TP1 - IMUNOENSAIOS MARCADOS

Question 1

imunoensaios marcados

Answer 1

• ligação de 2 moléculas com grande afinidade estrutural (n necessariamente antigenio e anticorpo)
• elisa, RIA, IF, QUIMILUMINESCENCIA
• ligante : produto que queremos analisar
• binder ptn ligadora; identificado com um determinado marcador (diferentes marcadores p dif tecnicas)

Question 2

Aspetos gerais das tecnicas

Answer 2

1) juntam se 2 moleculas

2) visualizacao reacao ( e medicao da quantidade de marcacao)

3) comparacao com reacao padrao (apresentado valor sob forma info qualitativa [tem ou nao anticorpos] ou quantitativa [qntns anticorpos produz])

Question 3

utilizacao tecnicas quotidiano

Answer 3

• serologias
• doseamento de hormonas
• alergias (dosear anticporpos especificos)
• dosear subst que existem em poucas quantidades no nosso corpo

Question 4

RIA (radio imuno analise)

Answer 4

• marcador é um composto reativo e no final a reação vai emitir radiacao
• binder ligado a molecula radioativa (iodo 25, radiacao gama, tritio, radiacao beta)
• placas com pocos lidos com contador de radiacao
• tecnica muito sensivel(doseamento subst em pequenas quantidades)

Question 5

ELISA

Answer 5

• marcador é enzima que atua num cromogenio (reacao entre estes da coloracao a reacao)
• binder ligado a enzima (peroxidase do rabano e fosfatase alcalina)
• coloracao medida no espetrofotometro de absorvancia (convertida em concentracao do componente em estudo)
• tecnica utilizada em serologias (pesquisa de anticorpos etc) e em estudos de autoimunidade

Question 6

IF (imunofluorescencia) direta e indireta

Answer 6

**- marcador é fluorocromo acoplado a anticorpo q emite radiacao propria (coloracao num comp onda dif do estimulo, geralmente superior) quando estimulado com determinada frequencia de onda

• tecnica usada p estudos de autoimunidade e de tecidos tumorais (antigenios em tecidos, pe)~
• amostras vistos em micoscropio de fluorescencia q emite luz uv, se tiver la marcador este é estimulado e emite uma luz captavel pelos olhos do observador
• tecnica qualitativa podendo ser semi quantitativa (pela quantidade de floresencia emitida pelas amostras)
• direta : identificar antigenio em cortes de tecidos ou celulas atraves da adicao de anticorpo marcado com substancia fluorescente
• indireta: identifica anticorpos (pe, autoanticorpos, sendo o segundo anticorpo policlonal p ligar a dif epitopos de anticorpo humano); util p diagnostico de doencas autoimunes

Question 7

QUIMILUMINESCENCIA

Answer 7

-** reacao oxidacao reducao** com adicao de peroxido de hidrogénio e luminol
- sob acao de enzima (peroxidade do rabano ou fosfatase alcalina) ha prod luz
- luz captado luminometro e convertido em concentracao do componente
- util em doseamento de hormonas (pois deteta em pequenissimas conc)
- exemplo serologia de igm com formacao anticorpo policlonal antiM-IgM antiRubeola-rubeola (pg 28)

(anticorpo conjugado com enzima e antigenio; depois é adicionaod luminol e peroxido de hidrogneio, enzima atua nesses compoentes e ha luz)

luminol e peroxido de hidorgenio na presenca de catalisador=reacao e luz

Question 8

VARIANTES DOS IMUNOENSAIOS
-elisa indireta
-elisa sandwich
- tecnicas competitivas

Answer 8

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Question 9

ELISA SANDWICH

Answer 9

• medicao de antigenio

1) anticorpo na placa
2) soro doente (com os antigenios)
3) lavagem (eliminar excesso de antigenio q n ligou)
4) 2 anticopro com enzima
5) lavagem (elimina rexcesso de 2 anticorpo)
6) substrato e medicao de coloracao
7) quantificacao do antigenio no soro do doente

(pg 29 com exemplo num teste de gravidez)

Question 9

ELISA INDIRETA

Answer 9

• doseamento de anticorpos

1) placa com antigenios especifico p anticorpo do soro do doente
2) adicionar soro doente (q tem os anticorpos)
3) lavagem p tirar anticorpos que nao se ligabam aquele antig
4) adicionar anticorpo com enzima
5) lavagem
6) adiconar substrato e medicao de coloracao
7) quantificacao anticorpo do doente (no soro)

Question 10

TECNICA COMPETITIVA
(ria ou elisa)

Answer 10

• doseamento de antigenios
• principio da reversibilidade da ligacao antg-anticorpo (ligacao com forcas fracas)

1) solucao padrao com complexos antigenio-anticorpo com determinada marcacao
2) adiconar antigenios nao marcados (leva a quebra de algumas ligacoes)

ou seja, ao adiconar soro, se tiver muito antigenio, mais ligacoes marcadas quebradas logo :
- qntd marcacao inversamente proporcional a quantidade de antigenio adicionado
- relacao antig marcados (total) / antigenio marcado final ligado a anticorpo é proporcional concentracao de antigenio no produto biologico