorescents
EN écologie ou voir des organismes photosynthétiques
Localisation de protéines spécifiques intracellulaires

Question 23

Microscope à force atomique

Answer 23

C: Donne une image d’une surface

Question 24

Microscope confocal à balayage au laser

Answer 24

C: Le rayon laser balaie l’échantillon et permet avoir une image dont le contraste et la résolution sont d’excellente qualité
A: `Biolofilms

Question 25

Microscope électronique à balayage

Answer 25

C: Balaie la surface de l ‘échantillon avec un faisceau d’électrons et forme une image de cette surface à partir des électrons émis
A: Donne des images 3D (fig.2.27),
Observer des micro-organimses in situ dans leurs niches : peau, intestin, tissus

Question 26

Microscope électronique à transmission

Answer 26

C: Forme une image en faisant passer un faisceau d’électrons à travers un échantillon et en concentrant les électrons dispersés à l’aide de lentilles magnétiques
A: Grossissement x 100 000 (5A 05nm)
Morphologie de virus, flagelles, ADN, forme d’organites

Question 27

Cryotomographie électronique

Answer 27

C: Technique de congélation avec préservation des structures internes
A: Ultra structures de bactéries et d’Archées, moteurs flagellaires, structures associes aux magnétosomes, etc.

Question 28

Microscopie à balayage de sonde

Answer 28

• Microscopie à effet tunnel

- Microscope à force atomique

Question 29

Microscopie à effet tunnel

Answer 29

C: Pointe de la sonde : un atome. Les nuages électroniques de la sonde et de l’objet qui se touchent et les électrons circulent dans un canal étroit (en tunnel)
A: X 100 millions, permet de voir des atones à la surface d’un solide
ADN

Question 30

Microscope à force atomique

Answer 30

C: Déplace une sonde effilée à la surface de l’échantillon, balayer des surfaces qui ne conduisent pas l’électricité
A: Interactions entre protéines, comportement de bactéries, aquaporines membranaires