Técnicas de DNA recombinante + Aulas Práticas Flashcards
3 benefícios das técnicas de DNA recombinante são:
-clonagem de genes
-estudo de doenças hereditárias
-produláo de proteínas/drogas/vacinas
Quais são as técnicas básicas para se formam um DNA recombinante?
-Clivagem de DNA utilizando enzimas de restrição (nucleases)
-Ligação de fragmentos de DNA (ligases)
-Clonagem (p. ex. PCR)
-Hibridação para se encontrar uma sequência específica
…
As endonucleases reconhecem sequências específicas de … a … pares de bases
4 a 12
Quantos tipos de enzimas de restrição existem? Qual é usada em biologia molecular?
3 tipos, o tipo II
Porque é que se prefere utilizar as enzimas de restrição do tipo II, em vez das I ou III?
As enzimas I e III para além de serem dependentes de ATP, cortam de modo aleatório, e apenas têm a capacidade de metilar uma das cadeias de DNA. As tipo II são sistemas binários em que uma subunidade tem ação de corte e outra de metilação, sendo por isso as preferidas.
V ou F. As enzimas de restrição cortam o DNA normalmente em sequências palindrómicas.
Verdadeiro
As enzimas de restrição podem cortar o DNA formando 3 tipos de extremidades, quais?
-“Blunt ends”
-Extremidade coesiva 5’
-Extremidade coesiva 3’
V ou F. As sticky ends resultam do corte da enzima de restrição no meio da sequência palindrómica.
Falso, isso são as blunt ends
V ou F. O corte enzimático “blunt end” é preferível do que os coesivos. Justifique.
Falso, pois o blunt end é o corte exatamente a meio, não originando nenhuma cadeia simples o que dificulta a ligação com outra cadeia e diminui a ocorrência de erros
V ou F. Ao cortar com a mesma enzima de restrição DNAs de individuos diferentes, os cortes vão também ser diferentes para cada um
Falso
As bactérias utilizam as enzimas de restrição como defesa contra fagos, mas como é que não cortam o seu próprio DNA?
Enzimas de modificação (metilases), metilam o DNA bacteriano nos locais reconhecidos pela enzima de restrição o que impede a sua ação