Visualisation de la fonction du système nerveux Flashcards
Qu’induit rapidement l’activité neuronale?
Transcription transitoire des gènes précoces immédiats
Qu’encodent les gènes précoces immédiats?
Protéines jouant un rôle dans la plasticité neuronale :
- Facteurs de transcription : c-jun, c-fos, c-myc
- Intéraction Cytosquelette : Arc
- Facteurs de croissance : BDNF
Quelles sont les méthodes histologiques pour détecter les IEGs?
Hybridation in situ
Immunohistochimie
Quelles sont les limitations des méthodes histologiques pour détecter les IEGs?
- Tissu fixé = pas la vraie activité
2. Snapshot = pas dynamique des chg
À quoi sert le BrdU?
Prolifération cellulaire -> intégration ADN dans génome puis transmission aux ¢ filles
Le BrdU s’injecte-t-il dans les tissus vivants?
Oui
Quelle est une alternative de l’utilisation de BrdU?
3H-Thymidine (Radioactif)
Comment visualiser les chgs de voltage?
Marqueurs sensibles au voltage
Senseurs de voltage génétiquement encodés
Comment visualiser les chgs de calcium?
Marqueurs ratiométriques
Marqueurs non-ratiométriques
Senseurs de calcium génétiquement encodés
Quelle est la limite du patch-clamp?
Pas de mesure de la réponse de plusieurs neurones simultanément -> limitation de la compréhension des circuits corticaux
Quel est le principe du marquage sensible au voltage?
Fluorophores changeant capacité d’aborption et d’émission selon potentiel membranaire
—-> visualisation potentiel membranaire : ouverture et fermeture des canaux ioniques
Quelles sont les limites des marqueurs sensibles au voltage?
- Bruit de fond élevé
- Absence de spécificité
- Faible durée d’action
Que permettent de régler les senseurs de voltage génétiquement encodés?
- Faible durée d’action des marqueurs sensibles au voltage
- Absence de spécificité
- Bruit de fond élevé
Le calcium est un indicateur direct ou indirect de l’activité neuronale?
Indirect
Pourquoi les marqueurs ratiométriques sont-ils des indicateurs à double émission ou à double émission?
Liaison Ca2+ = Chg dans leur spectre d’émission ou d’excitation
Comment mesure-t-on le calcium avec des indicateurs à double excitation?
Deux lasers à excitation
Comment mesure-t-on le calcium avec des indicateurs à double émission?
Deux plages de détection
Quelles sont les limites de l’utilisation de marqueurs ratiométriques?
Acquisition + Manipulation des données complexe
Pas tous les microscopes sont adaptés
Absence de spécificité
Perturbation de l’homéostasie calcique (liaison Ca2+)
Fura-2 est quel type de marqueur?
Marqueur ratiométrique à double excitation
Quel est un exemple de marqueur non-ratiométriques?
Fluo-4 et GCaMP
Quelles sont les limitations des marqueurs non-ratiométriques?
- Pas cibler popu spécifiques de neurones
2. Chg homéostasie du calcique par liaison Ca2+ intra
Comment se compare la résolution temporelle entre les indicateurs calciques et les marqueurs de voltage? Pourquoi?
Indicateurs calciques < marqueurs de voltage
——–> Ca2+ plus lent que voltage
Comment se compare la force du signal entre les indicateurs calciques et les marqueurs de voltage?
Indicateurs calciques > marqueurs de voltage
Quel est un type de marqueur du calcium génétiquement encodé?
GCaMP
De quoi est composé le GCaMP?
- GFP
- CaM
- M13
Qu’est-ce qui “trigger” le GCaMP et qu’émet-il?
Liaison du calcium; émission d’une fluorescence verte
Quelle est la longueur d’onde d’excitation maximale du GCaMP?
480 nm
Quelle est la longueur d’onde d’émission maximale du GCaMP?
510 nm
Quel GCaMP est le plus utilisé en neurosciences?
GCaMP6
Quel est l’avantage des senseurs de calcium génétiquement encodés?
Promoteur spécifique
Quelles sont les limitations des senseurs de calcium génétiquement encodés?
Très faible résolution temporelle par perte signal dans le temps
Tamponnage du Ca2+ intra = altération signal
Comment fonctionnent les molécules encagées?
Un groupe chimique protecteur = cage bloque activité de la mlc d’intérêt
Lumière sépare la cage de la mlc = activation mlc
Quels sont les deux canaux activés par la lumière?
Opsines :
Channelrhodopsine-2 = ChR2
Halorhodopsine = NpHR
Quelle opsine excite le neurone?
Channelrhodopsine
Quelle opsine inhibe le neurone?
Halorhodopsine
V ou F : la lumière jaune active ChR2 et NpHR
F, seulement NpHR
Lumière bleue = ChR2
Quel type de marqueur sont les marqueurs Fluo et comment fonctionnent-ils?
Marqueur calcique non ratiométrique -> F/F0
chg intensité fluorescence dans le temps p/r au baseline
