P6 - CITOMETRIA DE FLUXO

Question 1

CITOMETRIA

Answer 1

• tecnica biofisica de analise quanti e quali
• amostra em supensao num meio liquido
• tecnida de imunofluorescencia direta
• info sobre
  1) n de celulas com expressao do antigenio
  2) distribuicao de cels numa amostra de acordo com a densidade do antigenio
  3) tamanhoa celular
• avalia
  1) volume e complexidade morfologica (mm sem anticorpos, conseguimos separar linfocitos, monocitos e granulocitos)
  2) antigenios de super celular
  3) conteudo total de dna e rna
  4) expressao e localizacao de ptn
  5) …
• citometro com detetores p tamanho, complexidade e detetores de fluorescência

Question 2

cels apresentadoras de antigenio (APC)

Answer 2

• dendriticas
• macrofagos
• cels B

Question 3

apresentacao antigenica

Answer 3

** 1 sinal**
- apresentacao do antigenio no MHC II ao TCR do linfocito T
sinal 2
- CD28 do linfocito q se ligue ao CD80 na APC
sinal 3
- producao e libertacao de citocinas (p parte da APC) p q linfócito responda ao antigénio

Question 4

1) marcadores

Answer 4

(separar granulocitos, linfocitos e monocitos)

cd45 e cd14
- monocitos unicos positivos p cd14
- linfocitos com maior expressao de cd45 (mais recetores na membrana)

14 e 16
- distinguir monocitos classicos de nao classicos (nao classicos expressam algum 16)

3/56 e 8/19
- cd3 em cima de 56 pq tem mais recetores cd3 que o nk tem 56
- cels B dao negativo no eixo 3/56 e positivo no 8/19 ( se dao - no primeiro nao podem ser cels T logo so pode ser linf B por dar positivo a cd19)

Question 5

2) miudos cd4 e 8 negativos

Answer 5

• linfocitos T duplamente negativos
• linfocitos T gama delta
• podem tmb ser linf T q por algum motivo perderam expressao dos recetores
• cadeia gama e delta (em vez de cadeia alfa e beta)

Question 6

3) procedimento (aspetos imp)

Answer 6

• pipetar sangue e adicionar marcadores
• incubar em ambiente escuro p nao excitar os fluorocromos (depois do citometro podemos ja nao ter fluorescencia suficiente)
• lisar globulos vermelhos com solucao de lise
• Centrifugar p cels ficarem no fundo e nos livrarmos dos eritrocitos rebentados
• tampao p lavar e centriufgar
• vertemos sobrenadante
• ressuspendmeos em tampao