Techniques De Biomol 6

Question 1

À quoi correspond l’image virtuelle d’un objet?

Answer 1

Il s’agit d’une image inversée et agrandit d’un objet

Question 2

Quels sont les principaux types de lumière transmises?

Answer 2

• Lumière
• Lumière opaque
• Contraste de phase
• Contraste interférentiel différentiel
• Polarisation

Question 3

Quels objets sont utilisés en microscopie de lumière, lumière opaque et contraste de phase?

Answer 3

Des objets transparents

Question 4

Quelles est la différence entre la lumière et la lumière opaque?

Answer 4

La lumière utilise le principe d’absorption de la lumière alors que la lumière opaque capte la lumière qui est réfléchit par l’objet.
Lumière : fond = brillant et image = foncée
Lumière opaque : fond = opaque et image = brillante

Question 5

Comment fonctionne la microscopie contraste de phase?

Answer 5

La microscopie en contraste de phase fonctionne en convertissant les déphasages de la lumière traversant un échantillon transparent en changements de luminosité dans l’image.

Question 6

À quoi sert la microscopie à contraste interférentiel différentiel?

Answer 6

Le DIC est utilisée pour augmenter le contraste d’images produites avec le contraste de phase

Question 7

Quels sont les différents types de microscopie à fluorescence?

Answer 7

• Épifluorescence
• Confocale
• Deux-photons
• Nappe de lumière
• Réflexion totale interne

Question 8

Qu’est-ce qu’un fluorophore?

Answer 8

Un fluorophore est une molécule chimique (allant de la taille d’une petite molécule à une protéine fluorescente) qui peut réemettre de la lumière fluorescente suite à une excitation lumineuse

Question 9

À quel moment les fluorophore émettent de la fluorescence selon le diagramme de Jablonski?

Answer 9

Lorsqu’ils relaxent au niveau d’énergie inférieur

Question 10

Quelle est la relation entre la longueur d’onde et le niveau d’énergie?

Answer 10

Plus la longueur d’onde est petite, plus le niveau d’énergie est élevée

Question 11

Qu’est-ce que le déplacement de Stokes?

Answer 11

Il s’agit de la différence entre les maxima des courbes d’excitation et d’émission d’un fluorophore donné

Question 12

Qu’est-ce qu’on utilise dans l’immunofluorescence?

Answer 12

Un anticorps spécifique contre notre protéine d’intérêt ou antigène

Question 13

Qu’est-ce que l»immunofluorescence directe?

Answer 13

Lors de l’immunofluorescence directe, un anticorps primaire (qui cible la protéine d’intérêt ou antigène) est déjà couplé à un fluorophore, pour permettre la visualisation directe en microscopie à fluorescence.

Question 14

Qu’est-ce que l’immunofluorescence indirecte?

Answer 14

Lors de l’immunofluorescence indirecte, un anticorps primaire est utilisé pour reconnaître la protéine d’intérêt, et ensuite, un anticorps secondaire couplé à un fluorophore, reconnaît l’anticorps primaire. Le fluorophore présent sur l’anticorps secondaire permet la visualisation indirecte de la protéine d’intérêt en microscopie à fluorescence

Question 15

Quelles cellules expriment de manière transitoirement la GFP-Surpervilline?

Answer 15

Cellules Hs578t

Question 16

Pourquoi la as-t-on muté la protéine GFP et quel est la mutation?

Answer 16

Bien que la GFP isolée était fluorescente, elle avait plusieurs inconvénients dont deux pics d’excitation, une sensibilité au pH et au chlore, un rendement quantique de fluorescence, une faible photostabilité et un mauvais repliment à 37 °C. La GFP que nous utilisons en laboratoire est donc celle mutant la sérine-65 en thréonine

Question 17

Quelles est la structure de la GFP?

Answer 17

La GFP est cylindrique et consiste en 11 feuillet beta entourant 1 hélice alpha, contenant un chromophore lié de manière covalente à la GFP

Question 18

Comment la GFP va-t-elle se lier à une protéine d’intérêt?

Answer 18

Elle vva fusionner en N- ou C-terminale de n’importe quel protéine

Question 19

Comment fonctionne e l’épifluorescence?

Answer 19

La microscopie d’épifluorescence est un type de microscopie à large champ (widefield) qui utilise une source de lumière comme l’UV pour exciter les fluorophores

Question 20

Quelles sont les deux différences entre la microscopie confocale et l’épifluorescence?

Answer 20

• l’utilisation d’un laser comme source lumineuse pour exciter les fluorophores avec une longueur d’onde précise.
• la présence d’un filtre « tête d’épingle » ou pinhole qui coupe la lumière hors- focus/hors champ, et permet donc d’imager un plan focal, donnant une image de haute résolution.

Question 21

Quels sont les deux types de microscopie confocale et leur caractéristiques?

Answer 21

• Microscope confocal à balayage laser : haute résolution, mais plus lent
• Microscope confocal à disque rotatif : Haute résolution et plus rapide

Question 22

Comment fonctionne la microscopie à deux-photons?

Answer 22

Utilise deux photons pour exciter le fluorophore, mais à une longueur d’onde beaucoup plus élevée, dans l’infrarouge (donc de plus basse énergie).

Question 23

Comment fonctionne la microscopie à nappe de lumière?

Answer 23

Illuminé l’échantillon dans 2 angles différents, ce qui confère une excellent résolution en plus d’une bonne rapidité, et permet d’imager des échantillons intacts avec une photo toxicité réduite

Question 24

Quels sont les microscopie de super résolution?

Answer 24

STED, STORM, PALM

Question 25

Comment fonctionne la microscopie de super résolution?

Answer 25

La microscopie de superrésolution permet d’atteindre en microscopie optique de fluorescence ce qui était seulement possible avec la microscopie électronique

Question 26

Qu’est-ce que la microscopie mono moléculaire?

Answer 26

Permet de suivre des petites molécules ou protéine fluorescentes

Question 27

Comment fonctionne la microscopie de fluorescence par réflexion totale interne?

Answer 27

La microcopie de fluorescence par réflexion totale interne (TIRF) excite les fluorophores présent à la base des cellules en exploitant le changement d’indice de réfraction quand la longueur d’onde d’excitation (lumière incidente) entre dans l’échantillon biologique.

Question 28

Quelles microscopie font partie de la microscopie mono moléculaire?

Answer 28

La microscopie de super résolution et la microscopie de fluorescence par réflexion totale interne

Question 29

FRAP permet de mesurer quoi?

Answer 29

Technique qui permet de mesurer la mobilité/dynamique de diffusion des fluorophores dans un millieu donné (par exemple une cellule ou un tissu), ou même de mesurer l’avidité entre deux protéines.

Question 30

Comment appelle-t-on les protéines qui ne recouvre pas la fluorescence dans le FRAP?

Answer 30

Fraction immobile

Question 31

Quelles sont les 3 étapes de FRAP?

Answer 31

1- Préblanchiment
2- Photoblanchiment d’une région d’intérêt pendant quelques secondes, en utilisant une très forte puissance laser
3- On observe si la fluorescence est redistribuée ou non

Question 32

Le FRET se base sur quel mécanisme?

Answer 32

Se base sur un transfert d’énergie en deux chromophores

Question 33

FRET permet d’observer quoi?

Answer 33

Une interaction directe entre deux protéines

Question 34

Quels sont les 3 conditions essentielles pour avoir un FRET?

Answer 34

1- Avoir un chevauchement entre les spectres d’excitation du donneur et de l’accepteur
2- Avoir une distance de moins de 10 nm entre les deux fluorophores
3- Avoir une orientation correcte des fluorophores

Question 35

Qu’est-ce qu’un biosenseur?

Answer 35

Protéines de fusion synthétiques qui servent à surveiller un processus biologique d’une protéine ou d’une molécule

Question 36

Quels sont les 4 paramètres de la pyramide de frustration?

Answer 36

Vitesse, bruit-versus-signal, résolution spatiale et santé de l’échantillon