STAB VIDA Flashcards
A evolução dos métodos de sequenciação de ácidos nucleicos e os serviços de sequenciação clínica oferecidos pela STABVida:
- First generation: Sequenciação de Sanger (técnica gold standard, com 99,9% de precisão e com baixa necessidades bioinformáticas, sequencia fragmentos de 500-1000 bp)
- Second generation: Illumina e Ion Torrent (alta necessidade de bioninformática, muito precisa também, sequencia fragmentos com 50-500 bp )
- Third generation: Nanopore (permite sequenciação de dezenas de fragmentos com Kb mas tem baixa precisão, podendo levar a diagnósticos errados)
O que permitiu o aparecimento de novas gerações de dispositivos de sequenciação:
Baixar o custo
Na STABVida, para que testes é utilizada a sequenciação de Sanger?
- Intolerância à lactose
- Predisposição a obesidade
- Testes de paternidade
Na STABVida para que situações se utiliza NGS:
- Sequenciação target: amplificar uma região específica do genoma (DNA ou RNA)
- Sequenciação de exomas: descobrir biomarcadores de doenças, para diagnóstico ou ajudar na escolha de um tratamento específico
Atualmente, qual é o alvo da maior parte das terapias envolvendo anticorpos na doença de Alzheimer?
Proteína beta-amilóide que se pensa ter um papel central no desenvolvimento e progressão de Alzheimer.
* Ligam-se à beta-amiloide facilitando a sua eliminação no cérebro, neutralizando-a diretamente ou marcando-a para remoção pelo sistema imune. A redução das placas amiloides parece diminuir a progressão da doença.
* Existem ensaios clínicos para avaliar a eficácia de anticorpos contra a proteína tau que parece estar presente num início mais precoce o que a beta-amiloide. A investigação sugere que a patologia da tau está mais intimamente ligada ao declínio cognitivo e à neurodegeneração do que as placas beta-amilóides.
Desafios na utilização de anticorpos no tratamento da doença de Alzheimer:
- Custos
- Método de administração (anticorpos são demasiado grandes para atravessar a barreira hematoencefálica, pelo que têm de ser administradas diretamente no cérebro)
- Efeitos secundários potenciais: ativação do sistema imune e ligação não específica do anticorpo em locais indesejados
- Identificação de alvos terapêuticos eficazes (por exemplo é mais eficaz marcar beta amiloide ou a proteína tau?)
Em que consiste a técnica de hibridoma?
Técnica amplamente utilizada na produção de anticorpos monoclonais. Ela envolve a fusão de células do sistema imunológico, chamadas de células produtoras de anticorpos ou plasmócitos, com células de cancro de mieloma, que são células tumorais de linhagem imune.
Passos na tecnologia de hibridoma para a produção de anticorpos monoclonais:
- Seleção do antigénio
- Imunização: administrar o antigénio (em conjunto com um adjuvante) selecionado a um animal (tipicamente os ratos), de maneira a desenvolver uma resposta imune contra o mesmo (adjuvante aumenta a resposta imune)
- Fusão e geração do hibridoma: depois da indução da resposta imune, faz-se a colheita dos plasmócitos (células B que produzem anticorpos) e fundem-se com células de mieloma (plasmócitos tumorais), criando células de hibridoma
- Screening: identificar as células de hibridoma que estão a produzir o anticorpo contra o antigénio selecionado (através de ELISA ou citometria de fluxo)
- Clones positivos são isolados e expandidos (crescimento em meio de cultura) para aumentar a quantidade obtida do anticorpo
- Purificação do anticorpo através de cromotografia de afinidade, para o separar de impurezas e obter uma preparação concentrada do anticorpo.
- Caracterização do anticorpo purificado para determinar a sua especificidade, afinidade e propriedades funcionais (Western Blotting, imunofluorescência e ensaios de ligação)
- Produção em larga escala e formulação numa dose.
Porquê é que se os antigénios selecionados foram demasiado pequenos devem ser conjugados com proteínas?
Porque se forem muito pequenos podem passar despercebidos ao sistema imune
Em que técnica se baseia o DoctorVida?
LAMP (loop mediated isothermal amplification)
Uso de DoctorVida:
- Lactose Intolerante
- Covid
