2- Enzymes Flashcards
Spécificité enzymatique
- réactifs et produits lors d’une rct sont spécifiques
- contrôlée par reconnaissance moléculaire fondée sur complémentarité structurale
- le site spécifique sur lequel se lie le substrat et ou la catalyse a lieu est le site actif de l’enzyme
Cinétique enzymatique
- cherche à déterminer vitesse (max) d’une rct catalysée, à mesurer affinité pour substrats et effets inhibiteurs
- analyse de l’influence des conditions de la rct sur vitesse couplée à l’étude des structures et des propriétés chimiques
Vitesse (v) (cinétique enzymatique)
- qté de produits formés en fct du temps
- vitesse dépend de C de S et qté enzyme
- au temps 0, vitesse est max. vitesse proportionnelle à C du S
Constante de Michaelis (Km)
- constante (mM substrat) qui donne C en S pour laquelle la vitesse initiale de la rct est à la moitié de la vmax
Dans les conditions M-M, Km est une estimation de __________. Elle indique l’efficacité avec laquelle un enzyme sélectionne son substrat
la constante de dissociation de l’enzyme de son substrat (reflet de l’affinité)
Un petit Km signifie _______
une liaison forte
Un grand Km signifie ______
une liaison faible
Vitesse Maximale (Vmax) (cinétique enzymatique)
- Constante qui représente la vitesse maximale de transformation de S en P
- valeur théorique approximative
- v tend vers vmax quand C de S augmente. À saturation en S, vitesse ini est max
l’équation de michaelis et menten
permet de déterminer la vitesse d’une rct en tenant compte de la quantité de S et de caractéristiques propres à un enzyme
Constante catalytique (Kcat)
- mesure activité catalytique maximale. décrit rapidité d’action d’un enzyme
- Nb de molécules de S transformé en produit par unité de temps (quand enzyme est saturée par S)
Efficacité catalytique (kcat/km)
- mesure efficacité catalytique d’une rct lorsque la C du substrat est basse
- limitée par la vitesse de diffusion et par la vitesse de formation du complexe ES
Facteurs affectant activité enzymatique
pH
Température
Inhibition
pH
- chaînes latérales des acides aminés peuvent être ionisables (tant celles des enzymes que des substrats)
Température
- Procure de l’énergie nécessaire pour atteindre ou s’approcher de l’état de transition
- enzymes dépliées
Inhibition
étude de l’inhibition enzymatique a contribué à la compréhension des propriétés des enzymes
inhibiteurs réversibles
interagissent avec les enzymes par des rcts d’association/dissociation sans formation de liaisons covalentes stables
inhibiteurs irréversibles
- forment les liens covalents stables avec les enzymes
- inhibition compétitive
- inhibition non-compétitive
inhibition compétitive
inhibiteur interagit seulement avec E et pas avec complexe ES (sur site actif)
Inhibition non-compétitive
inhibiteur interagit soit avec E et/ou avec ES (se fixe de façon n-covalente sur un site différent du site actif)
Inhibition réversible non compétitive
- Km reste constant et Vmax diminue (Comme si E diminuait)
- fixation de S et de I sur des sites différents
Inhibition réversible compétitive
Augmente le Km et Vmax reste constant
Inhibition irréversible
- par des liaisons covalentes
- se comporte comme un inhibiteur non compétitif (perte d’enzyme actif)
Contrôles de l’activité enzymatique
1- Vitesse de la rct enzymatique est ralentie lorsque les produits s’accumulent
2- déterminée par disponibilité en substrats
3- contrôle génétique par induction et répression de la synthèse des enzymes
4- régulation par des modifications covalentes réversibles (phosphorylations)
5- contrôles spécialisés (zymogènes/isozymes)
6- Régulation allostérique
zymogènes
produit enzyme sous forme inactive
devient active dans contexte souhaité (autre action enzymatique, pH, etc)
