Tecnicas inmunologicas Flashcards

1
Q

Mencione 6 utilidades de las técnicas inmunológicas.

A

1.detección directa de MO.
2.siguimento de la evolución de una enfermedad o tto.
3.identificación de MO en cultivo.
4.detección de toxinas bacterianas
5.evolución serologica de donantes de sangre.
6.evolución de infecciones de embarazada o RN.

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2
Q

Que tipo de celula procesa y presenta el Ag-TI?

A

Lifoncito B (CD5+)

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3
Q

Cual Ag es capaz de generar memoria inmunológica?

A

Ag-TD

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4
Q

Cuales son las diferencias entre la respuesta inmune primaria y secundaria?

A

1.primaria periodo pre-serologico más largo,
2.menor concentracción,
3.rápida disminución y
4.baja afinidad por Ac.
secundario lo contrario.

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5
Q

Qué son vacunas conjugadas?

A

Son vacunas que mesclan Ag-TI y Ag-TD, generan memoria y protección frente a futuras infecciones.

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6
Q

Qué inmunoglobulina la madre pasa al feto? A partir de cual semana de gestación?

A

IgG, 10 semana

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7
Q

Cuando el feto empieza a producir IgM?

A

20 semana de gestación

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8
Q

Cuando el RN empieza a sintetizar IgG propia?

A

entre 2 y 4 semana de vida.

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9
Q

Cuanto tiempo el RN tarda en madurar sistema inmune?

A

entre 12 a 15 meses.

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10
Q

Que es epitope y paratope?

A

Epitope: Sítio del antigeno que se une al Ac.
Paratope: parte del Ac que se une al Ag.

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11
Q

Que es afinidad del Ac?

A

Es la fuerza de unión entre un epitope y paratope o entre Ag y Ac.

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12
Q

Qué se denomina Avidez de un Ac?

A

Es la suma de todas las fuerzas de unión de un Ac cuando se une a más de un epitope del Ag.

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13
Q

Qué Ac tiene mayor avidez IgM o IgG?

A

IgM tiene mayor avidez porque tiene 10 sitios de unión al antígeno mientras IgG solamente 2.

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14
Q

Qué significa presencia de Ac con baja avidez?

A

significa una infección reciente.

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15
Q

Qué es el parametro de validez de una prueba diagnostica?

A

Es el grado que un test mide lo que se supone que debe medir. Su especificidad y sensibilidad son medidas de validez. (frecuencia de confirmación por procedimientos diagnósticos complejos)

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16
Q

Qué es el parametro de seguridad de una prueba diagnostica?

A

Es la determinación del valor predictivo de un resultado positivo o negativo. (la probabilidad de un valor positivo indicar presencia de enfermedad)

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17
Q

Que es la especificidad analítica de una prueba?

A

Es el grado de distinción de un Ag (o Ac) en cuestión de otros componentes.
Grado de identificar unicamente al Ag (o Ac).
Una alta especificidad detecta solamente un Ag (o Ac) y no presenta reacciones cruzadas entre Ag (o Ac) similares.

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18
Q

Que es sensibilidad analítica?

A

Es el limite inferior de detección de un Ag (o Ac) de una prueba. Una tecnica más sensible, detecta a una menor concentración del Ag (o Ac).

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19
Q

Que es especificidad diagnostica?

A

Es la capacidad de detectar correctamente un individuo sano. Capacidad de una prueba dar negativo en ausencia de infección.

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20
Q

Qué es sensibilidad diagnostica?

A

Es la capacidad del test de detectar correctamente un individuo enfermo. Capacidad de una prueba dar positivo en presencia de infección.

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21
Q

Que es reactividad cruzada?

A

Es cuando un anticuerpo reacciona con Ag de estructura similar al Ag original que desencadenó la respuesta inmune.

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22
Q

Se extrae sangre de 100 personas y para realizar el diagnóstico de una enfermedad infecciosa se utiliza una técnica de sensibilidad 80% y especificidad de 90%. Cuantos falsos positivos y falsos negativos habrá en esa técnica.

A

Sensibilidad: limite minimo, enfermos no detectados: 20 personas con falsos negativos.
Especificidad: unión Ag Ac especifico, 10 personas con falsos positivos.

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23
Q

Como se calcula la Sensibilidad?

A

VP/(VP+FN)

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24
Q

Como se calcula la epecificidad?

A

VN/(VN+FP)

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25
Q

Que es y como se calcula un Valor predictivo Positivo?

A

Probabilidad de un individuo con resultado positivo esté realmente infectado. VPP=VP/(VP+FP)

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26
Q

Qué es y como se calcula un Valor predictivo Negativo?

A

Probabilidad de un individuo con resultado negativo realmente no esté infectado. VPN=VN/(VN+FN)

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27
Q

De qué depende los Valores predictivos?

A

De la prevalencia de la infección.

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28
Q

Para diagnostico se sífilis se utiliza una tecnica más especifica o más sensible? Porque?

A

Más sensible(VDRL), por baja probabilidad de dar falsos negativos. Los test más sensibles suelen ser menos específicos, por lo tanto pueden dar falsos positivos, despues se hace una prueba confirmatoria más específica (FTA-ABS o Micro hemaglutinación para T. Pallidum)

29
Q

Qué es interacción primaria y secundaria?

A

La interacción primaria es la interacción ag-ac es una interacción reversible, no covalente e invisible al ojo humano
La interación secundaria es irreversible, forma una red macromolecular y es visible.

30
Q

Que tipo de tecnicas podemos detectar la interacción secundaria? Defínalas.

A

Mediante a tecnicas directas: Precipipitación y Aglutinación.
Precipitación: combina Ag y Ac complementarios y solubles que al interaccionar produce un complejo insoluble (complejo inmune) que es una red de precipitados.
Aglutinación: utiliza un Ag o Ac adheridos a particulas inertes (como latex, bentonina, eritrocitos o bacterias muertas) que al poner en contacto Ag y Ac produce un agregado visible.

31
Q

Cuales son las dos técnicas más usadas de precipitación en un medio sólidos? Expliquelas. y nombré los parásitos que se identifican por ellas.

A

Son hechas sobe un soporte de Agar: Inmunodifusión doble (IDD) y ContraInmunoElectroForesis (CIEF).
IDD: permite reconocer si los Ag son iguales, distintos o comparten algun epitope. Pemite enfrentar distintos sueros de pacientes (Ac) a un mismo Ag conocido. Diag: Hidatidosis por parasito Echinococcus granulosus
CIEF: es similar al IDD pero más rápida al aplicar un campo electrico el Ag y Ac difunden con mayor velocidad, precipitando en menor tiempo. Diag: micoticas por hongos aspergillus, Histoplasma o Pacoccidioides.

32
Q

Cual de las tecnicas directas tienen mayor sensibilidad?

A

Aglutinacion.

33
Q

Cuales son los tipos de TI de Aglutinación?

A

A. Directa, pasiva, reversa pasiva, Inhibicion de la hemoaglutinación y coagluaglutinación

34
Q

Que es TI de aglutinación directa?

A

utiliza Ag que naturalmente se encuentran en una particula. Ejemplo, suspencion de bacterias con suspension de Ac conocidos, si se produce una aglutinación es positivo. utiliza para serotipificación de salmonella. Resaccion entre Ac contra Ag somatico O y Ag flagelar H. o Serotipicación de Escherichia Coli serotipo O157H7 productor de toxina Shigar causante del SUH

35
Q

Que es la TI de aglutinación pasiva?

A

Particulas inertes (latex, bentonina o GR) cubiertas de Ag. Identifica Ac faringitis en niños por Streptoscocus Pyogenes (x hemoaglutinación), treiquinosis parasito anti Trichinella spiralis. En banco de sangre puede identificar Brucelosis reacción de Huddleson Ac en suero del Px. otras aplicaciones: Trypanosoma cruzi, Toxoplasma gondii o virus VIH y Hepatitis B.

36
Q

Que es la TI de aglutinacion reversa pasiva?

A

Las particulas tinen adherido el Ac con zona de unión
al Ag libre para reaccionar. Detecta Ag Streptococcus agalactiae (meningitis neonatal) Staphyloccoccus aureus, Neinsseria meningitidis, Streptococcus pyogenes y Harmophilus influenzae. Virus como rotavirus (diarrea infantil), Candida Albicans y Criptococcus Neoformans (levedura meningitis SIDA)

37
Q

Que es la TI de Inhibición de la hemaglutinación?

A

Cuando la particula recubierta de Ag es un GR se dice. Detecta Ac de ciertos virus como rubeola, sarampión, influenza y adenovirus.

38
Q

Que es la coaglutinación?

A

Utiliza bacterias muertas como soporte, utiliza staphylococcus aureus por unirse naturalmente al Ac por su región constante, dejando el sitio activo del Ac libre para interactuar con un Ag específico. Se utiliza para detectar Ag bacterianos en LCR como Neisseria meningitidis (meningococo), Haemophilus influenzar y Streptococcus pneumoniae (neumococo).

39
Q

Cuales son las tecnicas inmnologicas de interaccion primaria?

A

Inmunoensayos (radioinmunoanalisis, enzimoinmunoanalisis, Fluoroinmunoanalisis y quimioinmunoanalisis) y inmunoblots (Wester blot) y Recombinant inmunoblot assay (RIBA).

40
Q

Que es radioinmunoanalisis?

A

Los Ac están mascados con compuestos radioactivos. detección por contador de rayos Gama. Ventaja alta sensibilidad, ha caido en desuso por rigurosas reglas para manejo de materiales radioactivos y porque los isotopos radioactivos que se degradan.

41
Q

Que es enzimoinmunoanalisis?

A

Métodos que utilizan Ac marcados con enzima. Pueden producir cambio de color o luz. Son de gran sensibilidad y instrumental complejo. Más utilizado es ELISA.

42
Q

Mencione 7 enfermedades detectadas por ELISA.

A

Detecta Ag: de Hepatitis A,B,C (H..V), p24 para HIV
Detecta Ac: para virus Epstein Barr (EBV que produce mononucleosis infecciosa), para Vírus Rubeola y Trypanosoma cruzi (parasito que produce Chagas)

43
Q

Que es Fluoroinmunoanalisis? Que diferencia hay entre inmunoflorecencia directa e indirecta.

A

Utilizan Ac marcados con sustancias fluorescentes. Son de elevada sensibilidad.
La inmunoflorecencia directa utiliza Ag virales en muestras de secrección bronquiales buscando virus respiratorio adenovirus, influenza, virus sindical respiratorio o en biopsia de tejido encefalico para buscar virus de la rabia.
La inmunoinflurecencia indirecta se buscan Ac en el suero del px, como Chagas, Toxoplasmosis o Rubeola.

44
Q

Que es Inmunoblots?

A

Tecnica que utiliza Ag adheridos a un soporte de celulosa y sirven para detectar el Ac del px. La formación de complejos inmunes se manifesta por bandas coloreadas que revelan el Ac marcado con enzima. Son altamente específicos y confirmatorios. El más utilizado es el Western blot.

45
Q

Que es el Western Blot? Y para que es utilizado.

A

Es un tipo de Inmunoblot utilizado para confirmar la serologia positiva de VIH por Elisa. Reactivo es un soporte de papel que pose varios Ag para VIH separado en bandas. El suero se agrega al soporte y se revela la presencia de Ac anti-VIH. WB positivo si aparecen 2 o más bandas.

46
Q

Defina que es una técnica cualitativa, semicuantitativa y cuantitativa. Que unidades expresan.

A

Cualitativa: Detectan presencia de Ag o Ac (+o-) ejemplo tecnicas de interacción secundaria aglutinación o de interacción primaria ELISA valor numerico de punto de corte. expresa positivo o ne
Semicuantitativas: Detectan cantidad de Ag o Ac mediante a unidade relativas, en función de diluciones (8 disoluciones 1/256) (no se conoce la concentración verdadera de Ag o Ac). Prueba de titulos (maxima dilución que da positiva en una muestra).
Cuantitativas: Detectan concentraciones de Ag o Ac en unidades absolutas )(mg/mL, U/L). Utiliza una muestra calibradora de forma estadística que marca el limite entre valores positivos y negativo que puede variar con el fabricante.

47
Q

De cuanto es el aumento de Ac para diagnostico una enfermedad en una prueba de titulos?

A

Aumento de Ac en al menor 4 veces entre dos muestras.

48
Q

cite dos tecnicas inmunologicas en desuso pero de importancia historica y que enfermedades diagnosticaron.

A

Sabin feldman para toxoplasmosis evalua lisis en presencia de Ac. Fijación del complemento Machado-guerreiro en el diagnostico de Chagas evalua hemolisis de eritrocito en presencia del Ac del paciente.

49
Q

Que son metodos moleculares?

A

Utilizan acidos nucleicos para detectar MO en cultivos o muestras biologicas.

50
Q

Para qué son utilizados metodos moleculares?

A

Diagnostico viral (Hantavirus, gripe H1N1, Dengue)
Detectar MO en muestras clinicas (LCR, Secreciones)
Detectar bacterias que no crecen en cultivo (Rickettsia, Mycoplasma, Mycobacterium lepra)
Estudio epidemiologico y tipificacion de cepas bacterianas
Detectar genes de virulencia o de resistencia a los ATB

51
Q

Como son clasificadas las tecnicas moleculares?

A

Tecnicas sin amplificacion del ácido nucleico: Hibridación y microarray
Tecnicas con amplificación del ácido nucleico: PCR, Filmarrays
Carga viral
Metodologias de nueva generación

52
Q

Como es el metodo de hibridación? para que se utiliza?

A

Es una tecnica molecular a sin amplificacion genomica que utiliza una sonda de ADN complementario al del MO que quiere detectar. esa sonda es marcada cuando se encuentra con el acido nucleico del germen (puede ser color, fluorecencia, radioactividad o quimioluminecencia). se utiliza para detectar MO directamente de muestras clinicas (esputo o orina), confirmar identificación de un cultivo que tardaria dias (Chlamydia trachomatis, Legionella pneumophila) o detectar extension de infección in situ en muestra de tejido.

53
Q

Que es Microarray? y para que sirve.

A

Es un tipo de tecnica sin amplificacion del genoma, automatización de la hibridación, son una serie de sondas unidas a una superfície sólida prefijada. La muestra se marca con fluorocromo y puede ser de ADN o ARN y el soporte es porta de vidrio. Se utiliza para estudios de patogenicidad, determinar interaccion MO-hospedador deuna infección, genes bacterianos que codifican factores de virulencia, genomica comparativa, genomica comparativa, genotipado y filogenia microbianas.

54
Q

Que es el PCR?

A

Es una tecnica molecular con amplificación de secuencia de acidos nucleicos específicos a partir de pequeñas cantidades presentes en una muestra biologica. alta sensibilidad y especificidad.
PCR estandar: detecta un segmento de ADN utilizando cebadores por geles de agarosa. detección cualitativa de un segmento de ADN.
PCR multiple: amplificación de dos o mas segmentos de ADN utilizando varios sebadores.

55
Q

Detalle los seis tipos de PCR y qué detecta cada uno.

A

PCR estandar: detecta un segmento de ADN utilizando cebadores por geles de agarosa. detección cualitativa de un segmento de ADN.
PCR multiple: amplificación de dos o mas segmentos de ADN utilizando varios sebadores. por geles de agarosa. detección cualitativa de varios segmentos de ADN en una sola reaccion de PCR.
PCR-RFLP: PCR estándar+digestión de enzimas de restricción. detección de polimorfismo genético.
RT PCR: Síntesis de ADN a partir de ARN mediante a transcriptasa reversa+PCR. Detecta expreción de genes y virus ARN.
PCR-TR: PCR estandar+ticiones o fluoroforos para detectar fragmentos amplificados. Detección CUANTITATIVA de uno o varios segmentos de ADN carga viral o expresión de genes asociada a una reacción de la Transcriptasa reversa.

56
Q

Que es Filmarrays? y para que sirve?

A

es una tecnica molecular con amplificacion genomica que funciona como sistema comercial de PCR multiple que integra la preparación de muestras, amplificación, detección y analisis. Detecta silmultaneamente bacterias, virus, leveduras, parasitos y genes de resistencia a los antimicrobianos. es utilizado con paneles integrales con pruebas para diferentes patogenos.

57
Q

Qué tipo de pruebas se puede medir la carga viral? En que unidades expresan.

A

PCR cuantitativa: copias/ml de plasma.
Branched DNA(analisis de la cadena ramificada de ADN): unidades/ml de plasma.
NASBA(Amplificación de la secuencia del ácido nucleico): unidades/ml de plasma menos utilizada.

58
Q

Para cuales enfermedades es util los exámenes de carga viral?

A

VIH, Hepatitis B, C, Citomegalovirus

59
Q

cuales son nuevas herramientas para identificar el diagnostico molecular?

A

Polimorfismo genetico y Secuenciación de nueva generación

60
Q

Que es el diagnostico molecular por estudio de polimorfismo?

A

Es el estudio de variantes geneticas para entregar un tratamiento adecuado al genoma del paciente y entender la relevancia del ADN en su respuesta frente al MO.

61
Q

Que es el diagnostico molecular por secuenciacion de nueva generación?

A

Ese estudio de secuanciacion genetica en corto plazo, revela las variaciones del microbioma en la poblacion sana y enferma desde desorden gastrointestinales a problemas inmunologicos obesidad, diabetes.

62
Q

Que son metodos de diagnosticos directos e indirectos?

A

Diretos: detección del MO completo o de sus componentes (proteinas, ácidos nucleicos).
Indirectos: detección Ac, de la respuesta inmune a la infección.

63
Q

Cite tres ejemplos de metodo de diagnostico directo.

A

Coaglutinación: detección de bacterias produtoras de meningitis en LCR.
ELISA: proteina p24 HIV
Deteccion de ácidos nucleicos del parasito Trypanosoma cruzi en sangre (Chagas)

64
Q

Que es periodo ventana? de que depende.

A

tiempo minimo a partir del cual comienzan a detectarse los Ac en la sangre. depende del Ag composicion y via de ingreso, del individuo estado inmune y historia inmunologica.

65
Q

Cuales dos exames de diagnostico indirecto de una infección aguda?

A

Puede ser por detección de IGM especifica o par serologico.

66
Q

Que significa detectar IgM especifica.

A

En general correlaciona con infección aguda en el momento de la tomada de muestra.

67
Q

Como es el diagnostico por par serologico? En cuanto deben aumentar para infección activa?

A

Consiste en tomar dos muestras del px separadaspor dos semanas para verificar si la concentración de Ac aumenta, disminuye o es constante. Ac deben cuadriplicar para indicar infección activa. IgG negativa en primer y positiva en segundo. presencia de Ac de bja afinidad indican infección reciente.

68
Q
A