vecteurs à ADN simple brin

Question 1

ou retrouve-t-on de l’ADN simple brin?

Answer 1

dans le génome de virus encapsidé

Question 2

expliquer le cycle de réplication du phage M13

Answer 2

Décapsidation, synthèse de la FR, Synthèse d’ADN db transcrite en protéine du capside. Synthèse ADN sb encapsidée. sortie des virions par exocytose

Question 3

Les phages M13 ont été transférés dans les plasmides pUC

Answer 3

vrai

Question 4

phage M13mp18 et M13mp19

Answer 4

gène B-gal dans RF, SCM à partir EcoR1 dans lacZa.

Différence entre 18-19: SCM inversé (comme pUC18-19)

Question 5

Quelle caractéristique est-il nécessaire qu’une cellule possède pour qu’on puisse l’infecter avec un phage M13?

Answer 5

plasmide sexuel F’ (synthèse pilis sexuel). cultive la souche sur milieu minimal, les cellules qui ne possèdent pas F’ meurt car elle ne peuvent pas synthétiser la proline.

Question 6

Qu’est-ce que les phagemides?

Answer 6

vecteurs plasmatiques qui possèdent une ori phagique

ex: pUC118-119

Question 7

Que ce passe-t-il lorsque qu’une cellule uPC118 est surinfectée avec le phage M13?

Answer 7

le phage et le plasmide produiront de l’ADN simple brin et procèderont à son encapsidation

Question 8

Existe-t-il d’autres phage que M13?

Answer 8

oui. F1 (ori provient d’une autre souche que M13)

Question 9

Quel phage de type M13 est le plus utilisé?

Answer 9

M13K07.
particularités: mutation niveau ori et résistance à kanamycine (en plus de l’ampicilline). utilise cette propriété pour distinguées les cellules infectées

Question 10

Pourquoi produire des plasmides qui font de l’ADN simple brin?

Answer 10

aucun sous-clonage nécessaire pour le séquençage d’un substrat simple-brin. On a qu’à surinfecter la cellule. Aussi, purification est plus facile.

Question 11

Bluescript II KS SK (+/-) propriétés

Answer 11

ori ColE1, résistance amplicilline, gène lacZa, SCM à 24 sites. sont des phagemides dont ori provient de f1

Question 12

différence entre KS SK?

Answer 12

inversion du site de clonage multiple

Question 13

différence entre + et -?

Answer 13

différentes orientations possible de l’ori

Question 14

Quelle est la particularités d’un ori à deux sens?

Answer 14

détermine quel brin sera encapsidé.
réplication comme plasmide = orientation pas importante
si surinfection : orientation détermine quel brin sera encapsidé (+ = brin + et vice versa)

Question 15

Si on a le choix entre un plasmide ou un phagemide équivalent, lequel on prend?

Answer 15

le phagemide, a cause de ses propriétés supplémentaires de synthèse d’ADN simple brin.