analisis de acidos nucleicos Flashcards
primer paso para los estudios de biologia molecular y para las tecnicas de DNA recombinante, secuenciacion, mutagenesis
extraccion de DNA
la eleccion del metodo para extraccion del DNA va a depende de:
- tipo de ac nucleico que se va a extraer
- organismo origen del acido nucleico
- fuente del acido nucleico
- tecnica en que se utalizara el acido nucleico extraido
la extraccion del ADN se aplica en ciencias como:
medicina forense, bioinformatica, nanotecnologia de DNA e historia y antropologia
pasos para sacar el DNA
- lisis de la celula
- separacion
- purificacion
- precipitacion
- lavado
- disolucion
pasos para extraccion de DNA por la tecnica fenol-cloroformo
- lisis de las celulas y liberacion de DNA
- extraccion de proteinas y lipidos con solventes organicos
- precipitacion de DNA
- lavado de DNA
el metodo de columnas es parecido al metodo de:
metodo de perlas
en qué consiste el metodo de columnas?
- rompen la celula
- ponen un filtro que atrae al DNA y quita las proteinas
- se quita el filtro
para llevar a cabo la cuantificacion del DNA se utilizan las tecnicas:
- espectrofotometria
- fluorometria
en qué consiste la tecnica de espectrofotometria?
pasa un haz de luz a traves del DNA y mientras mas luz absorba, mayor concentracion de DNA hay
metodo mas comun para la cuantificacion de DNA
espectrofotometria
en que consiste la tecnica de fluorometria?
union de colorantes fluorescentes al acido nucleico, absorbe la luz a una determinada longitud de onda y emite una longitud de onda superior
la PCR fue creada por _ en _
Mullis en 1986
para realizar una PCR se necesitan:
- secuencia de DNA
- enzima DNA pol
- desoxirribonucleotidos
- primers
- cofactores para la enzima
DNA pol comercial usada en PCR
Taq polimerasa obtenida de una bacteria
desoxirribonucleotidos utilizados en PCR
dATP
dCTP
dGTP
dTTP
pH adecuado para la ADN polimerasa
8.4
cofactor de la Taq polimerasa
cloruro de magnesio
caracteristicas de los iniciadores de la PCR
- se diseñan para cada gen
- ricos en G y C
- proporcionan un extremo 3’ para la pol
- pueden ser forward (5’-3’) o reverse (3’-5’)
fases de la PCR
- desnaturalizacion
- hibridacion
- extension
qué sucede en la fase de desnaturalizacion de la PCR?
se separan las cadenas de DNA
qué sucede en la fase de hibridacion de la PCR?
se alinean los primers al extremo 3’
qué sucede en la fase de extension de la PCR?
la Taq pol actua sobre el complejo templado de primers y agrega dNTPs complementarios para crear cadenas completas
temperatura de cada fase de la PCR
- desnaturalizacion: 95º
- hibridacion: 50-60º (Tm)
- extension: 72º
tipos de PCR
- PCR estandar o punto final
- PCR multiplex
- PCR-RFLP
- RT-PCR (transcriptasa reversa)
- qPCR o tiempo real
