2.7 - gojenje celic in vitro Flashcards

1
Q

Kje lahko gojimo celice in vitro?
Kaj vsebujejo?

A

v hranilnih medijih, v CO2 inkubatorjih

Vsebujejo:
- hranilne snovi - glukoza, aminokisline, vitamine, soli
- rastne faktorje
- hormone
- sredstva, za preprečevanje rasti bakterij in plesni

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Kateri so pogoji, da lahko celice rastejo v hranilnih medijih?

A
  • pH 7,4
  • temperatura 37°C
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Kaj dodamo hranilnim medijem?

A

fetalni kravji serum -> vsebuje mešanico rastnih faktorjev

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Kje menjamo hranilne medije?

A
  • v zaščitni mikrobiološki komori - laminarij
  • zagotavlja sterilno okolje
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Kdaj se celice delijo v kulturi?
Kako jim to omogočimo?

A
  • če se pritrdijo na podlago
  • za lažje pritrjevanje prevlečemo dno gojilne posode s plastjo sestavin medceličnine, npr. kolagen IV, laminin, fibronektin
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Katere 4 osnovne vrste modelov in vitro poznaš?

A
  1. tkivne kulture
  2. primarne in sekundarne celične kulture
  3. trajne celične linije normalnih ali rakavo spremenjenih celic
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Kako drugače imenujemo tkivno kulturo in kako jo pripravimo?

A
  • kultura eksplantata
  • majhen košček tkiva prenesemo v hranilni medij
    -> košček majhen -> difuzija
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Kdaj je tkivna kultura primerna?
Kaj lahko pripravimo iz nje?

A
  • če imamo na voljo zelo malo vzorca
  • lahko pripravimo sekundarno kulturo
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Kako pripravimo celično kulturo?

A
  1. tkivo odvzamemo iz organizma
  2. prekinemo celične stike s pomočjo proteolitičnih encimov
  3. v laminariju nasadimo suspenijo ločenih celic v sterilne gojilne posode s hranilnim medijem
  4. celice gojimo v CO2 inkubatorjih in menjavamo hranilni medij na 2-3 dni
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Iz katerih celic lahko pripravimo celično kulturo?

A
  • iz embrionalnih celic
  • iz še ne diferenciranih celic
  • iz celic odraslega organizma
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Katere so primarne celične kulture?

A

tiste, ki jih pripravimo neposredno iz tkiva

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Katere so sekundarne celične strukture?

A

tiste, ki jih pripravljamo s presaditvijo primarnih celičnih kultur

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Ali imajo primarne in sekundarne celične strukture omejeno število delitev?

A

da,
z vsako presaditvijo izgubljajo specifične lastnosti

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Kaj je konfluentna kultura?

A
  • sklenjena plast celic čez celotno površino
  • gibanje in delitve celic se zmanjšajo -> kontaktna inhibicija
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Kakšne so celice v trajni celični liniji?

A
  • ohranjene imajo le osnovne lastnosti, ki celici omogočajo preživetje v kulturi (rast, delitve, gibanje)
  • izgubile so večino specifičnih lastnosti
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Katere trajne celične linije poznaš?

A
  • trajne celične linije normalnih celic (netransformiranih)
  • trajne celične linije rakavih celic (transformiranih)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
17
Q

Kako poteka priprava večine trajnih celičnih linij normalnih človeških celic?

A
  • z uporabo genskega inženirstva
    -> z vnosom gena, ki kodira katalitično podenoto telomeraze
18
Q

Povej primer trajne celične linije normalnih človeških epitelijskih celic mlečne žleze?

A
  • celična linija hTERT-HME 1
19
Q

Katera je najbolj znana rakava celična linija?

A

HeLa

20
Q

Kakšne so rakave celice v trajni celični liniji?

A
  • gibljivejše
  • celični stiki so slabše razviti
  • slabše se pritrjajo na podlago
  • preraščajo se ena čez drugo
  • njihova rast je manj odvisna od prisotnosti rastnih faktorjev
21
Q

Katere so prednosti tkivne kulture?

A
  • celice ohranjajo specifične lastnosti
  • uporabna, ko je na voljo malo tkiva
22
Q

Katere so slabosti tkivne kulture?

A
  • če je košček tkiva prevelik, ni zadostne preskrbe s hranilnimi snovmi
    –> celice odmirajo
23
Q

Katere so prednosti primarne celične kulture?

A
  • celice ohranijo specifične lastnosti
24
Q

Katere so slabosti primarne celične kulture?

A
  • celic je malo
  • omejeno število delitev
25
Q

Katere so prednosti sekundarne celične kulture?

A
  • celic je veliko
  • celice ohranijo osnovne in nekatere specifične lastnosti
26
Q

Katere so slabosti sekundarne celične kulture?

A
  • celice izgubijo nekatere specifične lastnosti
27
Q

Katere so prednosti trajne celične linije?

A
  • celic je veliko
  • celice nimajo omejenega števila delitev
28
Q

Katere so slabosti trajne celične linije?

A
  • celice ohranijo le osnovne lastnosti
29
Q

Na katera 2 načina lahko ugotavljamo delež preživelih celic?

A
  1. barvanje s tripanskim modrilom
  2. ugotavljanje števila makroskopsko vidnih kolonij
30
Q

Opiši barvanje s triptanskim modrilom.

A
  • hitrejša
  • obarva samo celice s poškodovano plazmalemo
  • koncentracijo obarvanih (mrtvih) in neobarvanih (živih) celic v suspenziji ugotavljamo s štetjem celic na hemocitometru
31
Q

Opiši ugotavljanje števila makroskopsko vidnih kolonij.

A
  • dolgotrajno
  • koncentracija na začetku mora biti nizka, da lahko predpostavimo, da je vsaka kolonija zrasla iz ene celice
  • zelo zanesljivi rezultati
32
Q

Kaj je tkivno inženirstvo?

A
  • interdisciplinarno področje, ki uporablja biološka in inženirska načela za razvoj živih tkivnih ali organskih nadomestkov
33
Q

Kako in kje poteka nastanek kompleksnih 3D struktur in vitro?

A

Na biološko razgradljivih nosilcih
- po presaditvi se postopoma razgradijo
- njihovi razgradnji produkti ne povzročajo neželenih odzivov organizma ali nezaželenih učinkov

34
Q

Iz česa so grajeni biološko razgradljivi nosilci?
Kaj vežemo nanje?

A
  • nosilci so grajeni iz molekul medceličnine (kolagen) ali iz različnih polimerov
  • na nosilce vežemo rastne faktorje, ki se počasi sproščajo, in simulirajo naravno fiziološko okolje
35
Q

Kater vir celic uporabljamo pri zdravljenju s tkivnim inženirstvom?

A
  • bolnikova lastna tkiva
  • avtologna transplantacija -> ni zavračanja
36
Q

Kaj so 3D modeli in vitro?

A
  • napredne celične strukture
  • celice posnemajo prostorsko organizacijo v tkivu in so sposobne izvajati funkcijo tega tkiva/organa
37
Q

Kaj je funkcija mikrookolja?

A

posnemanje specifičnih značilnosti tkiv
- npr. tumorsko mikrookolje

38
Q

Kateri so najpogosteje uporabljeni 3D modeli?

A
  1. sferoidi
  2. organoidi
  3. biotiskani modeli
39
Q

Opiši sferoide.

A
  • spontano povezovanje celic v sferično strukturo
  • preučevanje tumorskih celic -> testiranje učinkovitosti prehajanja zdravil v tumorje
  • posnemajo hipoksijo in heterogenost
40
Q

Opiši organoide.

A
  • posnemajo kompleksnejše organe
  • v razmerah in vitro se razvijejo iz pluripotentnih matičnih celic
41
Q

Opiši biotiskane modele.

A
  • oblikujejo se s pomočjo biotiskalnika
  • natisne 3D strukturo