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Microbiologie > 2. Observations Microscopiques Des Microorganismes > Flashcards

2. Observations Microscopiques Des Microorganismes Flashcards

1
Q

Qu’elles sont les deux types de microscope et quelles sont les grandes différences?

A

Photonique (optique) et électronique. Photon et électron. Les longueurs d’onde étant différentes, les grossissement le sont aussi.

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2
Q

Qui a inventer le microscope à fond clair et comment on détermine le grossissement?

A

Inventer par Kohler, agrandissement final = Objectif x Oculaire

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3
Q

Quelles sont les principales composantes du microscope à fond clair ?

A

Condensateur: Plusieurs systèmes de lentilles jouant sur la lumière incidente.
Objectif: 1er agrandissement de l’image
Oculaire: 2e agrandissement de l’image

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4
Q

Qu’est-ce que la limite de résolution?

A

Distance minimale entre 2 points pouvant être perçus distinct. Quand près de la limite = on ne différencie pas

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5
Q

Qu’est-ce que la résolution?

A

Capacité d’une lentille de séparer/distinguer les petits objets proches.

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6
Q

Qui a définit la théorie de l’optique d’un microscope ?

A

Ernest Abbé (1870). Développe l’équation de Abbé, donnant la distance minimale (limite de résolution)

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7
Q

Quelles sont les deux facteurs où l’on peut intervenir?

A
  1. Longueur d’onde: Visible= 400nm à 700nm UV= 180 à 400 nm. Il faut utiliser du quartz pour éviter l’opacité aux U.V. Proportionnel à l’indice de réfraction.
  2. Indice de réfraction: air = 1. Verre= 1.5. Huile= 1.56
    + indice est élevée, - faisceaux lumineux que l’on perd. Il y a 3 réfractions dans le microscope
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8
Q

Où les rayons lumineux sont focalisés

A

Foyer

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9
Q

Distance entre le centre de la lentille et le foyer

A

Distance focale

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10
Q

Quelles sont les limites du microscope à fond clair? (3)

A
  1. Limite de construction de l’objectif (1/2 angle du cône de la lumière entrant dans l’objectif)
  2. Limite de résolution de la lumière visible: Violet (400nm) = + grande résolution
  3. Le contraste : Qté de lumière absorbée par la structure vs. Milieu
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11
Q

Qu’est-ce que le contraste?

A

Capacité de distinguer une structure de son environnement

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12
Q

Qu’est-ce que la préparation à l’état frais?

A

Bien pour étudier la morphologie des organismes à grandes tailles, la motilité, l’axe de division cellulaire (protozoaires), corps d’inclusion cytoplasmiques
Pas pour observer bactérie (trop petit)
Avantage: cellules sont vivantes

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13
Q

Quelle moyen peut-on utiliser pour augmenter le contraste? Quelles sont les étapes?

A

La coloration (Peu de colorant vitaux):

  1. Fixation de l’organisme
  2. Flamme (séchage des structure sur la lame = tue les cellules)
  3. Ajout du colorant
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14
Q

Quelles sont les caractéristiques des colorants?

A

Chargés +/-, vont être choisis en fonction de la structure à observer.
Certains sont hydrophobes pour se loger dans les acides gras.

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15
Q

Quelles sont les deux types de coloration?

A

Coloration simple (un seul colorant) Ex; Bleu de méthylène (+), fréquemment utilisé, car affinité électrostatique, car plupart de Mo (-). Coloration uniforme.

Colorations différentielles

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16
Q

Quelles sont les deux types de colorations différentielles?

A
  • Coloration de Gram (+/-)
  • Alcoolo-acido-résistance (A.A.R) Par Ziehl et Neelsen. Permet l’identification des mycobactéries (temps de génération très lents)
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17
Q

Quelles structures peut-on bien visualiser avec la coloration différentielle? (4)

A
  1. Endospores
  2. Capsules
  3. Flagelle
  4. Corps d’inclusion
18
Q

Qu’est-ce qui différencie le microscope à fond noir et à fond clair? (4)

A
  1. Le condensateur, écran sous le condensateur (Cône de Abbé( opaque , ne laisse pas passer la lumière)+ miroirs)
  2. Éclairage oblique
  3. Visualisation des rayons déviés
  4. Augmentation du contraste
19
Q

Quelles sont les caractéristiques du microscope à contraste de phase ?

A
  • Transforme les différentes densités(indice de réfraction) en différentes intensité lumineuse
  • Mise en phase de la lumière incidente
  • Halo de diffraction
  • Image sombre sur fond clair
20
Q

Quelles types de microorganismes peut-on observer au microscope à contraste de phase?

A

Visualiser les structures fines des organismes vivants (pas de coloration/fixation)

21
Q

Qu’elle est la différence entre la microscopie à contraste de phase et les autres microscopes photoniques?

A

La présence d’anneaux de phase (dans le condensateur)
Présence de lame de phase (dans objectif)

Rayon non déphasé => Lame de phase. => Rayon déphasé

22
Q

Qui a inventé le microscope à contraste d’interférence différentielle?

A

Nomarski , très récent $$$$

23
Q

Caractéristiques microscope à contraste d’interférence différentielle.

A
  • Polarisation de la lumière incidente (angle variable)
  • Pseudo relief 3D

Réfraction de la lumière sur structures => Changement de polarisation => Différente intensité

24
Q

Différences entre interférence différentielle et contraste de phase

A
  1. Pas de halo de diffraction
  2. Différent condensateur: Systèmes de lentilles polarisantes (ordinateur)
  3. Haut de gamme
25
Q

Quelle est la limite du microscope à interférence différentielle

A
  1. Échantillon doit être transparent , sinon opaque= bloque la polarisation de la lumière
26
Q

Quelles sont les caractéristiques du microscope à fluorescence/(épi)fluorescence? Quelle est la différence entre les deux ?

A

-Éclairage avec lumière UV
-Utilisation de colorants fluorescents (fluorochromes)
-Fluorochromes absorbent UV
-Observe ce qui est dévié
-Filtre sélectif
-Miroir Dichroique (deux couleurs) Uv et ensuite lumière visible réfléchi par l’échantillon
-Uv ne traverse pas le verre
Différence: Épi : rayon vont vers l’échantillon et pas vers le haut

27
Q

Pour qu’elle raison y-a-t’il un filtre sélectif dans le microscope à fluorescence?

A

Il sert de bloquant

28
Q

Quelles sont les différentes applications de la microscopie à fluorescence?

A
  1. Fluorochromes vitaux : Distinction cellules vivantes/mortes
    Vivantes: Exclusion par la membrane cytoplasmique
    Mortes: Membrane cytoplasmique perméable
  2. Immunofluorescence: Couplage anticorps + fluorochromes (détection pathogène,diagnostic)
    3.Hybridation Fluorescente in situ (FISH) :Quantification des proportions, analyse informatique d’images. Sonde d’ADN+ Fluorochromes pour distinguer exclusivité espèceetc. (Cellules mortes)
29
Q

Que pouvons nous observer au microscope électronique?

A

Très petits organismes (virus). Très grand grossissement, car longueur d’onde des électrons bcp plus petites que photos.

30
Q

En quelle année a été inventé le microscope électronique ?

A

1931 Par Ruska

31
Q

Quelles sont les parties d’un microscope électronique et qu’elles matériaux sont utilisés?

A

Condensateur, objectif et oculaire: électroaimants et lentilles magnétiques. Rien en verre, car bloque les électrons.

32
Q

Comment est créée l’image dans la microscopie électronique?

A

Écran fluorescent, plaque photographique et détecteur numérique.

33
Q

Quelles sont les limites du microscope électronique (3)

A
  1. Les électrons voyagent dans le vide. (Donc matériel, non vivant)
  2. Les électrons sont non-pénétrants. (Coupe ultrafine, pour que les électrons traversent 20-100nm)
  3. Le matériel vivant est non électron-dense, il n’y a pas de différence de densité = transparent)
34
Q

Quelles sont les 4 techniques de préparation/coloration pour la microscopie électronique?

A
  1. Technique de l’ombrage: On projette une ombre en vaporisant des métaux sous un angle précis de 45 degrés. Billes témoins pour mesurer l’ombre
  2. Coloration négative: Acide phosphotungstique s’accumule dans les creux, donc créé de (creux : sombre , Protubérances: claires). Bien pour observer les virus et les vacuoles gazeuses bactériennes.
  3. Cryodécapage: Congélation rapide à l’azot liquide sous-vide. Observer le relief à l’intérieur d’une structure. Coupe transversale + technique de l’ombrage.
  4. Immuno-localisation cellulaire: Utilisation de billes de Fe ou Au : Accumulation des billes lorsque les anticorps les reconnaissent.
35
Q

Quelles sont les deux types de microscope électronique?

A
  1. Microscope électronique à transmission

2. Microscope électronique à balayage

36
Q

Caractéristique microscope électronique à transmission.

A
  • Les é traversent l’échantillon et le détecteur est sous l’échantillon.
  • On voit au travers la cellule
  • Échantillons doivent être coloré et sous-vide = cellules mortes
  • La plus faible limite de résolution, structures très fines
  • Des électro-aimants en forme d’anneau focalisent le faisceau électrique
37
Q

Caractéristiques microscopie électronique à balayage

A
  • La coloration imprègne seulement la surface
  • Balayage de la surface (effet 3D)
  • Les MO doivent être séché et mis sous-vide (cellules mortes)
  • Grande limite de résolution
  • Détecteur latéral
38
Q

Autres microscopes récents

A
  1. Cryélectromicroscope : Congélation rapide par éthane et azote. (Vitrification de l’eau)
  2. Cryotomographie: Échantillon solide congelé. Images en strates pour reconstitution 3D
  3. Cryo-EM: Modélisation des structures protéiques (Spike, SARS-CoV-2-ACE2)
39
Q

Comment fonctionne le microscope confocal à balayage laser ?

A
  • Microscope photonique
  • Utilisation de fluorochromes, absorbent énergie UV et émettent dans le visible.
  • Élimination de la lumière UV provenant des plans hors foyer
  • Laser à balayage horizontale, vertical et temporel(strates). (Évolution vs. Temps 4D)
40
Q

Comment fonctionne le microscope à effet tunnel ?

A
  • Sonde qui balaie la surface et qui mesure les variations de courants/nuages électroniques
  • Sonde pas toujours à la même distance de la surface. (utilisage courant tunnel)
41
Q

Microscope à force atomique

A
  • Balayage de sonde

- Maintient constant la distance entre la pointe de la sonde et la surface

Microbiologie (11 decks)

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