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biomol > analisis de acidos nucleicos > Flashcards

analisis de acidos nucleicos Flashcards

1
Q

primer paso para los estudios de biologia molecular y para las tecnicas de DNA recombinante, secuenciacion, mutagenesis

A

extraccion de DNA

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2
Q

la eleccion del metodo para extraccion del DNA va a depende de:

A
  • tipo de ac nucleico que se va a extraer
  • organismo origen del acido nucleico
  • fuente del acido nucleico
  • tecnica en que se utalizara el acido nucleico extraido
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3
Q

la extraccion del ADN se aplica en ciencias como:

A

medicina forense, bioinformatica, nanotecnologia de DNA e historia y antropologia

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4
Q

pasos para sacar el DNA

A
  • lisis de la celula
  • separacion
  • purificacion
  • precipitacion
  • lavado
  • disolucion
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5
Q

pasos para extraccion de DNA por la tecnica fenol-cloroformo

A
  • lisis de las celulas y liberacion de DNA
  • extraccion de proteinas y lipidos con solventes organicos
  • precipitacion de DNA
  • lavado de DNA
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6
Q

el metodo de columnas es parecido al metodo de:

A

metodo de perlas

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7
Q

en qué consiste el metodo de columnas?

A
  • rompen la celula
  • ponen un filtro que atrae al DNA y quita las proteinas
  • se quita el filtro
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8
Q

para llevar a cabo la cuantificacion del DNA se utilizan las tecnicas:

A
  • espectrofotometria

- fluorometria

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9
Q

en qué consiste la tecnica de espectrofotometria?

A

pasa un haz de luz a traves del DNA y mientras mas luz absorba, mayor concentracion de DNA hay

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10
Q

metodo mas comun para la cuantificacion de DNA

A

espectrofotometria

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11
Q

en que consiste la tecnica de fluorometria?

A

union de colorantes fluorescentes al acido nucleico, absorbe la luz a una determinada longitud de onda y emite una longitud de onda superior

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12
Q

la PCR fue creada por _ en _

A

Mullis en 1986

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13
Q

para realizar una PCR se necesitan:

A
  • secuencia de DNA
  • enzima DNA pol
  • desoxirribonucleotidos
  • primers
  • cofactores para la enzima
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14
Q

DNA pol comercial usada en PCR

A

Taq polimerasa obtenida de una bacteria

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15
Q

desoxirribonucleotidos utilizados en PCR

A

dATP
dCTP
dGTP
dTTP

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16
Q

pH adecuado para la ADN polimerasa

A

8.4

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17
Q

cofactor de la Taq polimerasa

A

cloruro de magnesio

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18
Q

caracteristicas de los iniciadores de la PCR

A
  • se diseñan para cada gen
  • ricos en G y C
  • proporcionan un extremo 3’ para la pol
  • pueden ser forward (5’-3’) o reverse (3’-5’)
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19
Q

fases de la PCR

A
  • desnaturalizacion
  • hibridacion
  • extension
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20
Q

qué sucede en la fase de desnaturalizacion de la PCR?

A

se separan las cadenas de DNA

21
Q

qué sucede en la fase de hibridacion de la PCR?

A

se alinean los primers al extremo 3’

22
Q

qué sucede en la fase de extension de la PCR?

A

la Taq pol actua sobre el complejo templado de primers y agrega dNTPs complementarios para crear cadenas completas

23
Q

temperatura de cada fase de la PCR

A
  • desnaturalizacion: 95º
  • hibridacion: 50-60º (Tm)
  • extension: 72º
24
Q

tipos de PCR

A
  • PCR estandar o punto final
  • PCR multiplex
  • PCR-RFLP
  • RT-PCR (transcriptasa reversa)
  • qPCR o tiempo real
25
Q

PCR mas comun

A

PCR estandar o punto final

26
Q

PCR utilizada para COVID

A

RT-qPCR o RT-PCR tiempo real

27
Q

siempre que hacemos un PCR punto final hacemos una _ despues

A

electroforesis

28
Q

PCR donde solo se amplifica una parte del gen y nos dice si esta o no el gen

A

PCR estandar o punto final

29
Q

PCR utilzada para encontrar 2 o mas segmentos de DNA, nos dice si esta o no esta el gen

A

PCR multiplex

30
Q

PCR que se hace con enzimas de restriccion que corta el DNA e identifica varios segmentos, no solo uno

A

PCR-RFLP

31
Q

PCR que toma un RNA y hace su copia de DNA y ya despues se hace la PCR

A

RT-PCR o transcriptasa reversa

32
Q

la PCR punto final es _ y la PCR tiempo real es _

A

cualitativa

cuantitativa

33
Q

tecnica mediante la cual se separan las moleculas en disolucion cuando se ven sometidas a un campo electrico

A

electroforesis

34
Q

elementos necesarios para una electroforesis

A
  • camara de electroforesis
  • gel de agarosa
  • marcador de peso molecular
  • transiluminadores ultravioleta
35
Q

polisacarido extraido de algas marinas que separa fragmentos de DNA

A

gel de agarosa

36
Q

los segmentos _ de DNA se quedan hasta arriba y los _ se quedan hasta abajo

A

los grandes arriba

los chiquitos abajo

37
Q

la concentracion de agarosa es _ proporcional al tamaño del poro obtenido

A

inversamente

38
Q

son una mezcla de moleculas de DNA o de proteinas de tamaño conocido que permiten determinar por comparacion el tamaño de las moleclulas contenidos en las muestras sometidas a electroforesis

A

marcador de peso molecular

39
Q

mediante esta PCR es posible cuantificar la cantidad de DNA en la muestra

A

PCR tiempo real

40
Q

para el COVID se utilizan _ ciclos de PCR tiempo real

A

45 ciclos

41
Q

elementos necesarios para la PCR tiempo real

A
  • templado o DNA
  • Taq pol
  • desoxirribonucleotidos
  • primers
  • magnesio
  • Buffer
  • agua
  • colorantes
42
Q

los sistema reportero fluorescencia o colorantes pueden ser:

A
  • especificos

- no especificos

43
Q

colorante no especifico mas comun

A

SYBER green

44
Q

colorantes que son sondas fluorescentes de oligonucleotidos con un reportero fluorescente

A

especificos

45
Q

colorantes que son moleculas intercalantes que tienen afinidad por el dsDNA y generan una señal fluorescente

A

no especificos

46
Q

tipos de cuantificacion del DNA

A
  • absoluta

- relativa

47
Q

cuantificacion que permite conocer el numero exacto de copias amplificadas del blanco, mide la concentracion precisa de ac nucleicos en una muestra y mide la carga viral o bacteriana de un tejido

A

absoluta

48
Q

cuantificacion que evalua los cambios en la expresion de genes en distintos estados fisiologicos

A

relativa

49
Q

tecnica que determina la presencia de un gen en una mezcla de acidos nucleicos extraidos con anterioridad

A

tecnica de Southern Blot

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