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Méthodes expérimentales > Microscopie > Flashcards

Microscopie Flashcards

1
Q

De quoi dépend la résolution?

A
  • Ouverture numérique

- LO de la lumière

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Q

Comment diminuer la résolution?

A

Diminuer la LO ou augmentation de l’ouverture numérique

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3
Q

Quelle est la formule de la résolution?

A

r = 1.22 × 𝛌/2 ON

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4
Q

Quelle est la résolution de l’oeil humain?

A

0.2 mm

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Q

Quelle est la définition de la résolution?

A

Qualité ou netteté de l’image : Séparer deux objets étroitement placés sur une image

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6
Q

Quelle LO a la plus grande énergie?

A

400 nm (violet)

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7
Q

Pourquoi utilise-t-on les LO de 700 nm sachant qu’ils sont de basse énergie?

A

Bonne pénétration dans les tissus + Visualisation chez vivants sans tuer (basse fréquence = proche de UV = néfaste)

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8
Q

Quels sont les trois milieux utilisés dans la microscopie?

A

Eau, huile et air

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9
Q

De quoi dépend l’ON?

A

Indice de réfraction (n) et angle (a)

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10
Q

Quelle est la formule de l’ouverture numérique?

A

ON = n x sin(a)

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11
Q

Comment est l’ouverture numérique qui permet de recueillir le plus de rayons lumineux?

A

Grand angle de l’objectif

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12
Q

Un microscope à résolution de 0.5 um permet de voir quelles tailles d’échantillons?

A

Tout ce qui est plus grand que 0.5 um

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13
Q

Comment augmenter la résolution outre que LO et l’ON?

A
  • LO hors du spectrum

- Modifier patron de diffraction de la lumière

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14
Q

Quelles sont les deux lentilles d’un microscope composé

A
  1. Lentille objectif

2. Lentille oculaire

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15
Q

Quel est le rôle du condenseur?

A

Focaliser la lumière de la source sur l’échantillon

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16
Q

Quel est le rôle de la lentille oculaire?

A

Ramasse la lumière et magnifie l’image

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17
Q

Quelles sont les limitations de la microscopie en champ clair?

A
  • Marquer parce que transparent
  • faible contraste
  • résolution faible
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18
Q

Quel est le préalable avant de faire la microscopie en champ clair?

A

Fixer les échantillons

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19
Q

Peut-on visualiser les cellules vivantes avec le microscope en champ clair?

A

Non, fixés donc mort

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20
Q

Quels sont les avantages de la microscopie à contraste de phase?

A

Cellules en culture + pas de coloration nécessaire

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21
Q

Quelles sont les deux limitations de la microscopie à contraste de phase?

A

Signaux hors focus et pas bonne résolution

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22
Q

Quels sont les avantages de la microscopie en champ sombre?

A

Cellules vivantes + bon rapport signal/bruit + hybridation in situ

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23
Q

Quelles sont les limitations de la microscopie en champ sombre?

A

Limité échantillons qui dispersent bien la lumière

24
Q

Quels sont les avantages de la microscopie à contraste interférentiel?

A

Cellules vivantes + bon rapport signal/bruit + 3D + bords et contours

25
Q

Quelle est la limitation de la microscopie à contraste interférentiel?

A

Un seul plan focal

26
Q

Quelles sont les différents types de microscopie à fluorescence?

A
  • Microscopie à fluorescence standard
  • Microscopie à fluorescence confocale
  • Microscopie à deux-photons (multiphotonique)
  • Microscopie STED (déplétion par émission stimulée)
27
Q

De quoi est composé un microscope à fluorescence?

A

Émetteur à laser

28
Q

À quoi sert l’émetteur à laser?

A

Sélectionner une LO précise

29
Q

Qu’est-ce qu’un fluorophore?

A

Émission fluorescence après excitation par la lumière

30
Q

V ou F : la longueur d’onde émise est la même que la longueur d’onde de stimulation

A

F, différente

31
Q

V ou F : le fluorophore passe d’un état - énergétique à + énergétique lorsqu’il est excité par un laser

A

V

32
Q

Qu’induit l’excitation de la lumière sur les fluorophores?

A

Augmentation de l’état énergétique

33
Q

Comment l’émission de la lumière fluorescente se fait-elle?

A

Excitation -> augmentation de l’état énergétique -> retour état basal -> émission

34
Q

Pourquoi est-ce que le spectre d’excitation et d’émission sont légèrement décalés?

A

Perte E

35
Q

Quels sont les limitations de la microscopie à fluorescence standard?

A

Photoblanchiment
Phototoxicité
Bruit de fond

36
Q

Quels sont les avantages de la microscopie à fluorescence standard?

A

Plusieurs fluorophores en même temps
Rapport signal/bruit
Détection mlc en faible qté

37
Q

Quel type d’objet est difficilement visualisé avec la microscopie à fluorescence standard?

A

Objet épais

38
Q

Quelle technique de microscopie est à utiliser pour un échantillon plus épais?

A

Microscopie confocale

39
Q

Que permet le microscope confocal que ne permet pas le microscope à fluorescence standard?

A

Plusieurs plan focaux (différentes profondeurs)

Plan Z

40
Q

Avec quelle microscopie peut-on visualiser des structures dendritiques?

A

Confocale

41
Q

Quels sont les avantages de la microscopie confocale?

A

Extrêmement nettes
Échantillons plus épais
Images dans le plan focal

42
Q

La microscopie confocale permet-elle de visualiser des événements rapides?

A

Non, processus lent

43
Q

Quelles sont les limitations de la microscopie confocale?

A

Illumination à long terme peut causer photobleaching et processus lent rend difficile visu événements rapides

44
Q

Quelle est la différence entre la microscopie standard et confocale et la microscopie 2-photons?

A

1 photon vs 2

45
Q

Qu’est-ce qui caractérise la microscopie 2-photon?

A

Double de la longueur d’onde nécessaire
Événement rare
Plan focal très étroit

46
Q

Quelle est la LO d’excitation dans la microscopie 2-photon?

A

Proche IR

47
Q

Comment évite-t-on la phototoxicité avec la microscopie 2-photon?

A

Proche IR = pénètre sans causer de dommage cellulaire

48
Q

Comment évite-t-on le photobleaching avec la microscopie 2-photon?

A

Limitation au point focal

49
Q

Quelle est la relation entre la fluorescence et l’intensité dans l’excitation à 2 photons?

A

Fluorescence ~ intensité^2

50
Q

Quel est le principe de la microscopie de l’épuisement d’émission stimulée (STED)?

A

1 rayon laser : excitation échantillon
1 rayon laser : désactivation fluorophores avoisinants
Super-résolution

51
Q

Comment est le bruit de fond d’un microscope STED?

A

Très faible

52
Q

Peut-on faire la microscopie électronique sur des cellules vivantes?

A

Non

53
Q

Qu’utilise la microscopie électronique?

A

Faisceau de particules d’électrons

54
Q

Jusqu’à quel grossissement peut aller la ME?

A

5 millions de fois

55
Q

Comment est la LO d’un électron par rapport à un photon?

A

Plus petite

56
Q

Quelles sont les limitations de la ME?

A

Cellules fixés (non vivantes)

Artefacts visuels

Méthodes expérimentales (5 decks)

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