TEMA 2 Flashcards
Com es el model de replicacio?
Semiconservatiu
2 cadenes formades per original i sintetitzada
Que sha de fer perque es pugui dur a terme la replicacio?
La molec de dna sha dobrir gracies a uns enzims i es forma una estructura anomenada bombolla de replicacio( 2 horquilas) helicases
I a mes aquesta replicacio es bidireccional
Com es fan les dos cadenes?
Una es fa 5’~3’ (continua)
Laltra es fa 3’~5’ (retardada) en fragments (fragments dOkazaki 1000-2000 nucleotids)
Sintesi presenta discontinuitat
Quins son els enzims encarregats de la replicacio?
- dna polimerasa I
- dna ligasa
- dna polimerasa III
Propietats dna polimerasa I
Per actuar necesita un extrem 3’ ~OH lliure
Seguint un motlle, comença a fer la sintesi de la cadena pero no en sintetiza la major part
Processivitat moderada (20 nucleotids)
Estructura 103kda
10 nucleotids/s
Activitats enzimatiques de dna polimerasa I
Exonucleasa 3’-5’ corregeix errors
Exonucleasa 5’-3’ elimina el RNA del encebador
Polimerasa 5’-3’ sintetitza una petita part del dna
Propietats dna ligasa
Uneix els fragments dOkazaki entre si a traves dun enllaç fosfodiester entre els extrems dels fragments
Ho fa a traves de atp i nad+
Que son els fragments de klenow?
De vegades la dna polimerasa I perd activitat enzimatica exonucleasa 5-3 i la resta del fragment es el fragment de klenow
Carac dna polimerasa III
Molta procesivitat (1000 nucleotids) gracies a la subunitat beta afaga el dna
Alta potencia catalitica (1000/sec)
Molt fiable
Replicacio procariotes (e coli) Iniciacio
Comença a oriC
DnaA reconeix seq nucleotids oriC i separa 2 cadenes amb prt HU i IHF
Helicasa (complex dnab+dnac) separa dos cadenes trencant ponts hidrogen
Ssb separen tmb i donen estabilitat
Dna girasa esta perque davant la bombolla hi ha superenrotllament positiu es posa superenrotllament negatiu
Replicacio e coli enlongacio a lagging strand
Primasa (DnaG) fa primer
I tmb hi ha primosoma (primasa+ helicasa lagstr)
Polimerasa III sintetiza major part cadena
Polimerasa I elimina encebador i sintetitza nucleotids
Dna ligasa uneix fragments
Tmb pol I arregla errors amb exo 3-5
I polimerasa II arregla errors fisics (no esta a replicacio)
Replicacio ecoli leading strand
Rna primasa crea 1 primer nomes
Polimerasa III fa la cadena
Pol I corregeix errors fa alguns nucleotids i treu encebadors
Terminacio dna ecoli
Com cromosoma es circular es formen 2 forquilles replicacio que avancen en sentits oposats fins que es troben al punt oposat de loric C , el TER
quan les dos forquilles entren a TER, es un punt de no retorn
Enzims per acabar replicacio ecoli
tus: contrahelicasa que evita obertura dna
Dna girasa: produeix talls de doble cadena , gracies a aquest tall, un segment de dna passa a laltre costat i son lligats de nou, formant nou cromosoma
Carac replicacio eucariotes
Fragments okazaki molt curts 100vs 1000 en bacteris
5 dna polimerases
No tenen activitat exonucleasa 5-3
Els frag seliminen amb
(RNAasa H1 rotura endonucleolitica
FEN1/MF1: exonucleasa que elimina rna)
Replicacio mes lenta que en procariotes (100-250 bases/sec)
Problemes replicacio eucariotes
Replicacio mes lenta perque te molts oriC
Replicons i fusions de bombolles de replicacio
Dna lineal, pot perdre info als extrems i es necessiten telomers
Estructura nucleosomica per tant shan de desmontar els nucleosomes
Tenen orignes de replicacio ARS
Subunitats dna polimerasa eucariotes
Alfa:inica replicacio Beta:repar dna Delta: aporta major part nucleotids gracies a diverses subunitats (PCNA i RFC) Gamma: fer dna mitocondrial Epsilon: funcio desconeguda
Perque hi ha regulacio de la replicacio als eucariotes?
Perque la sintesi del dna nomes pot passar una vegada per cicle celular mentre que els procariotes es independent del cicle celular
En que consisteix la regulacio de replicacio en eucariotes?
La seq ARS (=oriC) recluta les proteines ORC
Les ORC recluten Cdc6p (enzims per preparar replicacio)
Gracies als Cdc6p es recluten les MCM inactives (prt manteniment minicrosoma)
Ve b-cdk ciclina i cdc7-dbf4 amb activitat quinasa que activa MCM quan la cel es divideix
Les MCM senrotllen i actuen sobre les helicases
Sintesi cadena continua a eucariotes
Els primers es sintetizen amb polimerasa alfa
Suneix dna polimerasa delta/PCNA (PCNA abrazadera deslizante) fara sintesi dna
Necessita RFC per ensamblar anell
Sintesi lagging strand en eucariotes
1) Comença amb RPA que suneix a ssDNA (estabilitza la molecula) equivalent a ssb de procariotes
2)Primasa suneix a pol alfa i sintetizen encebador (10 nucleotids ) i frag oz (15-30 nucleotids)
El complex pol alfa/primasa solten el dna
3) RFC ajuda a unirse a pol delta i PCNA, continua sintesi frag (majoria cadena 130-200 nucleotids) i el complex es deixa anar quan toca amb lanterior fragment okazaki
4) RNAasa H degrada encebador perque quedi 1 nucleotid
5) RNAasa H degrada el primer RNA fins lultim nucleotid, lultim el treu FEN1 (flap1) deixa un flap que treu ell mateix
6) aixo ho rellena pol delta/PCNA i la ligasa els uneix
Com es fa la replicacio als extrems?
A partir de telomers
Ve lenzim telomerasa i sintetiza un fragment de dna a partir del seu motlle de rna (telomer) a la cadena llarga
Es sintetiza un encebador a la curta i ve polimerasa a acabar la replicacio
Com es la fidelitat de replicacio
Alta
Gracies a les dna polimerases es poden detectar mutacions
Sequivoca poc
Es poden veure errors gracies al fragment de klenow
Que es lestres replicatiu?
Quan una cel es replica es produeix estres replicatiu que consisteix en que una cel queda amb pocs nucleotids i es formen dimers
