Gènes et protéines/Clonage/ADN recombinant Flashcards
Combien de gènes constitue le génome humain?
20 000 à 22 000 gènes
Combien de transcrits sont obtenus à partir du génome humain?
100 000 transcrits
Combien de protéines sont obtenus à partir des transcrits humains?
1 000 000 de protéines
À quoi sert le criblage génétique classique?
IDENTIFIER les gènes -> phénotype à l’étude
À quoi sert le criblage génétique inversé?
DÉTERMINER les phénotypes à partir d’un gène connu
Quelle est la différence entre le criblage classique et inversé?
Classique = plusieurs gènes Inverse = 1 gène
V ou F : Le phénotype est connu dans le criblage classique
V
V ou F : Le criblage classique sert à générer une hypothèse
V
V ou F : La séquence n’est pas connue dans le criblage inversé
F
Quelles sont les 6 étapes de l’élaboration d’un criblage classique?
- Élaborer un test de mesure du phénotype
- Mutagenèse
- Dépistage du phéno anormal
- Test de complémentation
- Localisation du gène
- Clonage du gène
Quels sont les modes de mutagenèses?
- Chimique
- Irradiation
- Insertion
Qu’est-ce que la mutagenèse chimique?
Mutations ponctuelles :
- Non-sens
- Faux-sens
- Mutation séquence non-codante
Quel est le désavantage de la mutagenèse chimique?
Difficile à cartographier
Quel est l’avantage de la mutagenèse chimique?
Plusieurs types de mutations différentes (non-sens, faux-sens, région non-codante)
Qu’est-ce que la mutagenèse par irradiation?
Rupture ADNdb :
- Grande délétions
- Réarrangements chromosomiques
Que permet l’irradiation et l’insertion qui n’est pas possible dans la mutagenèse chimique?
Cartographier la mutation
Quel est le désavantage de l’irradiation?
Pas limité à un seul gène (grande mutation)
Qu’est-ce que la mutagenèse par insertion?
Gène marqueur :
- Insertion région codante (sq a.a. perturbée)
- Insertion région non-codante (épissage/expression perturbée)
V ou F : Le gène marqueur ne peut s’insérer que dans une région codante
F, région non-codante aussi et induire perturbation de l’épissage p.ex.
Qu’est-ce qui fait en sortes qu’une mutation par insertion est facile à cartographier?
Transposon tag est retraçable
Quelle est l’étape 3 du criblage classique est qu’implique-t-elle?
Dépistage du phénotype anormal par la production de 100 à 1000 lignées puis test phénotypique (étape 1) pour garder seulement les lignées exprimant le phénotype voulue
Comment déterminer si les mutations identifiées sont uniques ou non? Comment se nomme cette étape?
Par des croisements : Si 2 gènes différents alors disparition du phénotype
—–> Test de complémentation
Pour localiser le gène, quels sont les deux techniques utilisées?
Analyse de liaison : - Chimique - Irradiation Séquence du transposon : - Insertion
Quelles sont les deux façons de perturber un gène dans le criblage génétique inversé?
- Knock-out
2. Édition du génome (Knock-in)
Quelles sont les trois méthodes d’édition du génome?
- CRISPR/Cas9
- TALEN
- Zinc Finger
Qui entre les knock-outs et les knock-ins sont plus facile à faire?
Knock-out
Quel type de knock est favorisé?
Knock-out
Quelle étape est commune entre les knock-in et out?
PAM -> séquence liaison des nucléases -> clivage de l’ADN -> réparation (NHEJ pour out et HR pour in)
Quelle est la différence entre la réparation des knock-in et des knock-out?
in : HR
out : NHEJ
Qu’induit la réparation HR au niveau des sq d’ADN? Cela induit quel type de knocking?
Insertion = Knock-in
Qu’induit la réparation NHEJ au niveau des sq d’ADN? Cela induit quel type de knocking?
Délétion = Knock-out
Que faut-il ajouter de plus pour avoir un knock-in? Que contient cet élément?
ARN guide : mutation à introduire + mutation silencieuse qui perturbe PAM -> éviter cycle de clivage recommence
Quelle est l’inconvénient de l’édition du génome?
Off target (clivage plusieurs endroits dans le génome)
Quel est l’inconvénient d’utiliser des marqueurs microsatellites?
Couverture non homogène dans le génome : région concentrée en microsatellites et autres avec rien
Quel est l’avantage d’utiliser des marqueurs microsatellites?
Très polymorphique : variation entre individu mais dans mm famille pareil
Quelle est la différence entre les micropuces SNPs et les marqueurs microsatellites?
Polymorphisme