Tema 11. Fundamentos de los métodos inmunohistoquímicos. Clasificación Flashcards
tipos de anticuerpos
monoclonales y policlonales
diferencias anticuerpos policlonales de monoclonales
reconocen múltiples epítopos-> reconocen 1 solo epítopo
moléculas heterogéneas-> moléculas idénticas
especificidad variable Ag-Ac.->Alta especificidad Ag-Ac
Mayor estabilidad.-> menor estabilidad.
Costo bajo.-> Costo intermedio-alto.
sintetizados a partir de diferentes linfocitos B.-> se sintetiza a partir de un único linfocito B.
nombra métodos inmunohistoquímicos
Métodos directos e indirectos
Métodos directos
Se añade un Ac marcado o conjugado que va a reaccionar
con el Ag del tejido y así detectarlo (complejo Ag-Ac).
Métodos indirectos
Se marca un Ac secundario que se unirá al Ac primario (complejo Ag- Ac-Ac)
de los métodos inmunohistoquímicos, ¿Cuál es el más utilizado y por qué?
métodos indirectos porque con los métodos directos solo se pueden fabricar ac específicos para un antígeno específico (reconocen un solo epítopo)
ventajas métodos directos
Tiempos de incubación cortos
ventajas métodos indirectos
Señal amplificada.
Versatilidad. se puede reutilizar para distintos ac primarios
Alta sensibilidad de detección.->se detecta fácil
desventajas métodos directos
Señal baja. (se ve poco)
Baja sensibilidad de detección. (se detecta difícil)
desventajas métodos indirectos
Tiempos de incubación largos.
No detecta pequeñas cantidades de Ag.
En función a qué se utiliza un marcador u otro en técnicas inmunohistoquímicas
tipo de tejido
procesamiento
tipo de microscopio que se
vaya a utilizar
tipo de marcadores de anticuerpos en técnicas inmunohistoquímicas
MARCADORES FLUORESCENTES
MARCADORES ENZIMÁTICOS
ORO COLOIDAL
MARCADORES FLUORESCENTES
Ac marcado con un fluorocromo:
● Fluoresceína . verde
● Rodamina. rojo
MARCADORES ENZIMÁTICOS
Ac marcado con una enzima a la que se le añade el sustrato en el medio de incubación:
● Peroxidasa
● Fosfatasa alcalina
ORO COLOIDAL
oro unida a proteína A y esa proteínas se une al ac marcado
tipos de técnicas de inmunofluorescencia
inmunofluorescencia directa
inmunofluorescencia indirecta
inmunofluorescencia directa
se añade un anticuerpo primario marcado y conjugado con un fluoróforo y se une al antígeno del tejido. Tras esta unión, el fluoróforo se excita y el antígeno de interés se marca
inmunofluorescencia indirecta
se añade un anticuerpo primario que se une al antígeno de interés
después se añade un anticuerpo secundario marcado, que está conjugado con un fluoróforo y se une al anticuerpo primario. Tras esta unión, el fluoróforo se excita y el antígeno de interés se marca
técnica utilizada en inmunoenzimática
TÉCNICA DE ELISA
en que consiste técnica de ELISA
permite cuantificar los antígenos de 1 tejido mediante la adición de ac marcados o conjugados a enzimas
explica técnica de elisa
- Se añade el anticuerpo primario que se une al antígeno.
- Se añade el anticuerpo secundario conjugado con una enzima (peroxidasa o fosfatasa alcalina).
- Se añade el sustrato de la enzima, que al reaccionar con la enzima genera un producto coloreado.
- La intensidad del color indica la cantidad de antígeno en la muestra
