Tema 14. Observación al microscopio de preparaciones histológicas. Artefactos y contaminación Flashcards
si en el análisis microscópico se observan muescas o incisiones en la muestra, ¿qué indica?
alguna zona de la cuchilla estaba rota debido a que se corto una muestra dura sin descalcificar.
Microscopio óptico simple o lupa
aumento
para qué se utiliza
lentes que posee
proporciona una imagen aumentada entre 2 y 30 veces.
En histología se utiliza para la disección de piezas anatómicas de pequeño tamaño.
Tiene una sola lente convergente
partes del microscopio
óptica (permite aumentar o ampliar la muestra)
mecánica (sirve para enfocar la lente y desplazar la muestra)
Partes de la lupa
parte mecánica-> soporte
parte óptica-> una lente convergente
cuántas lentes posee Microscopía óptica compuesta
2 lentes convergentes
Microscopio óptico convencional:
aumento
para que se utiliza
proporciona una imagen aumentada de hasta 1000
1500 veces.
Muestras teñidas principalmente.
parte mecánica microscopio óptico convencional
- Tubo: contiene el ocular y el revólver
- Revólver -> contiene los objetivos y nos permite rotarlos y cambiar de aumentos (4,10, 20, 40, 100). El 100 se hace con el aceite de inmersión
- Brazo o pie o soporte: entrelaza y une las partes
- Platina: Parte plana y horizontal donde se coloca la muestra y tiene un agujero por donde pasa la luz.
- Pinzas: sujeta la muestra y evita que se mueva.
- Tornillos de enfoque macrométrico: primero se hace el enfoque grueso con este
- Tornillos de enfoque micrométrico: segundo se hace el enfoque fino con este
parte óptica microscopio óptico convencional
- Diafragma: condiciona el grosor del haz de luz que tiene que pasar. Tiene una pestaña que determina la cantidad de luz que pasa a través de la muestra
- Condensador: junta o concentra la luz para que pase a través del agujero de la platina
- Objetivo: aumenta la imagen (4,10, 20, 40, 100). El 100 se hace con el aceite de inmersión
RECORRIDO DE LOS RAYOS LUZ
EN Microscopio CONVENCIONAL de campo claro
1ª lente es convergente de la condensadora
2ª lente es la del objetivo
caract microscopía campo oscuro
- Los haces de luz algunos atraviesan la muestra y otros no.
- Los que nos interesan son los q atraviesan la luz.
- Las zonas donde no reciben los haces de luz estarán oscuros.
- Los que reciban luz y esta las atraviese se verán como estructuras brillantes.
- La muestra tiene que estar sin teñir.
- Su función es remarcar estructuras
caract. microscopía de contraste de fases
- Se utiliza para células vivas, móviles y microorganismo sin teñir.
- El fundamento de esta microcopia es la electrodensidad de una muestra.
- Cada molécula tiene un numero de átomos, las partes oscuras son las que tienen un mayor numero de átomos y las que tienen menos numero de átomos se ve mas claro.
- Al tener mayor cantidad átomos el haz de luz pasa mas lento y se ve mas oscuro. -> gris oscura
- Al tener menor cantidad átomos el haz de luz pasa mas rápida y se ve mas claro. -> gris claro
tipos de luz en Microscopía de contraste de fases
continua y discontinua
caract Microscopía de fluorescencia
- Muestras que se usan fluorocromos, es decir, que se use inmunofluorescencia.
- Absorbe luz ultravioleta a una longitud de onda concreta, luego la partícula con fluorocromo emitirá la luz a una longitud de onda mayor.
Microscopio electrónico
proporciona una imagen aumentada de hasta 1 millón de veces.
tipos de microscopio electrónico
- transmisión
- barrido
en microscopía electrónica, sobre que se aplica la muestra?
rejilla de Ni o Cu, debido a que los e- no atraviesan el vidrio
diferencia entre microscopía óptica y electrónica
el haz que se utiliza
óptica-> luz
electrónica-> e-
que tipo de fijación, inclusión y microtomo se utiliza para microscopía electrónica?
fijacion con tretaoxido de osmio o glutaraldehido
incluida en resina
ultramicrotomo pq necesitamos cortes ultrafinos para que los e- atraviesen.
caract microscopía electrónica de transmisión
los e- atraviesan la muestra
dentro del tubo hay un sistema de vacío para que nada obstaculice a los e-, y que estos vayan rectos y no cambien su dirección.
dentro del tubo hay placas electromagnéticas que se encargan y garantizan que los e- sigan su dirección correcta
en función de la electrodensidad, es decir, nº de átomos, los e- se desviarán mas o menos.
caract microscopía electrónica de barrido
escanea la superficie de la muestra que se ve como relieve
similitud entre microscopio electrónico de transición y barrido
muestras se recubren con una película de átomos pesados, como el oro
define artefactos
cualquier alteración no deseada en las preparaciones de las muestras a analizar, las cuales pueden deberse a la técnica utilizada para su toma o su procesamiento
tipos de artefactos
Artefactos originados durante la fijación de la muestra:
Artefactos debido al uso del microtomo:
Artefactos originados durante la tinción:
Artefactos originados durante la fijación de la muestra:
●Tiempo excesivo entre obtención y fijación de la muestra.
-> se produce necrosis
● Fijación excesiva.-> se endurece la muestra
● Fijación incorrecta o pigmentos de formol.->incorrecta-> el formol no tiene ph o caracct optimas, y se forman precipitados o pigmentos de formol
● Fijación irregular o “fijación zonal”.->ocurre con muestras muy grandes, que hay partes fijadas y partes sin fijar
Artefactos debido al uso del microtomo:
●Rotura de la cuchilla.
● Velocidad de corte excesiva.->cortar muy rápido (sale a filas como en las fotos)
● Mala sujeción de la cuchilla.
● Etc.
Artefactos originados durante la tinción:
●Tinción incompleta.
● Depósitos o precipitados de colorantes.->punteado negro oscuro, precipitan los componentes
● Presencia de cera residual->si no se elimina la parafina, luego no penetra la tinción
● Etc
