Sonde moléculaire Flashcards
Qu’est-ce qu’une sonde?
C’est un composé qui a une affinité spécifique pour la molécule que l’on veut détecter ou quantifier
Qu’est-ce qu’un traceur?
Permet la détection de la sonde de manière stable, sensible et spécifique
Est-ce que le traceur est présent naturellement dans l’échantillon à analyser?
Non
Est-ce que le traceur modifie l’affinité de la sonde pour sa cible?
Non
Quel type de molécule peut détecter et quantifier la sonde?
ADN, ARN, Protéines,etc.
Quelles sont les applications d’une sonde moléculaire de type anticorps?
- Buvardage western
- Détection ÉLISA
- Microscopie à fluorescence
Qu’est-ce qu’est un anticorps?
Immunoglobulines IgG, IgE ou IgM
Qu’est-ce que le paratrope et la région Fc sur un anticorps?
Paratrope = région variable qui fixe l’épitope
Région Fc = domaine constant des chaînes lourdes
Quelles sont les 3 types de traceurs?
- Isotopes
- Enzymes
- Fluorochromes
Que contient un atome? Le noyau?
Atome : Noyau + électrons
Noyau : Neutrons + protons
Vrai ou Faux? Tous les atomes d’un même élément possèdent le même nombre de protons.
Vrai. Le nombre de proton est le numéro atomique.
Vrai ou Faux? Tous les atomes d’un même élément qui possèdent le même nombre de proton ont les mêmes propriétés chimiques et nucléaires.
Faux, ils les même propriétés chimiques mais pas nucléaires.
De quoi dépend la stabilité du noyau?
Dépend du ratio N/Z
N = Nombre de neutrons
Z = Nombre de protons
S’il y a trop ou pas assez de neutrons, l’atome est instable et émettra un rayonnement radioactif pour se stabiliser
Vrai ou Faux? La désintégration de l’atome est un processus qui dépend des conditions environnementales
Faux. C’est un processus qui ne dépends PAS des conditions environnementales
Le noyau instable se transforme comment ?
En éjectant 2 neutrons et 2 protons
Vrai ou Faux? La majorité des traceurs radioactifs instables utilisés en biochimie sont des émetteurs de rayonnement Bêta -.
Vrai
Quelles sont les 3 types de rayonnement radioactif?
- Bêta
- Gamma
- Rayons X
Pourquoi les rayonnements radioactifs sont très énergétiques ?
Car ils sont de longueurs d’ondes courtes
Placer en ordre du moins pénétrant au plus pénétrant les rayonnements suivants : Bêta, Alpha, Gamma
Alpha, Bêta, Gamma
De quelle façon est liée l’enzyme à la sonde?
De façon covalente
Vrai ou Faux? L’intensité de la couleur en colorimétrie est proportionnelle à la quantité de sonde fixée à la cible.
Vrai
Quelles sont les 2 formes que peuvent prendre le produit coloré
Soluble : pour la détection en milieu liquide
Insoluble : pour la microscopie
Vrai ou Faux? 1 enzyme peut avoir plusieurs substrat
Vrai.
Nommer les 3 enzyme utilisées en colorimétrie
HRP (peroxydase du raifort)
Phosphatase alcaline
B-galactosidase
Qu’est-ce qu’un fluorophores (fluorochrome) ?
Molécule émettant de la fluorescence
Qu’est-ce que la fluorescence?
Émission de lumière par une substance absorbant des radiations et les émettant à des longueurs d’ondes plus grandes
Qu’est-ce que la phosphorescence?
Émission de lumière continue après que l’illumination ait cessée
Vrai ou Faux? L’émission est toujours à une longueur d’ondes plus élevée que celle utilisée pour l’excitation
Vrai
À quoi servent les filtres de bandes passantes étroites?
Permettent l’excitation et la mesure de la fluorescence émise dans des grammes étroites de longueurs d’ondes. Permet de détecter le signal de fluorescence original d’une molécule
Vrai ou Faux? La détection de plusieurs traceurs ce fait en une étape.
Faux. L’image est reconstruite à partir de plusieurs images, chacune ayant été obtenue par excitation/émission à des paires de longueurs d’ondes différentes
Pourquoi le spectrofluorimètre est nécessaire?
Pour connaître la longueur d’ondes des pics d’absorption et d’émission
Vrai ou Faux? Certaines molécules émettent de la fluorescence sans être couplé à une autre molécule de reconnaissance.
Vrai, ce ne sont donc pas des sondes.
Nommer des applications des sondes fluorescentes.
- Cytométrie en flux
- Hybridation de puces à ADN
- Microscopie à immunofluorescence
- FRET
Étant donné que les sondes pour les acides nucléiques étaient souvent radioactif, il y a eu développement d’alternatives non radioactives. C’est nouvelles sondes sont liés à quoi?
À la digoxigénine (retrouvé naturellement chez les plantes)
Est-ce que les sondes d’acides nucléiques sont sensibles ou non sensible? Est-ce qu’elles sont spécifiques ou non spécifiques?
Sensibles + spécifiques
Associez les traceurs suivants à la méthode de détection plausible :
a) Phosphatase alcaline
b) 32P
c) Cy3
d) 13C
1) Autoradiographie
2) Spectromètre de masse 3) Spectrophotomètre
4) Fluorimètre
a) Phosphatase alcaline - Spectrophotomètre
b) 32P - Autoradiographie
c) Cy3 - Fluorimètre
d) 13C - Spectromètre de masse
Associez les techniques suivantes au type d’anticorps généralement employé :
a) Comptage de cellules par FACS
b) « Western blot »
c) Microscopie à immunofluorescence
d) ELISA
1) Anticorps couplé à un traceur radioactif
2) Anticorps couplé à une enzyme
3) Anticorps couplé à un traceur fluorescent
a) Comptage de cellules par FACS - Anticorps à un traceur fluorescent
b) « Western blot » - Anticorps couplé à une enzyme
c) Microscopie à immunofluorescence -Anticorps à un traceur fluorescent
d) ELISA -Anticorps couplé à une enzyme
Vrai ou Faux?
a) L’utilisation de la peroxydase du raifort (HRP) génère toujours une coloration verte en ELISA ?
b) La chimioluminescence est moins sensible que la colorimétrie en immunobuvardage de type Western.
c) L’immunofluorescence permet de localiser des protéines dans une cellule.
d) Les traceurs isotopiques employés en RMN sont généralement des isotopes
stables.
e) Le 14C est un émetteur de rayons gamma.
a) Faux
b) Faux
c) Vrai
d) Vrai
e) Faux
Quelles sont les deux principales méthodes de couplage d’un traceur à une molécule pour fabriquer une sonde ?
1- Conjuguaison chimique
2-Synthèse biochimique
Un ELISA nécessite habituellement deux types d’anticorps (un anticorps primaire et un anticorps secondaire). Lequel de ces deux anticorps est normalement conjugué à un traceur ?
Anticorps secondaire
