Autophagie Partie 3 (étude de l'autophagie) Flashcards
Quel est le marqueur autophagique le plus improtant?
LC3, car la lipidation de LC3 à la membrane (LC3-II) augmente la synthèse et diminue la dégradation de l’autophagosomes
Si on ajoute du MEF, que se passe-t-il sur LC3 et pourquoi?
Carence de nutriments, alors accumulation de LC3-II pour autophagier et avoir plus de nutriments
Quel est le cargo autophagique le plus improtant?
P62
Haut = pas d’autophagie
Bas = autophagie, car dégradé
Pourquoi LC3 diminue dans le temps lorsque traité avec MEF WT?
Parce qu’il synthétise pas assez pour la capacité qu’il dégrade
Comment peut-on inhiber la dégradation lysosomale?
KO de ATG5 parce que ATG5 induit l’autophagie
Lorsqu’on ajoute un inhibiteur de dégradation lysosomale, que se passe-t-il sur p62?
Niveau maintenu, parce que dégradation inhibée, donc s’accumule
Qu’implique la hausse de LC3?
Augmentation de la synthèse des autophagosomes et diminution de leur dégradation
Vous avec découvert une nouvelle protéine qui possède un domaine LIR, capable d’interagir avec LC3. Hypothèse : sa stabilité pourrait être régulée par l’autophagie. Comment montreriez-vous que c’est effectivement le cas
Muter et carencer et aller regarder au niveau des changements protéiques de la protéine secrète. Si la carence à aucun effet, c’est un indicatif que l’autophagie est non fonctionnelle à cause de la mutation.
Vous avec découvert une nouvelle protéine qui possède un domaine LIR, capable d’interagir avec LC3. Hypothèse : sa stabilité pourrait être régulée par l’autophagie. Comment montreriez-vous que c’est effectivement le cas
Bloquer l’autophagie et voir si en carence elle change ou pas
Qu’est-ce qu’il est important d’Avoir lors d’expériences pour regarder la fonction de protéines?
Un stimuli pour stimuler le pathway, et un end point pour conclure
En western blot, une drogue X augmente la quantité de LC3-II autant que lorsqu’on expose à bafilomycin A1 (inhibe le flux). Lorsqu’on ajoute drogue X ET bafilo = donne la même chose. Interprète le résultat
Si l’ajout de la drogue X ne change pas le comportement de LC3-II, ça veut dire que son action est semblable. Le flux autophagique est inhibé, donc on a une accumulation de LC3-II qui **????
