Techniques De Biomol 6 Flashcards
À quoi correspond l’image virtuelle d’un objet?
Il s’agit d’une image inversée et agrandit d’un objet
Quels sont les principaux types de lumière transmises?
- Lumière
- Lumière opaque
- Contraste de phase
- Contraste interférentiel différentiel
- Polarisation
Quels objets sont utilisés en microscopie de lumière, lumière opaque et contraste de phase?
Des objets transparents
Quelles est la différence entre la lumière et la lumière opaque?
La lumière utilise le principe d’absorption de la lumière alors que la lumière opaque capte la lumière qui est réfléchit par l’objet.
Lumière : fond = brillant et image = foncée
Lumière opaque : fond = opaque et image = brillante
Comment fonctionne la microscopie contraste de phase?
La microscopie en contraste de phase fonctionne en convertissant les déphasages de la lumière traversant un échantillon transparent en changements de luminosité dans l’image.
À quoi sert la microscopie à contraste interférentiel différentiel?
Le DIC est utilisée pour augmenter le contraste d’images produites avec le contraste de phase
Quels sont les différents types de microscopie à fluorescence?
- Épifluorescence
- Confocale
- Deux-photons
- Nappe de lumière
- Réflexion totale interne
Qu’est-ce qu’un fluorophore?
Un fluorophore est une molécule chimique (allant de la taille d’une petite molécule à une protéine fluorescente) qui peut réemettre de la lumière fluorescente suite à une excitation lumineuse
À quel moment les fluorophore émettent de la fluorescence selon le diagramme de Jablonski?
Lorsqu’ils relaxent au niveau d’énergie inférieur
Quelle est la relation entre la longueur d’onde et le niveau d’énergie?
Plus la longueur d’onde est petite, plus le niveau d’énergie est élevée
Qu’est-ce que le déplacement de Stokes?
Il s’agit de la différence entre les maxima des courbes d’excitation et d’émission d’un fluorophore donné
Qu’est-ce qu’on utilise dans l’immunofluorescence?
Un anticorps spécifique contre notre protéine d’intérêt ou antigène
Qu’est-ce que l»immunofluorescence directe?
Lors de l’immunofluorescence directe, un anticorps primaire (qui cible la protéine d’intérêt ou antigène) est déjà couplé à un fluorophore, pour permettre la visualisation directe en microscopie à fluorescence.
Qu’est-ce que l’immunofluorescence indirecte?
Lors de l’immunofluorescence indirecte, un anticorps primaire est utilisé pour reconnaître la protéine d’intérêt, et ensuite, un anticorps secondaire couplé à un fluorophore, reconnaît l’anticorps primaire. Le fluorophore présent sur l’anticorps secondaire permet la visualisation indirecte de la protéine d’intérêt en microscopie à fluorescence
Quelles cellules expriment de manière transitoirement la GFP-Surpervilline?
Cellules Hs578t
Pourquoi la as-t-on muté la protéine GFP et quel est la mutation?
Bien que la GFP isolée était fluorescente, elle avait plusieurs inconvénients dont deux pics d’excitation, une sensibilité au pH et au chlore, un rendement quantique de fluorescence, une faible photostabilité et un mauvais repliment à 37 °C. La GFP que nous utilisons en laboratoire est donc celle mutant la sérine-65 en thréonine
Quelles est la structure de la GFP?
La GFP est cylindrique et consiste en 11 feuillet beta entourant 1 hélice alpha, contenant un chromophore lié de manière covalente à la GFP
Comment la GFP va-t-elle se lier à une protéine d’intérêt?
Elle vva fusionner en N- ou C-terminale de n’importe quel protéine
Comment fonctionne e l’épifluorescence?
La microscopie d’épifluorescence est un type de microscopie à large champ (widefield) qui utilise une source de lumière comme l’UV pour exciter les fluorophores
Quelles sont les deux différences entre la microscopie confocale et l’épifluorescence?
• l’utilisation d’un laser comme source lumineuse pour exciter les fluorophores avec une longueur d’onde précise.
• la présence d’un filtre « tête d’épingle » ou pinhole qui coupe la lumière hors- focus/hors champ, et permet donc d’imager un plan focal, donnant une image de haute résolution.
Quels sont les deux types de microscopie confocale et leur caractéristiques?
- Microscope confocal à balayage laser : haute résolution, mais plus lent
- Microscope confocal à disque rotatif : Haute résolution et plus rapide
Comment fonctionne la microscopie à deux-photons?
Utilise deux photons pour exciter le fluorophore, mais à une longueur d’onde beaucoup plus élevée, dans l’infrarouge (donc de plus basse énergie).
Comment fonctionne la microscopie à nappe de lumière?
Illuminé l’échantillon dans 2 angles différents, ce qui confère une excellent résolution en plus d’une bonne rapidité, et permet d’imager des échantillons intacts avec une photo toxicité réduite
Quels sont les microscopie de super résolution?
STED, STORM, PALM
Comment fonctionne la microscopie de super résolution?
La microscopie de superrésolution permet d’atteindre en microscopie optique de fluorescence ce qui était seulement possible avec la microscopie électronique
Qu’est-ce que la microscopie mono moléculaire?
Permet de suivre des petites molécules ou protéine fluorescentes
Comment fonctionne la microscopie de fluorescence par réflexion totale interne?
La microcopie de fluorescence par réflexion totale interne (TIRF) excite les fluorophores présent à la base des cellules en exploitant le changement d’indice de réfraction quand la longueur d’onde d’excitation (lumière incidente) entre dans l’échantillon biologique.
Quelles microscopie font partie de la microscopie mono moléculaire?
La microscopie de super résolution et la microscopie de fluorescence par réflexion totale interne
FRAP permet de mesurer quoi?
Technique qui permet de mesurer la mobilité/dynamique de diffusion des fluorophores dans un millieu donné (par exemple une cellule ou un tissu), ou même de mesurer l’avidité entre deux protéines.
Comment appelle-t-on les protéines qui ne recouvre pas la fluorescence dans le FRAP?
Fraction immobile
Quelles sont les 3 étapes de FRAP?
1- Préblanchiment
2- Photoblanchiment d’une région d’intérêt pendant quelques secondes, en utilisant une très forte puissance laser
3- On observe si la fluorescence est redistribuée ou non
Le FRET se base sur quel mécanisme?
Se base sur un transfert d’énergie en deux chromophores
FRET permet d’observer quoi?
Une interaction directe entre deux protéines
Quels sont les 3 conditions essentielles pour avoir un FRET?
1- Avoir un chevauchement entre les spectres d’excitation du donneur et de l’accepteur
2- Avoir une distance de moins de 10 nm entre les deux fluorophores
3- Avoir une orientation correcte des fluorophores
Qu’est-ce qu’un biosenseur?
Protéines de fusion synthétiques qui servent à surveiller un processus biologique d’une protéine ou d’une molécule
Quels sont les 4 paramètres de la pyramide de frustration?
Vitesse, bruit-versus-signal, résolution spatiale et santé de l’échantillon
