Tema 4. Observación de microorganismos

Question 1

¿Qué requiere las microbiología para su estudio?

Answer 1

El microscopio

Question 2

¿Cómo observa el ojo humano los objetos?

Answer 2

Enfocándolos gracias al poder de acumulación del cristalino en la retina. En esta se forma una imagen invertida con respecto al objeto, pero luego, en las vías ópticas y en el centro de visión del cerebro, se le da la vuelta para que veamos el objeto tal cual es

Question 3

¿Qué es el punto cercano de visión?

Answer 3

Es la distancia mínima a la que el ojo puede enfocar (se ve doble el objeto a partir de ese punto que marca el límite de visión del ojo humano). Puntos más cercanos entre sí de 0,1-0,2 mm no somos capaces de diferenciarlos como separados

Question 4

¿Existe algún truco para ver objetos más pequeños?

Answer 4

Sí. Colocar una lente convexa, una lupa entre el ojo y el objeto que crea una imagen agrandada del objeto que es la que observamos. Esta sería la base de un microscopio simple ((con una sola lente), con la que podemos aumentar de 5-300 veces el tamaño de un objeto, lo que significa que podremos ver organismos de hasta unas 3 micras aproximadamente

Question 5

¿Cuál es el diámetro de los microorganismos eucariotas, procariotas y virus?

Answer 5

Eucariotas: ronda las 10 micras
Procariotas: 1-3 micras
Virus: 100 nm, quedan fuera del alcance de estos microscopios simples

Question 6

¿Cómo funcionan los microscopios compuestos?

Answer 6

Tienen dos lentes: una lente objetivo (cerca del objeto) y otra ocular (cerca de nuestro ojo). La lente objetivo forma una imagen real del objeto entre las dos lentes. La lente ocular está invertida con respecto al objeto. Que sea una imagen real implica que se puede proyectar en una pantalla. Esta imagen se forma en el diafragma de la lente ocular.

A continuación, la lente ocular forma la imagen virtual, mucho más grande, que es la que nuestro ojo ve. Así pues, la persona percibe una imagen del objeto mucho más agrandada e invertida respecto del objeto que observa. Este es el motivo por el cual, cuando miramos a través del microscopio y movemos la platina a la derecha, en realidad se está moviendo hacia la izquierda. Por su parte, cuando la movemos hacia arriba nos da la sensación de que se mueve hacia abajo

Question 7

¿Cómo se enfoca el objeto?

Answer 7

Acercándolo o alejándolo a la lente objetivo, porque las imágenes tienen que estar en el punto focal de la lente hasta que sea lo suficientemente nítida

Question 8

¿Cómo se calcula el número de aumentos?

Answer 8

Se multiplican los aumentos de la lente objetivo por los aumentos de la lente ocular. Se emplean lente oculares de 10 aumentos y lentes objetivos de 10 (100x), 40 (400x) o 100 (1.000x). A partir de 1000 aumentos no se consigue ver mejor los detalles de la muestra. Eso implica que podemos ver hasta unos 0,2 micras. En ningún caso con un microscopio óptico se ven microorganismos menores debido al límite de resolución (virus)

Question 9

¿Estructura de un microscopio óptico?

Answer 9

La lente objetivo se encuentra en el revólver, con el cual podemos cambiar dicha lente girándolo; la platina es el lugar donde se va a colocar la muestra, los tornillos nos permiten mover la platina horizontalmente y verticalmente. Hay una tercera lente que es el condensador y que no participa en la formación de la imagen, sino que se encarga de focalizar la luz hacia la muestra para que esté mejor iluminada y, por lo tanto, se pueda ver mejor. Así mismo, tiene un regulador de la intensidad de la luz, un interruptor y tornillos macrométrico (enfoque más grueso) y micrométrico (mayor ajuste del enfoque), que sirven para enfocar

Question 10

¿Qué aspectos determinan la calidad de un microscopio?

Answer 10

Los aumentos del microscopio y el poder de resolución

El poder de resolución se define como la capacidad de un sistema óptico de producir imágenes con gran detalle, la capacidad para observar como si estuvieran separados dos puntos que, realmente, están muy juntos. Esta resolución viene dada por la ecuación de Abbe, que mide la distancia más pequeña entre dos puntos más cercanos que se observan como separados

Cuanto mayor sea la resolución de un microscopio, menor será la distancia entre dos puntos adyacentes que se observan como separados (por tanto, mejor distingue entre objetos muy próximos entre sí)

La ecuación de Abbe nos dice que esa resolución es.

• Directamente proporcional a la longitud de onda de la luz que ilumina el objeto (esto es, la luz que utilice el microscopio)
• Inversamente proporcional a la apertura numérica (AN): cabe destacar que es más importante la AN de la lente objetivo que la de la lente ocular, que se desprecia. Esa apertura numérica depende a su vez de 2 parámetros:
• Eta: el índice de refracción del medio que está entre la muestra y la lente objetivo. Si entre nosotros y la muestra no hay nada, el índice de refracción es el del aire, que es 1 (pequeño). Eso haría que parte de la luz que ilumina el objeto y, por tanto, parte de los detalles de la muestra, escapen del objetivo. Sin embargo, cuando aumentamos el índice de refracción del medio entre la muestra y la lente poniendo por ejemplo alguna sustancia que los toque a ambos a la vez (aceite de inmersión o de cedro, ya que antiguamente se obtenía del cedro), conseguimos que los detalles de la misma no escapen de la lente, sino que se concentren y, por tanto, aumente el poder de resolución. Dicho aceite es una sustancia transparente, lo que es ideal para que no distorsione, con un índice de refracción muy similar al vidrio Chrome ((vidrio con el que se fabrican las lentes, 1,53)). En resumen: para disminuir la distancia nos interesa que el denominador sea lo más grande posible y que eta sea lo más grande posible

Sen theta: es la mitad del ángulo que hay entre la muestra y la lente objetivo. La lente objetivo es una lente que funciona a una distancia de la muestra muy grande, lo que hace que este ángulo theta sea pequeño. No obstante, para que la apertura numérica de la lente objetivo sea lo más óptima posible, el denominador debe ser lo más grande posible para que la distancia sea lo más pequeña posible. El seno máximo que existe es 1, que es el seno de 90º, así que tendríamos que conseguir una lente objetivo que funcione lo más pegada posible a la muestra

El aceite de inmersión solo se puede usar con objetivos de 100 aumentos

Question 11

¿Qué son realmente la lente ocular y objetivo?

Answer 11

No son única lente, sino que están formadas por muchas lentes porque así se consiguen disminuir mucho las aberraciones estéricas y cromáticas. Si usásemos una sola lente esta tendría que ser una perfecta. No obstante, a pesar de estar formado por muchas lentes, el efecto óptico es el de una única lente

Question 12

¿Cómo podemos observar los microorganismos en un microscopio de campo claro?

Answer 12

Podemos hacer una preparación en fresco. Cogemos una solución de agua o isotónica, resuspendemos un poco de masa microbiana en un portaobjetos, le ponemos un cubre encima y procedemos a la observación al microscopio (echando aceite de inmersión sobre el cubreobjetos). No obstante, la calidad de la imagen no solamente depende de los aumentos, sino también del contraste, por lo que si yo hago eso directamente no voy a observar prácticamente nada, sino que solamente se verán bien los microorganismos que tienen pigmentos naturales. Este poco contraste se debe a que el índice de refracción de las células es similar al medio acuoso donde ponemos los microorganismos. Por ello, no es apta para ver la mayoría de microorganismos, pero sí es útil para aquellos con pigmentación, así como para observar la movilidad en bacterias y hacer exámenes en heces de protozoos y diversos parásitos. Para solucionar este contraste tan pobre se han encontrado dos soluciones:

• Usar tinciones, tiñendo a las células con colorantes
• Usar microscopios ópticos modificados (microscopio de contraste de fases, de campo oscuro, de fluorescencia…)

Question 13

¿Cuál es el objetivo de las tinciones?

Answer 13

Aumentar el contraste entre las células y el fondo usando un microscopio de campo claro. Además, permite preservar la muestra para estudios posteriores. Tienen valor diagnóstico y taxonómico porque nos aportan información sobre características de los microorganismos.

Question 14

¿Qué son los colorantes?

Answer 14

Son compuestos orgánicos que tienen color gracias a la presencia de grupos químicos denominados cromóforos, anillos aromáticos con dobles enlaces conjugados. Sirven para realizar las tinciones

Question 15

¿Qué tipos de colorantes hay?

Answer 15

1. Básicos o catiónicos (con carga positiva, se unen a las superficies negativas de la célula), como el azul de metileno, el cristal violeta, la safranina, la fucsina, el verde malaquita…
2. Colorantes ácidos o aniónicos (carga negativa, se unen a las superficies positivas de la célula), sirven para teñir estructuras específicas. Nigrosina, rojo congo, eosina, fucsina ácida…
3. Los colorantes liposolubles, sirven para teñir determinadas estructuras. Negro sudán, para teñir lípidos selectivamente

Una cosa a tener en cuenta es que las células microbianas tienen generalmente en su superficie carga negativa, por lo que se suelen emplear colorantes básicos

Question 16

¿Qué son los mordientes?

Answer 16

Son compuestos químicos o tratamientos adicionales a los colorantes, que se usan en las tinciones, con el fin de acentuar la unión del colorante a las estructuras celulares para fijar bien esa tinción. Podemos emplear distintos tratamientos como el calor, o bien compuestos químicos como el fenol (en la tinción de Ziehl-Nelsen con fucsina fenicada; cuando vemos en un colorante el apellido fenicado es que contiene fenol), el lugol (en la tinción de Gram actúa como mordiente), el ácido tánico para la tinción de flagelos…

Son diversos los compuestos que pueden actuar como mordientes

Question 17

¿Cuál es la tinción más común?

Answer 17

La tinción simple, es una tinción de los grupos catiónicos

Question 18

¿Cómo se lleva a cabo una tinción simple?

Answer 18

El proceso inicial es la realización del frotis, con 3 etapas:

1. Extensión de la muestra para que quede una capa muy fina sobre el portaobjetos, lo que nos permitirá posteriormente ser capaces de visualizar células aisladas
2. Secado al aire de la muestra
3. Fijación que se puede realizar con compuestos químicos (se realiza sobre todo en microscopía electrónica), mientras que en microscopía óptica se hace fijación a la llama (con el calor de la llama). Normalmente,. si realizas fijación a la llama, la etapa de secado al aire se omite porque al mismo tiempo que vas fijando la muestra, se va secando. Así, los objetivos que tiene la fijación con calor son:

• Coagulación de proteínas para pegar la muestra
• Inactivación de enzimas y proteínas para detener el metabolismo celular (las tinciones las queremos para guardarlas por lo que tienes que detener el metabolismo microbiano por completo)
• Inactivación de los microorganismos
• Adherir las células a la superficie del portaobjetos porque, a continuación, vamos a añadir colorantes y, si estas células no están fijadas, cuando se eche el colorante estas se escurrirán por completo
• Desecar estructuras celulares que se endurecen para que no se alteren

4. Existe otro tipo de fijación química, realizada en microscopía electrónica, como puede ser con formaldehído y glutaraldehído, cuyo fin es la preservación de estructuras intracelulares

Tras la fijación procedemos a añadir el colorante, que puede ser cualquier colorante catiónico. Tras ello, cubrimos bien la muestra con el colorante y esperamos un minutos para que ese colorante se fije bien, lo lavamos con agua destilada, lo secamos presionando ligeramente sobre el papel de filtro/secante pero sin restregar y visualizamos con el microscopio de 100 aumentos y aceite de inmersión. Cabe destacar que la cara con la que se ha hecho el frotis tiene que estar hacia arriba pegando con la lente objetivo.

Esta tinción simple nos proporciona todo tipo de información: tamaño, forma y disposición de las células

Question 19

¿Qué otros tipos de tinciones tenemos?

Answer 19

1. Las tinciones simples: tiñen la célula con un solo color (el del colorante que hemos usado). Seremos capaces de visualizar la morfología de las células y si están agrupadas entre sí con algún patrón o no
2. Las tinciones diferenciales: permiten agrupar los microorganismos según determinadas características. Entre ellas, la más famosa es la tinción de Gram (permite clasificar bacterias en gram + o gram -) o la de Ziehl-Nelsen o ácido-alcohol resistentes (rojo) o no resistentes (azul)
3. Las tinciones estructurales nos permiten observar diferentes estructuras microbianas, como por ejemplo la tinción de cápsulas (la cápsula es un material de origen polisacarídico o proteíco que envuelve las células). Para ello, lo que hacemos es añadir a la tinción tinta china, y como la cápsula es hidrófoba, la repele y se ve el fondo oscuro (es una tinción negativa al teñir el fondo) y las cápsulas que envuelven a las células. También es una tinción estructural la tinción de Wirtz de endosporas, donde las endosporas se muestran verdes y las células vegetativas rosas; o la tinción de flagelos (estructuras motoras de las células motoras de unos 20 nm de espesor) que, en realidad, no son visibles al microscopio debido a sus finísimas estructuras, pero con el procedimiento engroso al flagelo.

Question 20

¿Qué es la tinción de Gram?

Answer 20

Es una de las tinciones diferenciales más importantes en Microbiología, la cual fue ideada por Gram, quien murió sin saber por qué se teñían las células de forma diferente. Esta duda no se resolvió hasta que se desarrolló el microscopio electrónico y se pudo ver la composición de la pared, la cual constituye la base de la tinción de bacterias Gram+ y Gram-. Es muy importante en diagnóstico (si vemos diplococos Gram - en una muestra de líquido espinal, prácticamente es diagnóstico de Neisseria meningitidis, agente causal de la meningitis)

Question 21

¿Cuál es el procedimiento de la tinción de Gram?

Answer 21

1. En esta tinción lo que se hace es preparar el frotis y, a continuación, se aplica el colorante principal que es el cristal violeta (colorante primario). Este es un colorante catiónico que tiñe todas las células, Gram+ y Gram-, lo cual hace que todo se tiña de este color morado. Esperamos 5 minutos
2. La siguiente etapa aplicación de lugol, una mezcla de yodo y yoduro potásico, que actúa como mordiente, acentuando la unión del cristal violeta a la célula. Esperemos 1 minuto y lavamos con agua destilada
3. La etapa más importante o clave es la decoloración con alcohol (a veces también se usa acetona). En esta etapa se va añadiendo alcohol gota a gota que permite eliminar el cristal violeta de las células Gram-. pero no de las Gram+, que siguen teñidas de violeta. Lavamos con agua destilada
4. Finalmente se aplica el colorante de contraste que es la safranina. Este también es un colorante catiónico, por lo que tiñe las células con carga negativa, pero las cargas negativas de las Gram+ ya están ocupadas por el cristal violeta, por lo que solamente se tiñen las Gram- de color rosa que han sido lavadas previamente con el alcohol

Las células Gram+ se ven violetas y las Gram- de color rosa

Question 22

¿Qué diferencia hay entre la pared celular de las bacterias Gram+ y Gram-?

Answer 22

En las Gram+, hay una gruesa capa de peptidoglucano. Tiene muchas cargas negativas y hace que cuando se pegue el cristal violeta, acentuado con la tinción de lugol, ya no se pueda quitar, por mucho alcohol que se añada

En las Gram-, hay una capa muy fina de peptidoglucano, y un espacio periplásmico que separa la membrana plasmática de otra externa, y finalmente una membrana externa parecida a la membrana plasmática. En este tipo de paredes, cuando añadimos el alcohol, sí se lava fácilmente el cristal violeta, aunque añadamos previamente lugol

Question 23

¿Qué es la microscopía de campo oscuro?

Answer 23

Entre la fuente de luz y la lente del condensador introducimos un diafragma, de manera que la luz que llega al condensador no es un cilindro de luz completo, sino que existe un diafragma que hace que solo llegue al condensador un anillo de luz, oscuro en el centro. Esta luz, cuando llega al condensador, se refracta, de forma que cuando llega a la muestra, si no hay una célula los rayos no entran en la lente objetivo, sino que forman un cono de luz y el objetivo queda en el centro oscuro. Se ven las células brillantes sobre el fondo oscuro

Se consigue aumentar hasta unas 10 veces el poder de resolución respecto al microscopio tradicional, llegando hasta 20 nm, lo que permite visualizar algunas células bacterianas o microorganismos muy delgados que no se pueden ver con el de campo claro, como flagelos y espiroquetas (unas estructuras en espiral que son patógenos humanos como Treponema pallidum (sífilis), Borrellia burgdorferi (enfermedad de Lyme), Leptospira (leptospirosis)…) Por tanto, se usa en diagnóstico. Para ello se hace un examen en fresco del exudado de una lesión o de la sangre. Cabe destacar que no es necesario teñir y que se pueden ver los microorganismos vivos (en movimiento)

Question 24

¿Qué es la microscopía de contraste de fases?

Answer 24

Es capaz de transformar pequeñas diferencias en los índices de refracción de los componentes celulares mediante retardos en la fase de la luz para que tengan distintas intensidades lumínicas

Entre la fuente de luz y la muestra se introduce un diafragma anular, al cual llega la luz procedente de la fuente de la parte de abajo. Posteriormente, esa luz llega al condensador, el cual es algo diferente. Este hace que cuando la luz no atraviese en la muestra ningún componente en el medio acuoso (esto es, el índice de refracción celular es menor que el del medio), todos los rayos de luz que entren en el condensador vayan a parar a un nuevo componente llamado la placa de fase, concretamente a un sitio de dicha capa denominado anillo de fase. Este es un componente circular de cristal especial y diferente en las zonas blancas que en el propio anillo de fase. Así, todos los rayos sufrirán un retardo de 1/4 de longitud de onda

Por el contrario, si en la muestra hay componentes con índice de refracción mayor que el del medio, los rayos al atravesar la placa de fase lo harán por un sitio diferente al anillo de fase (en la zona central o periférica), por lo que se adelantarán entre 0 y 1/4 de longitud de onda (por tanto, siempre será menos de 1/4)

Se puede aumentar la diferencia en la intensidad del contraste adelantando lo que no atraviesa la muestra y retardando lo que la atraviesa

No necesita tinción

Hay una modificación de esta microscopía de contraste de fases llamada DIC (microscopía de contraste diferencial), en la cual la placa de fase, en lugar de ser materiales ópticamente diferentes, usaría prismas y se observarían como imágenes en 3D

Question 25

¿Qué es la microscopía de fluorescencia?

Answer 25

Se ilumina la muestra con una luz de longitud de onda corta. La muestra debe ser fluorescente (bien de forma natural como en el caso de algunos microorganismos que contienen clorofila u otros pigmentos, o artificial), lo que significa que al ser iluminado con cortas longitudes de onda debe ser capaz de captar parte de esa luz y emitir una luz de mayor longitud de onda. Para ello se tiñen las muestras con fluorocromos, compuestos químicos que se unen covalentemente a la muestra y tienen capacidad de absorber una luz y emitir otra luz. Siempre la luz que se absorbe tiene una longitud de onda menor y mayor energía que la longitud de onda que se emite, la cual a su vez tiene menor energía

Tienen una configuración particular: contiene una lámpara de arco de mercurio que emite longitudes de onda pequeñas y un filtro excitador para eliminar longitudes de onda largas. Además, presenta un espejo dicromático que, por una parte, refleja las longitudes de onda pequeñas para que lleguen a la muestra, mientras que deja pasar a través de sí las longitudes de onda largas para que lleguen al receptor, captadas por un detector o vistas por nosotros a simple vista. También hay un filtro de barrera que elimina la radiación ultravioleta pero permite el paso de la luz visible. La muestra debe teñirse con fluorocromos (que absorbe radiación de longitud de onda corta y emite luz de mayor longitud de onda)

Question 26

¿Qué es la microscopía de inmunofluorescencia?

Answer 26

Es una versión de la microscopía de fluorescencia. A los fluorocromos se les une un anticuerpo contra un organismo específico y esto hace que en una determinada muestra puede verse si está o no dicho microorganismo. Por su parte, si este anticuerpo fluorescente no se une, no se verá fluorescencia alguna, por lo que no se encontrará el microorganismo en cuestión en la muestra. Este es un método rápido de detección e identificación de patógenos

Otra aplicación de lo que acabamos de ver sería FISH (Hibridación Fluorescente In Situ), en la cual se usan sondas de ácidos nucleicos teñidas con fluorocromos, de forma que el ácido nucleico se unirá específicamente a un tipo celular

Question 27

¿Qué es la microscopía confocal?

Answer 27

Es como un microscopio de fluorescencia en el cual hay una fuente emisora de la luz, pero en este caso se trata de un láser. Por tanto, esto nos permite elegir qué punto de la muestra específicamente queremos ver con dicha longitud de onda, esto es, la excitación no será solo muy precisa en un punto, sino también en un plano. Además, con la ayuda de unos colimadores (ranuras) eliminamos toda aquella emisión de luz por parte de la muestra que no proceda de ese punto específico. Presenta además un espejo dicroico que refleja luces de longitud de onda corta, pero deja pasar las de longitud de onda larga. La muestra hay que teñirla previamente con fluorocromos. Todas las micrografías serán juntadas luego en un ordenador acoplado

Cabe destacar que otra diferencia entre este microscopio y el de florescencia es que en la fluorescencia está más difuminado y en este caso la imagen es mucho más nítida y definida

Se pueden analizar biopelículas. Por ejemplo, se pueden ver células que están en un plano determinado, ya que las imágenes obtenidas son en 3D, por lo que se ve plano por plano

La fibrosis quística autoinmune es una enfermedad hereditaria que afecta al cuerpo de diferentes formas. Estos pacientes son muy propensos a sufrir infecciones pulmonares por Pseudomonas, que forman grandes películas a lo largo del mismo. Una forma de romper dichas películas (biopelículas) sería una manera de tratar a estos enfermos

También es importante en personas sondadas en hospital, donde debido a los catéteres es común la aparición de biopelículas por la entrada de microorganismos

Question 28

¿Qué es la microscopía de contraste por interferencia diferencial (DIC o Nomarsky)

Answer 28

Se parece a la microscopía de contraste de fases. Pequeñas diferencias en el índice de refracción de la muestra se traducían en diferencias de emisión de luz. Aquí, pequeñas diferencias en índices de refracción de la muestra se traducen en diferencias en intensidad, pero creando un efecto como en 3D de la muestra. La muestra es iluminada con dos haces de luz polarizada perpendiculares entre sí- Uno de esos planos de luz polarizada ilumina el fondo y el otro es el que ilumina la muestra y, cuando interfieren en el plano, al igual que ocurría con contraste de fases, la interferencia de ambos haces en el plano de enfoque genera este efecto tridimensional, el cual realmente es falso

Normalmente se combina con un microscopio confocal o de fluorescencia para una previsualización de la muestra. Permite visualizar células sin teñir y diferenciar algunas estructuras

Question 29

¿Qué es la Microscopía Electrónica de Transmisión (MET)?

Answer 29

Ya no se usa la luz para iluminar la muestra, sino que se usan electrones, los cuales tienen una longitud de onda mucho menor que la luz de microscopía óptica, lo cual permite observar objetos más pequeños (de hasta 100.000 aumentos). Tampoco se usan colorantes, sino que se usan metales pesados/iones metálicos para crear el contraste, obteniéndose así micrografías electrónicas (no fotografías, ya que la impresión es una placa que detecta electrones)

Esta microscopía electrónica permite una visualización de virus, estructuras bacterianas y detalles superficiales de las células.

Las lentes son condensadores magnéticos (electroimanes) en vez de lentes de cristal (como en el microscopio óptico), aunque su función sigue siendo desviar los haces de electrones para focalizarlos sobre la muestra y que esta quede bien iluminada. Las lentes objetivo y ocular son también electroimanes. Así, aplicando un determinado voltaje se desvían los electrones y se enfocan en la pantalla de impresión fluorescente para obtener una imagen. En esta pantalla hay un detector.

Es muy importante que dentro de la torre donde todo este proceso ocurra haya vacío, de forma que los electrones no choquen con nada y no sufran variaciones indeseables

Los electrones tienen un inconveniente, y es que tienen muy poco poder de penetración. Esto implica que la muestra para que sea irradiada con electrones, los cuales deben atravesarla, debe ser cortada de manera ultrafina (de aproximadamente 20-60 nm), que se prepara con ultramicrotomos, cuchillas que cortan en rodajas la muestra embebida en resina epoxi. Una alternativa es colocar las muestras encima de unas rejillas diminutas de unos 2-3 nm de cobre o níquel donde quedarían las bacterias adheridas, pudiendo así atravesar la muestra los electrones. El resultado es que las regiones más densas dispersan los electrones, mientras que en las zonas menos densas sí que se atraviesan, por lo que se ven más claras

Question 30

¿Qué es la microscopía electrónica de vacío/barrido?

Answer 30

En ella los electrones inciden sobre la superficie de la muestra, que se prepara de forma diferente. Hay un detector. A las posiciones de las muestras que están más escondidas llegan menos electrones y cuesta más rebotar y que sean detectados, por lo que se verán más oscuras esas zonas y las que están en la superficie están más claras. Se formarán imágenes 3D. No hacen falta cortes tan pequeños ni resinas epoxi

Question 31

¿Qué es la microscopía de sonda de barrido?

Answer 31

Son los más modernos. Se puede visualizar hasta moléculas. Hay fuerzas de repulsión que hace que se vaya desplazando el voladizo, el cual irá subiendo y con el fin de obtener imágenes muy precisas de moléculas

Question 32

¿Qué es la microscopía de efecto túnel?

Answer 32

Permite visualizar DNA

Question 33

¿Qué es la microscopía de fuerza atómica?

Answer 33

Se usa para superficies que no conducen bien la electricidad. Lo que ocurre es que para este tipo de muestras es bueno no fijar ni incluir la muestra en ninguna resina. Se consiguió fotografiar por primera vez una reacción química