Tema 2.6 Polymerase Chain Reaction (PCR)

Question 1

Describa la naturaleza de la PCR

Answer 1

Técnica que permite multiplicar fragmentos ADN o ARN in vitro, desarrollada por el doctor Kary Mullis en 1986.

Question 2

Mencione y describa las cuatro fases de la PCR

Answer 2

1. Desnaturalización
   Calentamiento 100 ºC; puentes de hidrógeno se separan.
2. Anneling (alineamiento)
   Enfriamiento 55 ºC; alineación de primers.
3. Polimerización o extensión
   Polimerasa polimeriza ADN.
4. Repetición
   35 - 45 ciclos.

Question 3

Mencione las ventajas de la PCR

Answer 3

• Alta sensibilidad.
• Alta especificidad.
• Rapidez.
• No requiere cultivos.

Question 4

Mencione las desventajas de la PCR

Answer 4

• Contaminación del medio.
• Mínima secuencia de entre 20-40 pares de bases.
• Se requieren primers específicos.
• Posible aparición de errores de polimerización.

Question 5

Explique los principios de la PCR en tiempo real.

Answer 5

Utiliza 3 primers: foreward, backward y probe (sonda).
Refleja qué cantidad de fragmentos han sido replicados.