Tema 12. Procedimientos de las técnicas inmunohistoquímicas y controles. Marcadores tumorales

Question 1

define Recuperación antigénica:

Answer 1

proceso que desenmascara los epítopos de los Ags que quedaron ocultos por la fijación de la muestra con formaldehídos.
esto es posible por la lisis de las uniones cruzadas entre moléculas, el formol rompe los epítopos y no permiten su detección

Question 2

tipos de recuperación antigénica

Answer 2

MEDIANTE DIGESTIÓN ENZIMÁTICA

MEDIANTE CALOR (+ frecuente)

Question 3

Técnicas de recuperación antigénica mediante digestión enzimática

Answer 3

Aplicación de enzimas proteolíticas (proteinasa K, pepsina o tripsina) sobre el corte histológico para romper los enlaces cruzados.

Question 4

Técnicas de recuperación antigénica mediante calor

Answer 4

Incubación del corte histológico con calor en una solución acuosa tamponada (Tris-EDTA, Tris-HCl, tampón citrato, etc.) para romper los enlaces cruzados.

Question 5

define Bloqueo de la tinción de fondo

Answer 5

proceso que bloquea la tinción inespecífica de Ags que no se quieren detectar

Question 6

TIPOS DE BLOQUEO DE LA TINCIÓN DE FONDO

Answer 6

1.Añadir un suero bloqueante de los Acs primarios. bloquear hasta q venga el anticuerpo secundario específico

2. Reducir el tiempo de incubación del Ac primario. para que hayan menos uniones
3. Lavar adecuadamente cada paso del procedimiento. mínimo 3 lavados posteriores para eliminar esas tinciones específicas.
4. Etc.

Question 7

tipos de Controles del método

Answer 7

CONTROL -
CONTROL +

Question 8

CONTROL -

Answer 8

Uso de cortes histológicos sin el Ag para el Ac.

No debe reaccionar.

Si lo hace, indica reacción cruzada o contaminación de los reactivos

Question 9

CONTROL +

Answer 9

Uso de cortes histológicos con el Ag para el Ac.

Debe reaccionar.

Si no lo hace, indica fallo técnico

Question 10

que debe de ocurrir con los controles del método para finalmente emitir un diagnóstico

Answer 10

que el control - y + hayan salido bien

Question 11

define Inmunomarcaje múltiple

Answer 11

marcaje de dos o más moléculas con Acs conjugados a fluorocromos diferentes.

Question 12

Método de la peroxidasa- antiperoxidasa

Answer 12

1. se añade anticuerpo primario
2. se añade anticuerpo secundario
3. se añade complejo peroxidasa-antiperoxidasa (PAP)
4. se añade peróxido de H (sustrato de la enzima peroxidasa)
5. se añade diaminobencidina (sustancia cromófora), la cual reacciona con el h2o2 y lugar un precipitado de color marrón

Question 13

como son los anticuerpos utilizados en el método peroxidasa-antiperoxidasa.

Answer 13

de diferente animal para evitar uniones inespecíficas

Question 14

Método avidina-biotina-peroxidasa

Answer 14

1. se añade anticuerpo primario específico para el antígeno
2. se añade anticuerpo secundario biotinilado (reutilizable)
3. se añade complejo avidina-biotina (ABC)
4. se añade peroxidasa formando el complejo avidina-biotina-peroxidasa
5. se añade peróxido de hidrógeno (sustrato peroxidasa)
6. se añade diaminobencidina (sustancia cromófora), la cual reacciona con el h2o2 y lugar un precipitado de color marrón

Question 15

método fosfatasa alcalina-antifosfatasa alcalina

Answer 15

1. se añade anticuerpo primario específico para el antígeno
2. se añade anticuerpo secundario (reutilizable)
3. se añade complejo fosfatasa alcalina-antifosfatasa alcalina (APAAP) que son anticuerpos enfrentados
4. se añade naftol AS-MX (sustrato fosfatasa alcalina)
5. se añade sales de diazonio, concretamente Fast Red,(sustancia cromófora), la cual reacciona con el naftol AS-MX y da lugar un precipitado de color rojo

Question 16

como se inhibe la actividad de la peroxidasa endógena

Answer 16

Incubación del tejido en metanol absoluto con h2o2

Question 17

como se inhibe la actividad de la fosfatasa alcalina endógena

Answer 17

Incubación del tejido en levamisol

Question 18

Pasos generales de la inmunohistoquímica en tejidos

Answer 18

1. Obtención de la muestra
2. Fijación de la muestra
3. Deshidratación e inclusión en parafina
4. Desparafinado y rehidratación para que haya solubilidad
5. Recuperación antigénica-> por lo que ha quedado tapado por el formol
6. Bloqueo de sustancias endógenas (que están de forma natural)
7. Aplicación de anticuerpos y cromógenos
8. Análisis histológico, interpretación y diagnóstico

Question 19

para que sirven los marcadores tumorales

Answer 19

identificar el tipo de neoplasia para emitir diagnóstico y pronóstico
histogénesis
intentar determinar la localización de la neoplasia primaria en caso de metástasis.

Question 20

nombra tipos de marcadores tumorales

Answer 20

HISTOQUÍMICOS
INMUNO HISTOQUÍMICOS
ULTRA ESTRUCTURALES
MOLECULARES

Question 21

MARCADORES TUMORALES: HISTOQUÍMICOS

Answer 21

Detección de tumores mediante la modificación química de moléculas.

Question 22

MARCADORES TUMORALES: INMUNO HISTOQUÍMICOS

Answer 22

Detección de Ags en el tejido mediante Acs marcados para clasificar el tipo de tumor.

Question 23

MARCADORES TUMORALES: ULTRA ESTRUCTURALES

Answer 23

Detección de anomalías en las estructuras celulares. marcar aparato de Golgi, retículo endoplasmático, orgánulos

Question 24

MARCADORES TUMORALES: MOLECULARES

Answer 24

Detección de alteraciones genéticas o epigenéticas (cambio genético que deriva del ambiente)