Test 2 - Methoden der Gentechnik (S. 176-179)

Question 1

Nennen und beschreiben Sie die 5 Grundoperationen für ein gentechnisches Experiment.

Answer 1

• Isolation von DNA (mensh. Gene oder bak. Plasmid)
• Rekombination: Einbau vin Gen in Plasmid
• Gentransfer: Übertragung von Plasmid mit dem Fremdgen in ein Bakterium
• Selektion der erfolgreich rekombinierten Bakterien
• Zellvermehrung

Question 2

Welches sind die drei Gebiete der Anwendung rekombinanter Bekterien (mit Beispielen)?

Answer 2

• Medizin: Insulin
• Forschung: Sequenzierung
• Landwirtschaft/Lebensmittel: Mais Krankheiten

Question 3

Wie schützen sich manche Bakterien vor Phagen-DNA?

Answer 3

Diese Bakterien haben einen Schutzmechanismus wie eine Schere. Deise schere schneidet die DNA-Phagen heraus und macht sie unschädlich. Durch Methylisierung ihrer eigenen DNA wird verhindert, dass sie von ihrer eigenen Restriktionsenzyme zerschnitten werden.

Question 4

Restiktionsenzyme

Answer 4

Enzym welches wie eine Schere, die Isolation der DNA vollbringt.

Question 5

Was sind sogenannte sticky ends?

Answer 5

Sticky ends sind die nach dem Schnitt vorhandenen Einzelstrang Teilchen. Sie können sich wegen komplementäriät sich schnell wieder mit dem anderen Teil durch Wasserstoffbrücken verbinden.

Question 6

Erkennungssequenz

Answer 6

Bestimmte Baasenfolge zur aktivierung eines Restriktionsenzym

Question 7

Beschreiben Sie, wie Molekularbiologen DNA in vitro in definierte Fragmente zu zerschneiden und neu zu kombinieren; welche „Werkzeuge“ benötigen Sie?

Answer 7

• Zur Isolation werden Restriktionsenzyme gebraucht (EcoRI)
• die DNA-Ligase verbindet wieder

Question 8

Blunt ends

Answer 8

Einen glatten Schnitt eines Restriktionsenzyms

Question 9

Wann und durch wen gelang es erstmals, DNA-Fragmente unterschiedlicher Bakterien in vitro neu zu kombinieren?

Answer 9

1973 durch Cohen und Boyer

Question 10

Ori

Answer 10

Der Replikationsursprung eines Plasmids. Können sichunabhöngig vom Bakterienchromosom replizieren.

Question 11

Wie wird ein Fremdgen in ein Plasmid gesetzt?

Answer 11

Das Restriktionsenzym öffnet Plasmid an einer Stelle. Geliches Restriktionsenzym wird für die Isolation des Gens gebraucht. Die stick ends der beiden verbinden sich zu einem rekombinantem Plasmid.

Question 12

Rekombinantes Plasmid

Answer 12

Plasmid + Fremdgene

Question 13

Gelingt der Einbau des Fremdgens immer?

Answer 13

Nein, es entsteh so ein Gemisch aus plasmiden mit und ohne Fremdgen

Question 14

Gentransfer

Answer 14

Das Plasmidengemisch wird in vorbereitete Bakterien gegeben

Question 15

Vektoren

Answer 15

Die rekombinanten Plasmide sind „taxis“ die Fremdgene in andere Lebewesen überträgt

Question 16

Wodurch werden die bakterienzellwände prepariert?

Answer 16

Durch eine Calciumchlorid-Lösung die die Zellwand durchlässig macht

Question 17

Selektion

Answer 17

Um herauszufinden welches Plasmid die Fremdgene enthält gibt man sie in einen Nährstoff welches nur für die Plasmide ohne Fremdgen schädlich ist.

Question 18

Markergene

Answer 18

Die Plasmide welche die resistente Gene enthält (z.B amp r und tet r)

Question 19

Die 2 Selektionsschritte

Answer 19

1. ) prüfen ob Plasmid aufgenommen wurde. Auf Nährboden Antibiotikum Tetracylin überleben nur die Bakterien mit den Plasmiden (0,1%)
2. ) durch Nährboden Ampicillin werden nur die Plasmiden mit der Fremdgene überleben (amp r)

Question 20

Replikaplattierung

Answer 20

Ist der wechsel von der tetracyclinhaltigen Nährboden auf den 2. Nährboden. Die Replikaplattierung ist eine genaue Kopie der Uhrsprungsplatte.

Question 21

GFP

Answer 21

Ein Gen welches Grün Fluoreszierende Protein codiert