1 - mAb Plattform

Question 1

Was sind wichtige Eigenschaften der Flüssigen Phase im Bezug auf den Bioreaktor?

Answer 1

• pH
• ionenstärke
• Zusätze (Salze, Reinigungsmittel,..)
• viskosität (intra& Extrazellulär

Question 2

Was sind wichtige Eigenschaften der Zellen im Bezug auf den Bioreaktor?

Answer 2

• Lebensfähigkeit
• schersensibilität
• Bruchstücke
• Größenverteilung
• dichte

Question 3

Was sind wichtige Eigenschaften des Produkts im Bezug auf den Bioreaktor?

Answer 3

• stabilitätsfenster
• Löslichkeit
• physische und chemische eigenschaften

Question 4

mAb Struktur Besonderheit?

Answer 4

Weitgehend konstante Struktur, nur geringer unterschied in der variablen Region. Dadurch Pozessaubau mit geringen Anpassungen möglich für die Herstellung verschiedener mAbs. Nennt sich plattformprozess.

Question 5

Welche Klassen von Ig (immunglobulin) gibt es?

Answer 5

• IgM
• IgA
• IgD
• IgE
• IgG

Question 6

Aufbau eines mAb?

Answer 6

-leichte kette (23kD 2x)
-lange kette(50-70 kD 2x)
Die erste auswölbung immer V Domain (VH oder VL) der Rest C
Oben antigen binding sites
- in der Mitte Hinge Region

Question 7

Wie ist ein mAb aufgeteilt?

Answer 7

oben variabel Region (Kombi aus kurz und lang) unten konstante Region (nur lang)

Question 8

Wo ist das mAb beweglich?

Answer 8

Am schanierbereich (hinge Region)

Question 9

Was ist ADCC?

Answer 9

Antikörper - abhängige zelluläre zytotoxizität:

Antikörper die bewirken, dass Zellen vergiftet werden. (Interaktion mit Immunsysteme)

Question 10

Was ist CDC?

Answer 10

Komplementäre zytotxizität: Zelltötende Methode durch antikörpergesteuert (Interaktion mit immunsystem)

Question 11

Was ist ADC?

Answer 11

Antikörper-Wirkstoff-konjugate: (z.b. Medikamente, Toxine) zur direkten Abtötung von tumorzellen (anlagern von Wirkstoff)

Question 12

Was ist ADEPT?

Answer 12

Antikörper-gerichtete Enzym-Prodrug-Therapie: zur spezifischen Aktivierung von produgs im Tumor (anlagern von Wirkstoff)

Question 13

Was ist der Vorteil von der Therapie mir Antikörpern?

Answer 13

Monoklonale Antikörper (mAbs) und verwandte Proteine haben gezeigt, dass sie mit hoher Spezifität erfolgreich auf eine Vielzahl von extrazellulären Zielen abzielen.

Question 14

Welche Fortschritte wurden in der Forschung im Bezug auf mAbs gemacht?

Answer 14

Fortschritte beim aktuelle
Design von mAbs als Therapeutika gemacht, die eine verbesserte Bioverfügbarkeit, optimierte Affinität, verbesserte Bindungsspezifität und humane Antikörpersequenzen aufweisen, um mögliche immunogene Nebenwirkungen zu reduzieren.

Question 15

Was ist ein Upstream prozessschritt?

Answer 15

Prozessschritte, die mit der Herstellung eines rekombinanten Proteins durch Kultur und Vermehrung der Wirtszellen verbunden sind.

Question 16

Was ist ein downstream prozessschritt?

Answer 16

Prozessschritte, die mit der Aufreinigung eines rekombinanten Proteins und der Entfernung von Verunreinigungen verbunden sind

Question 17

Woraus werden Antikörper hauptsächlich produziert?

Answer 17

• Antikörper werden haupt . aus Säugetier - Wirtszellen produziert
• hohe Produktivität bei akzeptabler Produktqualitätseigenschaften + Erfahrunge

Question 18

Unterschied Murinen zu humanen Antikörper ?

Answer 18

• M : von Mäusen , classic immune response

- h : breaking of immune tolerance -> unterscheiden in variable Domäne & Oberfläche

Question 19

Was sind Prozessbedingte Verunreinigungen?

Answer 19

HCP , DNA , Protein A , Extrakte , Viren , Endotoxin , Verunreinigungen , Reinigungsmittel

Question 20

Was sind Produktbedingt Verunreinigungen?

Answer 20

Hochmolekulare Spezies , Heterogenität , niedermolekular Spezies

Question 21

Prozessschritte der mAbs aufreinigung?

Answer 21

1. Ernte
2. Protein A Chromatographie
3. low PH hold (virusinaktivierung)
4. additional polishing chromatographie
5. Viren filtration
6. Ultrafiltration / Diafiltration

Question 22

Ernte von mAbs?

Answer 22

Entfernung von Zellen & Zelltrümmern → geklärtes filtrierte Flüssigkeit erhalten → für Chromatographie

Question 23

Protein A Chromatographie

Answer 23

• erzeugt relativ pures Produkt > 98% Reinheit mit einem Schritt
• hohe Spezifität : Product wird an stat . Phase gebunden & Rest fließt durch
• deshalb oft 1. Schritt
• hohe Selektivität ,hohe Messrate , Kosteneffizient
• Durchfluss Zellüberstand pH 6-8 → Antikörper werden gebunden & Elution mit pH = 2,5 - 4

Question 24

Chromatographie zum Polieren?

Welche Chromatographien gibt es?

Answer 24

Ein oder zwei zusätzliche Chromatographieschritte werden als Polierschritte eingesetzt, die im Allgemeinen Folgendes beinhalten
— Kationen- (CEX) und Anionen- (AEX) Austauschchromatographie,
— hydrophobe Interaktionschromatographie (HIC),
— Mixed-Mode-Chromatographie (MMC)
— Hydroxyapatit- Chromatographie (HAC).

Diese Schritte sorgen für zusätzliche Virus-, Wirtszellprotein- und DNA-Klärung sowie für die Entfernung von Aggregaten, unerwünschten Produktvarianten und anderen kleineren Verunreinigungen.’

Question 25

Was ist HPTFF?

Answer 25

Hochleistungstangentialflussfiltration (HPTFF) ist ein zweidimensionales Verfahren, bei dem sowohl Größen- als auch Ladungsunterschiede zum Zweck der Reinigung und Trennung genutzt werden. Darüber hinaus können

Question 26

Sicherheits Anforderungen für Medikamente aus säugetierzellen?

Answer 26

Aufgrund von Sicherheitsanforderungen dürfen aus Säugetierzellen hergestellte Produkte weniger als ein Viruspartikel pro Million Dosen enthalten. Dies entspricht typischerweise einer Clearance von endogenen Retroviren von ca. 12-18 log10 und einer Clearance von 6 log10 für zufällige Viren.