VL 3 Gentechnik I

Question 1

• Definition/ Eigenschaften rekombinante DNA, GVO,

Vektor, Wirtszelle

Answer 1

• Rekombinante DNA: neues DNA-Molekül, das durch die Kombination zweier nicht homologer DNA-Fragmente entstanden ist.
• GVO: Gentechnisch veränderter Organimus; Organismus, der Gensequenzen eines anderen Organismus enthält und nicht durch Kreuzung entstanden ist.
• Vektor: Vehikel, mit dessen Hilfe DNA in Wirtszellen eingebracht und vermehrt werden kann:
  • kann fremde DNA aufnehmen
  • kann sich in Wirtszelle autonom vermerhren
  • Selektion von Wirtszellen mit Vektor oft durch Resistenzgen
  • Bsp. Für Vektoren: Plasmide (zirkuläre, selbstreplizierende DNA), Bakteriophagen (Viren, die Bakterien infizieren; Teile der Phagen DNA können durch fremde ersetzt werden)
• Wirtszelle:

Question 2

• Was sind die Eigenschaften der Schnittstelle von

Restriktionsenzymen?

Answer 2

• Erkennungssequenz für Restriktionsenzyme oft Palindrome
• Schnittstelle kann Blunt,
• Mit 3‘-Überhang,
• Oder mit 5‘-Überhang sein

Question 3

• Wie wird ein DNA-Fragment in einen Vektor
kloniert? Was ist gerichtete, was ungerichtete
Klonierung?

Answer 3

• Schneiden des Vektors (zb Plasmid) und des DNA-Fragments mittels Restriktionsenzym (zb EcoR1) sodass komplementäre Übehänge entstehen
• Behandlung mit Ligase
• Einfügen in E.Coli
• Ausplattieren auf x-gal; bei erfolgreicher Klonierung wurde der ORF des lac-z Gens unterbrochen und es wird kein beta-gal exprimiert, sodass sich das X-gal NICHT blau färbt
• Dies wäre eine ungerichtete Klonierung
• Gerichtete Klonierung wird erreicht, indem Vektor und Insert mit verschiedenen Restriktionsenzymen behandelt werden

Question 4

• Was ist eine Genbank? Wie wird sie hergestellt?

Answer 4

• Genbank = Sammlung von DNA-Fragmenten, die das gesamte Genom eines Organismus darstellen
  1. Isolation genomischer DNA
  2. Zerschneiden der DNA mittels Restriktionsendonukleasen
  3. Insertieren der DNA-Fragmente in Vektoren (Plasmide)
  4. Einfügen der Plasmide in Wirtszellen (Bakterien)