8 - RNA

Question 1

Welche Nukleobasen hat die RNA?

Answer 1

Cytosin
Guanin
Adenin
Uracil

Question 2

Welche Nucleobasen hat die DNA?

Answer 2

Cytosin
Guanin
Adenin
Thymin

Question 3

Häufige Methode zur RNA Synthese? Vor und Nachteile?

Answer 3

T7 in vitro Transkription.
Vorteile
\+bekannter prozess
\+leicht
\+schnell
\+reproduzierbar
Nachteile:
-Untere Größenbeschränkung
-geringere ausbeute und Reinheit

Question 4

Wie sind die denaturierungs Konditionen von RNA?

Answer 4

• RNA ist ein instabiles Molekül und hat eine sehr kurze Halbwertszeit, sobald sie aus der Zelle oder dem Gewebe extrahiert wurde.
• RNA ist besonders instabil, da RNasen, Enzyme, die im Blut, in allen Geweben und in den meisten Bakterien und Pilzen in der Umwelt vorkommen, allgegenwärtig sind.

Question 5

Welche Besonderheiten hat die RNase? Folgen?

Answer 5

• RNAse ist hitzestabil und faltet sich nach einer Hitzedenaturierung wieder. Sie sind schwer zu inaktivieren, da sie keine Cofaktoren benötigen.
• Bei der Isolierung intakter RNA werden seit jeher starke Denaturierungsmittel verwendet, um endogene RNAsen zu hemmen.

Question 6

Was wird für die In-Vitro-Synthese von RNA benötigt?

Answer 6

Für die In-vitro-Synthese werden benötigt:

• gereinigtes DNA-Plasmid,
• gereinigte RNA-Polymerase,
• Metall-Ionen-Enzym-Cofaktoren,
• und Rohmaterial-Nukleotide

Question 7

Was ist PAGE?

Answer 7

Die Polyacrylamidgel-Elektrophorese (PAGE) ist eine Technik zur Trennung biologischer Makromoleküle entsprechend ihrer elektrophoretischen Beweglichkeit. Die elektrophoretische Beweglichkeit ist eine Funktion der Länge, Form und Ladung des Moleküls

Question 8

Was kann als Hilfsmittel zu PAGE hinzugegeben werden und wofür?

Answer 8

Die Acrylamidlösung kann mit einem Denaturierungsmittel (meist 8 M Harnstoff, so genannte denaturierende PAGE) versetzt werden, um die migrierende RNA vollständig zu entfalten und die Moleküle ausschließlich nach ihrer Größe zu trennen.

Question 9

Was wird verwendet um RNA nach Größe und Form zu trennen?

Answer 9

• Polyacrylamidgel-Elektrophorese (PAGE)

- size-exlusion-chomotogrphy (SEC)