Ultracentrifugation

Question 1

Quand les macromolécules commencent à sédimenter?

Answer 1

Lorsqu’elles sont assujetties à des accélérations énormes.

Question 2

Qu’est-ce que l’ultracentrifugeuse?

Answer 2

C’est un type de centrifugeuse avec lequel il est possible d’atteindre des vitesses de rotations de 80 000 RPM qui donnent lieu à des forces dépassent 600 000X g

Question 3

Avec la technique d’ultracentrifugation, qu’est-ce qui a pu être démontrer?

Answer 3

Que les protéines sont des macromolécules de composition homogène et qu’un grand nombre de protéines sont composées de sous-unités

Question 4

De quoi dépend la vitesse avec laquelle une particule sédimente dans une ultracentrifugeuse?

Answer 4

De sa masse

Question 5

À quoi correspond la force de sédimentation?

Answer 5

À la force centrifuge qui s’exerce sur la particule moins la force due au déplacement de la solution par la particule (ou force de flottaison)

Question 6

À quoi est opposée le déplacement d’une particule à travers une solution?

Answer 6

À une force qui représente la friction entre la particule et la solution

Question 7

Sous l’influence d’une force centrifuge, une particule va accélérer jusqu’à ce que toutes les forces soient contrebalancée où on atteint la phase stationnaire. À quoi peut servir cette technique?

Answer 7

À mesurer la masse de macromolécules

Question 8

Qu’est-ce que le coefficient de sédimentation S?

Answer 8

Le coefficient de sédimentation est analogue au coefficient de mobilité électrophorétique; sa valeur est exprimée en unités de 10^-13 sec qui sont connues sous forme de Svedbergs (S)

Question 9

Vrai ou faux : Il est possible de déterminer la masse d’une particule, m=M/N, à partir de son coefficient de sédimentation S et de son coefficient de friction f.

Answer 9

Vrai

Question 10

Bien que de nouvelles techniques sont maintenant utilisées pour mesurer la masse des macromolécules (______ et ______), l’analyse des complexes de macromolécules utilise toujours _________.

Answer 10

-Chromatographie en gel de filtration
-Électrophorèse SDS-PAGE
-Ultracentrifugation

Question 11

Comment est exprimée la masse des constituants des complexes des macromolécules?

Answer 11

En Svedberg (S)

Question 12

Pour quoi sont conçues les centrifugations préparatives?

Answer 12

Pour la préparation d’échantillons possédant des volumes significatifs

Question 13

La sédimentation peut être faite dans quoi? Donner 2 exemples

Answer 13

La sédimentation peut être faite dans une solution inerte comme le saccharose ou de chlorure de césium (CsCl) dans lesquels la concentration et donc la densité augmente du haut vers le bas du rotor.

Question 14

L’utilisation de gradients de densité augmente de façon significative le pouvoir de résolution de la centrifugeuse. Comment?

Answer 14

Ce type de gradient minimise l’agitation d’une solution par convection (qui peut nuire à la résolution).

Question 15

Quelles sont les deux applications des gradients de densité?

Answer 15

1-Ultracentrifugation zonale ou en zones
2-Ultracentrifugation en gradient de densité à l’équilibre

Question 16

Que permet l’ultracentrifugation en zones?

Answer 16

Cette technique permet la séparation des particules selon leurs coefficients de sédimentation.

Question 17

Dans l’ultracentrifugation en zones, comment est déposée la solution de macromolécules?

Answer 17

Sous forme de couche en haut d’un gradient de densité préparé au préalable.

Question 18

Qu’utilise-t-on pour former le gradient en ultracentrifugation en zones? Pourquoi?

Answer 18

On utilise le saccharose car il est visqueux et bio chimiquement inerte.

Question 19

Selon quoi l’ultracentrifugation en zones sépare les macromolécules?

Answer 19

Elle sépare les macromolécules de forme similaire selon leur masse.

Chaque molécule se déplace à travers le gradient à une vitesse largement déterminée par leur coefficient de sédimentation et donc migre comme une zone.

Question 20

Quel est le deuxième nom de l’ultracentrifugation par densité d’équilibre?

Answer 20

Centrifugation isopycnique

Question 21

Selon quoi l’ultracentrifugation par densité d’équilibre sépare les macromolécules?

Answer 21

Selon leur densité

Question 22

Pour quoi l’ultracentrifugation par densité d’équilibre est la technique préférée?

Answer 22

Pour séparer des macromolécules qui possèdent une gamme de densités.

Question 23

Différence entre la centrifugation de zone et la centrifugation isopycnique.

Answer 23

En zones : les particules migrent en fonction de leur nombre S (coefficient de sédimentation, selon leur masse) dans le gradient de densité de saccharose

Isopycnique : les particules se répartissent selon leur densité dans le gradient de densité de CsCl

Question 24

Qu’utilise-t-on pour former le gradient en ultracentrifugation par densité d’équilibre (centrifugation isopycnique)? Pourquoi?

Answer 24

Dans les sels CsCl et Cs2 SO4 car ce sont des substance dense qui diffuse relativement vite.

Question 25

Qu’est-il essentiel de faire lorsqu’on utilise des centrifugeuses à grandes vitesses (2)?

Answer 25

1-Bien balancer le rotor pour éviter tout débalancement lors de la centrifugation
2-Utiliser le bon rotor (selon les paramètres désirés)