Transcriptional Regulation (Prokaryote) Flashcards

1
Q

Hvorfor er transkripsjon regulert?

A
  • Det er for å sørge for at hver og en celle tilpasser seg miljøet og utgjør ulike oppgaver.
  • To celler med identiske genom kan transkribere forskjellige gener.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Hva er housekeeping gener?

A
  • Gener som transkriberes kontinuerlig i alle celler -> vedlikeholder basic cellulær funksjon.
  • Er ikke avhengig av regulatorer.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Hva er regulated gener?

A
  • Gener som transkriberes til et spesifikk intra- eller extra- cellulæret signal (som hormon, vekst faktor, UV,…).
  • De blir transkribert i en gitt cellulær type, som neuron, muskel, nerve, osv
  • Er strengt avhengig av regulatorer.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Hvordan blir den cellulære (vev) identiteten bestemt?

A
  • Det bestemmes av den tidsmessige og lokalisert transkripsjon av spesifikke gener under utvikling.
  • Transkripsjon regulerings defekt under utvikling, leder til dramatiske forandringer i organismen.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Hva er det basale transkripsjon maskineriet? I både euk og pro

A
  • Transkripsjon maskineri som er nødvendig for alle gener = RNAP + initiering faktorer -> Binder til promoter.
  • Prokaryote: RNAP kjærne + σ-faktor
  • Eukaryote: RNAP + generelle transkripsjon faktore (GTF).
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Hva er transkripsjonel regulatorer?

A
  • Binder til spesifikke gener på spesifikke regulatoriske sekvenser.
  • Regulerer aktiviteten av det basale maskineriet på gener som er regulert av spesifikke signaler.
  • Refulatorer har størst effekt på initierings steget.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Hvordan er den generelle reaksjonsveien for transkripsjon regulering?

A

Signal -> Regulatorerer -> Basal maskinerin -> regulering av transkripsjon

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Hva gjør regulatorer?

A
  • Påvirker hvor mange RNA kopier som blir transkribert.
  • Regulerer initiering av transkripsjon -> dette er fordi det er den mest energi effektive måten å regulerer genprodukt på. (Koster mindre å regulere 1 gen enn 1000 syntetisert mRNA).
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Hva kan transkripsjon regulatorer være?

A
  • Activators: stimulere transkripsjon

- Repressors: forhindre transkripsjon

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Hvordan kan regulatorere påvirke RNAP binding til promoter?

A
  • Repressor kan binde til promoter og forhindre RNAP binding til promoter
  • Aktivator kan binde til aktivator-bindesete og dermed rekruttere og stabilisere RNAP -> kooperativ binding
  • RNAP kan binde effektiv til noen promotere men forblir inaktiv -> trenger aktivator for å trigge åpen kompleks konformasjon -> allosterisk regulering.
  • Noen repressorer bruker allosteri for å inhibere formasjon av åpen kompleks.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Hvordan kan regulatorer påvirke gener fra lang avstand?

A
  • Ved at de trigger formasjon av en DNA loop.
  • I bakterier: få og korte DNA loops
  • I eukaryote: mange og lange DNA loops
  • DNA-bending proteiner kan fasilitetere/stabilisere formasjon av DNA loops.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Hvordan bruker E.coli ulike karbon kilder?

A
  • Ved lac-operon
  • Kan bruke både glukose og laktose som karbon kilde, men glukose er enklere å forbruke.
  • E.coli har Diaxuic vekst = vekst i to faser når både glukose og laktose i vekstmediet. Glukose er brukt først, deretter laktose. Under lag fase er genene involvert i laktose metabolisme aktivert og laktose kan bli brukt.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Hva er lac gener?

A
  • Det er 3 gener (lacZ, lacY, lacA) som er involvert i laktose metabolisme. Genene er lokalisert ved siden av hverandre og danner lac operon.
  • Lac promoter kontrollerer transkripsjonen av de 3 genene til et unikt polycistronic mRNA.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Hva er produktet til lac operon?

A
  • lacZ koder β-galactodiase -> kløyver laktose til glukose + galaktose.
  • lacY koder laktose permease -> transp. av laktose inn til cellene.
  • lacA koder thiogalactoside transacetylase -> fjerner toksisk thiogalactosider som entrer cellene med laktose.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Hvilke to regulatorerer regulerer lac operon?

A
  • aktivator CAP (Catabolite Actviatior Protein) også kjent som CRP.
  • Lac repressor.
  • Begge regulatorerer binder spesifikk til DNA sekvenser i lac promoter.
  • > CAP binder til CAP sete.
  • > Lac repressor binder til operator.
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Hvordan reguleres lac genene av CAP og Lac repressor?

A
  • Lac repressor formidler signalet «fravær av laktose -> ingen laktose.
  • CAP formidler signalet «fravær av glukose» -> ingen glukose.
17
Q

Hvordan er det regulatoriske maskineriet for lac operon?

A
  • Om både glukose og laktose er tilstede -> ingen CAP eller Lac repressor binding -> basal transkripsjon nivå.
  • Fravær av laktose -> Lac repressor binding -> ingen transkripsjon.
  • Fravær av glukose -> CAP binding -> full aktivering av transkripsjon.
18
Q

Hvordan påvirker Lac repressor binding av RNAP?

A
  • De konkurrerer om promoteren.
  • Operator overlapper med RNAP bindings område.
  • Lac repressor forhindrer RNAP loading på promoter.
19
Q

Hvordan påvirker CAP binding av RNAP på promoter?

A
  • Ingen UP elementer og svak -35 element på Lac promoter -> svak RNAP binding.
  • CAP har et DNA bindings domene (DBD) og et aktiverings domene (AD).
  • CAP virker som et UP element.
  • CAP binder til CAP sete via DBD og interagerer med αCTD på RNAP, dette stabiliserer RNAP på promoteren -> som igjen gir transkripsjon (kooperativ binding).
20
Q

Hvordan binder CAP og Lac repressor til DNA?

A
  • De binder veldig likt (selv om de har helt ulik funksjon) -> de binder til DNA på inverse repeat sekvenser.
  • Hver repeat er et bindingssete for en monomer som inneholder en helix-turn-helix motiv.
  • > 1 α helix binder til major groove på en sekvens spesifikk måte -> recognition helix.
  • > 1 α helix interagerer med DNA backbone.
21
Q

Hvordan kan allosterisk regulering av Lac repressor komme av laktose signal?

A
  • Via allosterisk regulering som kommer fra lav ekspresjon av laktose metabolisme enzymer (leaky transcription).
  • β-galactosidase konverter laktose til allolaktose -> allolaktose binder til Lac repressor -> endrer konformasjon på DBD -> Lac repressor binder ikke mer til promoter -> full transkripsjon av Lac operon.
22
Q

Hvordan kan allosterisk regulering av CAP komme av glukose signal?

A
  • Glukose inhiberer enzymet Adenylate cyclase som konverer ATP til cAMP.
  • > høy kons. glukose = lav kons. cAMP
  • > lav kons. glukose = høy kons. cAMP
  • cAMP binder til CAP -> allosterisk effekt -> konformasjonendring på DBD -> CAP binder til CAP sete -> full transkripsjon av Lac operon.
23
Q

Hvordan kan Lac operon bli brukt av molekylær biologer?

A
  • Bruker Lac operator for å prod. rekombinante proteiner.
  • IPTG er brukt for å mimikere allolaktose.
  • E.coli genom er forandret sånn at IPTG induserer ekspresjon av T7 polymerase.
  • Plasmid som inneholder genet som koder for rekombinant protein under kontroll av T7 promoter -> T7 polymerase binder til T7 promoter pga IPTG -> ekspresjon av rekombinant protein.
24
Q

Når er σ32 uttrykt?

A
  • Under heat shock -> dirigerer RNAP til gener som responderer på heat shock med spesifikk promoter sekvens.
25
Q

Hvilken σ-faktor er involvert i nitrogen metabolisme?

A
  • σ54 diregerer RNAP til gener som er involvert i nitrogen metabolisme.
  • σ54 stabileserer lukket kompleks (av RNAP) til promoter på glnA gen -> ingen transkripsjon
  • Lavt nitrogen nivå trigger binding av aktivator NtrC til bindingssete 150bp upstream for promoter -> NtrC interagerer med σ54 -> dannelse av DNA loop -> ATPase aktivitet på NtrC -> konformasjons endring -> åpen kompleks formasjon -> transkripsjon av glnA.
26
Q

Hvordan er kvikksølv metabolisme i bakterier?

A
  • merT er et gen som er involvert i respons til Hg2+.
  • merR er en aktivator konstant bundet til merT promoter.
    • ingen Hg2+ -> MerR sørger for at -10 element forblir ikke aligned rett med -35 element -> σ70 kan binde men inne aktivere RNAP.
    • Hg2+ -> MerR konformasjonsendring -> DNA twisting -> rett alignment av -10 og -35 element -> transkripsjon av merT.
27
Q

Hvordan er reguleringen av araBAD operon ved aktivator AraC?

A
  • araBAD operon er aktivert i respon til arabinose ved aktivator AraC.
    • ingen arabinose: AraC dimer binder til bindingssete I1 og araO2 -> ingen RNAP rekruttering.
    • arabinose: allosterisk forandring av AraC -> dimer binder nå til bindingssete I1 og I2 -> transkripsjon av araBAD gener.