DNA repliction Flashcards
Hvordan blir DNA sekvensen determinert ved replikasjon?
Sekvensen til en strand bestemmer sekvensen til den komplementære stranden.
Hva er de to nøkkel substratene ved DNA-syntese?
- Byggeklosser: dNTPs
- Startpunkt: primer/template junction
Hvordan blir DNA syntetisert?
Utvider 3’-enden av primeren
Hva er den drivende kraften ved DNA syntese?
Hydrolyse av pyrofosfat (2Pi).
Hvor hydrolyse er opptak av vann…
Hvordan blir riktig base inkorporert, og hvorfor er det bare deoxy-nukleotider?
- Kinetisk rettlesning: 10000x raskere ved riktig dNTP vs feil
- Spesifikk geometri og distanse
- Med rNTP blir det feil geometri pga ekstra hydroksyl-gruppe.
Hva er en kilde til feil inkorporering av nukleotider?
- Tautomeric shift: baser kan flippe i «feil» tautomeric form -> feil baseparing.
Hvordan rettleser DNA polymerase?
- Ved exonuclease: fjerner feil base
• Mistmatch DNA endrer geometrien ved det aktive setet -> senere rate.
• Flere basepar av ssDNA beveger seg til exonuclease setet.
• Etter exonuclease beveger 3’-OH enden tilbake til det aktive setet.
Hva er processivity?
- Antall dNTP polymerisert hver gang enzym binder til primer templat.
- DNA pol er et processive enzym
Hva menes med replikasjon gaffelen?
- Begge strandene repliserer samtidig. To polymeriserings reaksjoner nær hverandre. Y-formet junction = replikasjons gaffel.
Hva er primase?
Spesialisert RNA polymerase, lager korte RNA primere, er startpunkt for DNA polymerase.
Hvor går «leading strand»?
- DNA pol «jager» replikasjons gaffelen, går i samme retning.
- Motsatt for «lagging strand».
Hvilke steg er det for replikasjon gaffel åpningen?
- Strand separasjon
2. RNA primase og fjerning av RNA primer.
Hva er oppgaven til DNA helicase?
Unwind heliksen ved hjelp av ATP
Hva er oppgaven til topoisomerase?
Fjerner positiv supercoiling,
Hva er oppgaven til
SSB?
Proteiner som beskytter ssDNA
Hva er MCM komplekset?
- DNA helicase i eukaryote
- Ringformet hexamer
- Human helicase: MCM2-7 kompleks