ANIMAL CELL CULTURE Flashcards
Hal ini disebut Kultur sel
Ketika sel dikeluarkan dari fragmen organ, sehingga mengganggu hubungan normalnya dengan sel-sel di sekitarnya
Cultures of animal cells are usually divided into 3
classes:
- Primary cells
- Cell strains
- Cell lines
- Ketika sel-sel dikeluarkan melalui pembedahan dari suatu organisme dan ditempatkan ke dalam lingkungan kultur yang sesuai, sel-sel tersebut akan menempel, membelah, dan tumbuh.
- Sebagian besar sel kultur ini memiliki rentang hidup yang terbatas, yaitu 5-10 kali pembelahan secara in vitro.
- Karena rentang hidupnya yang terbatas, seseorang tidak dapat melakukan eksperimen jangka panjang dengan sel-sel ini.
- Banyak peneliti menganggap sel ini lebih mirip secara fisiologis dengan sel in vivo.
Primary Culture
There are two basic methods
for obtaining primary culture:
- Explant cultures
- Enzymatic dissociation
Lebih banyak digunakan
1. Mempercepat proses dengan menambahkan
enzim pencernaan (proteolitik)
seperti … ke fragmen jaringan untuk …
2. Ini menciptakan … yang kemudian ditempatkan
ke dalam wadah kultur yang berisi
media kultur dan dibiarkan tumbuh dan membela
- tripsin atau kolagenase, melarutkan
semen yang menyatukan sel-sel - suspensi sel tunggal
Explant cultures
1. Potongan-potongan kecil jaringan ditempelkan (menggunakan …) ke dalam wadah kultur kaca atau plastik yang telah diolah dan direndam dalam media kultur.
2. Setelah beberapa hari, sel-sel individual akan berpindah dari eksplan jaringan ke …, tempat sel-sel tersebut akan mulai membelah dan tumbuh.
- gumpalan plasma atau fibrinogen
- permukaan wadah kultur atau substrat
Hayflick’s Phenomenon
- Sel akan terus tumbuh dan membelah
secara normal untuk sejumlah lintasan yang terbatas - Ketika sel mencapai titik tertentu
bahkan jika diberi nutrisi yang sesuai, sel akan berhenti membelah dan akhirnya mati - Tampaknya ada korelasi
antara jumlah lintasan maksimal dan penuaan - Jumlah lintasan berkurang
ketika sel diambil dari individu yang lebih tua
- Sel yang telah beradaptasi dengan kultur, tetapi tidak seperti galur sel, memiliki potensi pembelahan yang terbatas.
- Setelah transfer sel primer secara serial, seleksi bertahap dapat terjadi hingga jenis sel tertentu menjadi dominan.
- Jika sel-sel ini terus tumbuh pada tingkat yang konstan selama beberapa kali pergantian
- Sel-sel ini memiliki rentang hidup yang terbatas, yaitu 40-60 kali pembelahan secara in vitro.
- Sel-sel ini berguna dalam produksi vaksin.
Cell Strains
- Jika sel-sel dalam galur sel mengalami proses transformasi (perubahan spontan atau terinduksi dalam kariotipe, morfologi atau sifat pertumbuhan) yang membuat mereka “abadi” (mampu membelah tanpa batas).
- Meskipun peristiwa ini dapat ditiru oleh infeksi virus onkogenik atau paparan karsinogen kimia.
- Sering kali memiliki jumlah kromosom abnormal dan mungkin tumorigenik ketika diinokulasi ke hewan yang rentan.
- Berasal dari tumor sering kali tidak menunjukkan penghambatan kontak (penghambatan pertumbuhan dalam kondisi yang padat), tetapi terus menumpuk.
Cell Lines
Transformation of Cells
- Sel yang diberi perlakuan kimia atau sinar gamma dapat menjadi
- Infeksi virus dengan antigen T SV40 dapat memasukkan …
- Tidak peduli bagaimana transformasi terjadi, hasilnya adalah …
- tak terbatas dengan hilangnya faktor pertumbuhan
- onkogen dan menyebabkan perubahan gen
- sel dengan karakteristik fungsional, morfologi, dan pertumbuhan yang berubah
Cell Culture Systems
1- Suspension cell culture
(Anchorage-independent)
2- Adherent cell culture
(Anchorage-dependent)
- berasal dari sel yang dapat membelah
dan bertahan hidup tanpa terikat
pada substrat, - misalnya sel garis keturunan hemopoietik
- Dapat dipertahankan dalam pembuluh kultur yang tidak diolah dengan kultur jaringan,
- memerlukan pengadukan untuk pertukaran gas yang memadai
- Lebih mudah untuk melewatinya
Suspension cell culture
(Anchorage-independent)
- harus melekat pada suatu permukaan agar dapat bertahan hidup
- Membentuk lapisan tunggal
- misal sel yang berasal dari jaringan yang berbeda (payudara, hati)
- Pertumbuhan dibatasi oleh luas permukaan
- Akan berhenti berkembang biak setelah menyatu (menutupi seluruh permukaan wadah kultur sel)
- Sel dipisahkan secara enzimatik atau mekanis dari permukaan
Adherent cell culture
(Anchorage-dependent)
- Ini adalah waktu setelah subkultur dan penyemaian ulang di mana hanya ada sedikit bukti peningkatan jumlah sel
- Ini adalah periode adaptasi di mana sel mengganti
elemen yang hilang selama tripsinisasi, menempel pada permukaan, dan menyebar
- Lag Phase
