Biotech : ADN recombinant P2 Flashcards
Qu’est-ce que l’antithrombine III humaine ?
- Anticoagulant
- Glycoprotéine plasmatique
- 432 AA
- PM : 58 200 Da
Quelle quantité d’antithrombine peut on obtenir dans 1 mL de lait de chèvre ?
14 mg
Pourquoi avoir utilisé la chèvre pour produire l’antithrombine recombiné et pas la vache ?
- Quantité suffisante de lait
- Moins de risque de développer des encéphalopathies spongiformes transmissibles
Quelles sont les principales étapes de la production d’antithrombine III humaine recombinée ?
- Clonage du gène ATIII
- Fusion du gène avec promoteur β caséine de chèvre
- Obtention gène fusion
- Injection du gène dans les embryon de chèvre
- Implantation chez chèvres porteuses
Quelles sont les méthodes de purification utilisées pour l’antithrombine III recombinée ?
- Colonne de chromatographie
- Résine échangeuse d’ion
- Colonne hydrophobique
Rendement de l’antithrombine III après purification ?
55 %
Limites de l’utilisation du lait de chèvre pour produire l’antithrombine III recombinée ?
- Glycosylation ≠ → Obtention d’un acide syalique terminal
- Présence d’une séquence NANA ET NGNA → Potentiellement création d’AC anti-NGNA si tt réitéré
Qu’engendre la création d’un acide syalique terminal sur l’antithrombine III recombinée ?
- Clairance augmenté
- Demie vie divisée par 9
Définition d’un AC ?
Protéine complexe utilisées par le système immunitaire pour détecter et neutraliser les agents pathogènes de manière spécifique
Caractéristiques des AC ?
- Glycoprotéines
- Famille des immunoglobuline
- Forme d’ “Y”
Structure des AC ?
- 2 chaines lourdes + 2 chaines légères
- Chaque chaine possède :
- une partie variable
- une partie constante
- Liaison entre les chaines légère et lourdes par des pont dissulfures
Quand et par qui à été inventé la première méthode de création des AC monoclonaux ?
1975 → Köhler et Milstein : Création de l’hybridome
Qu’est-ce que l’hybridome ?
LB fusionné avec des cellules murines du myélome
Pourquoi l’hybridome utilise des cellules de myélome ?
Pour obtenir la capacité de multiplication éternelle → création d’AC à l’infini
Par quoi est caractérisée l’évolution des AC totalement murins vers des AC totalement humanisés ?
Baisse de l’immunogénicité et augmentation de la durée d’action et de l’efficacité
Quels sont les différents types d’AC monoclonaux développés ?
AC :
* Cytotoxiques
* Antagonistes
* Neutralisants
* Utilisés comme vecteur
But des AC cytotoxiques ?
Détruire un cible cellulaire
Comment fonctionnent les AC cytotoxiques ?
Interaction avec le système du complément ou les cellules effectrices → cytotoxicité dépendante du complément
Rôle des AC antagonistes ?
Fixation sur une molécule membranaire spécifique → inhibition de la liaison du ligand et/ou sa voie de signalisation
Quelles sont les cibles de AC neutralisant ?
AG solubles ou viraux
Quels sont les type d’AC neutralisant existant ?
AC neutralisant :
* Les toxines bactériennes
* Des virus (préventif)
* D’autres toxines → venin, digitaliques, ..
Autre nom des AC en tant que vecteurs ?
AC Immuno-conjugués
Utilisation des AC en tant que vecteurs ?
Porteur de substances actives
Quelles sont les caractéristiques que doivent porter un AG pour être une “bonne” cible pour un AC utilisé comme vecteur ?
- En nb suffisant en surface des cellules
- Expression de l’AG la + spécifique possible
- Doit être internalisée par la cellule
Quelles sont les différentes parties que l’on retrouve dans les AC immuno-conjugués ?
- AC monoclonal
- Linker
- Agent cytotoxique
Caractéristiques de l’AC monoclonal servant de vecteur ?
Spécifique d’un AG associé à une tumeur
Qu’est-ce qu’un linker ?
Relie l’AC à la molécule cytotoxique
Que permet le linker ?
Libération de l’agent cytotoxique directement au niveau de la cellule cible
Définition d’un vaccin ?
Préparation antigénique induisant une réponse immunitaire spécifique d’un agent pathogène capable de protéger contre l’infection naturelle ou d’en atténuer les conséquences
Quelles sont les technologie “ancienne” de production des vaccins ?
- Croissance chez l’animal
- Culture chez les bactérie puis inactivation
- Croissance sur œufs puis inactivation
Quelles sont les limites des vaccins traditionnels (et de leur production) ?
- Prix
- Atténuation insuffisante
- Réversion possible
- Pb de sécurité lors de la préparation
- Stockage au frais uniquement
- Pb d’allergie
Quelles sont les caractéristiques des vaccins recombinants ?
- Délétion des gènes de virulence
- Clonage du gène correspondant :
→ AG pathogéniques viraux ou non pathogéniques bactériens
→ AG pathogénique dans un vecteur d’expression - Vaccination avec une fraction antigénique
Quels sont les différents types de vaccins recombinants ?
- Sous unité vaccinantes ou vaccin sous unité
- Vaccins atténués
- Vecteurs vaccinants
Comment sont produit les vaccins sous-unitaires ?
Utilisation d’une partie de l’organisme du pathogène suffisante pour induire la réponse immunitaire par liaison des AC à ces protéines
Avantage des vaccins sous unitaire ?
Pas de particule antigénique supplémentaire
Inconvénients des vaccins sous unitaires ?
- Couts
- Risque que la protéine utilisée ne soit pas la même in situ
Que sont les vaccins vivants atténués ?
Utilisation des gènes virulents délétés ou modifiés
Avantage des vaccins vivants atténués ?
Plus efficace que les vaccin inactivés ou sous unité
Principe des vaccins vecteurs vivants recombinants ?
Utilisation d’un vecteurs dans lequel sont insérés les gènes du pathogène
Quels sont les types de vaccins vecteurs vivants recombinants existants ?
- Vecteur viraux réplicatif
- Vecteur viraux non réplicatif
- Vecteur bactérien
Quel est le but des vaccins vecteurs vivants recombinants ?
Apporter les AG ciblés aux cellules immunitaires
Quels sont les moyens de fabrication des vaccins vecteurs vivants recombinants ?
Intégration dans le génome de l’organisme vecteur des gènes codant pour :
* le ou les AG pathogènes
* Une cytokine améliorant la réponse immunitaire
