Enzymologie

Question 1

Définir ce que sont des enzymes.

Answer 1

• Ce sont des catalyseurs
• La plupart sont des protéines
• Elles ont un site actif (section de spécificité pour la liaison de substrat et section pour la catalyse qui implique certains résidus d’acides aminés
• Certaines ont besoin de cofacteur et de co-enzyme

Question 2

Vrai ou Faux? Les enzymes sont consommées durant la réaction.

Answer 2

Faux, elles sont présentent au début et à la fin.

Question 3

Quelle a été la première enzyme découverte?

Answer 3

L’amylase (diastase)

Question 4

De nos jours comment se fait la découverte de nouvelles enzyme?

Answer 4

Soit de sources naturelles, soit à partir des données issues de la génomique et de la métagénomique.

Question 5

Vrai ou faux? Une réaction enzymatique est toujours mesurée en vaste excès du substrat par rapport à l’enzyme.

Answer 5

Vrai.

Question 6

À quoi correspond la phase 1?

Answer 6

Elle correspond à la vitesse initiale (vi) de la réaction enzymatique lorsque moins de 10% du substrat est transformé en produit

Question 7

À quoi correspond la phase 2?

Answer 7

Elle correspond à la portion non-linéaire de la courbe

Question 8

Qu’est-ce qui peut causer une perte de linéarité?

Answer 8

• L’épuisement du substrat
• L’inactivation de l’enzyme
• L’inhibition par le produit chez certaines enzymes (plus la réaction est avancée, plus la quantité de produit s’accumule dans le milieu réactionnel)
• La compétition avec la réaction inverse si la réaction de catalyse est réversible

Question 9

Que ce passe-t-il si on augmente la concentration de substrat?

Answer 9

Il y a augmentation de la vitesse de réaction parce que le complexe ES se forme plus rapidement

Question 10

Vrai ou Faux? Plus la valeur de Km est faible, plus l’affinité de l’enzyme envers sont substrat est forte.

Answer 10

Vrai.

Question 11

Qu’est-ce qu’une unité internationale d’enzyme (UI)?

Answer 11

C’est la quantité d’enzyme qui catalyse la transformation de 1 umole de substrat par minute

Question 12

Qu’est-ce que le dosage en continu?

Answer 12

Approche qui consiste à suivre en continu la quantité d’une substance (substrat ou produit) en estimant les concentrations par des méthodes spectrométriques, potentiométriques ou manométriques

Question 13

Qu’est-ce que le dosage en continu indirect?

Answer 13

Si la disparition du substrat ou la synthèse du produit ne peuvent être suivis directement, il peut être possible d’inclure un autre réactif dans le milieu réactionnel qui permettra de doser le produit de la réaction

Question 14

Qu’est-ce que le dosage en continu par essai enzymatique couplé?

Answer 14

Il faut utiliser une enzyme qui catalyse une réaction très rapide à partir du produit de la première réaction de sorte que c’est la première réaction enzymatique qui limite la cinétique.

Question 15

Qu’est-ce que le dosage discontinu par prélèvement à temps définis?

Answer 15

On mesure la quantité de substrat ou de produit après un temps donné de réaction.

Question 16

Qu’est-ce qu’il faut toujours mettre lors d’un dosage discontinu par prélèvement à temps définis?

Answer 16

Il faut toujours mettre un large excès de substrat, une faible quantité d’enzyme et ne pas incuber trop longtemps, car on veut mesurer des vitesses initiales de réaction (moins de 10% du substrat transformé)

Question 17

Quelle est l’avantage du dosage discontinu par prélèvement à temps définis?

Answer 17

Plusieurs méthodes d’analyses peuvent être utilisées pour doser le substrat restant ou le produit formé lorsque la réaction est arrêtée.

Question 18

Pourquoi il faut éviter de vortexer lors d’une réaction enzymatique?

Answer 18

Pour ne pas dénaturer l’enzyme

Question 19

Quelles sont les 2 contrôles?

Answer 19

1) Sans enzyme

2) Sans substrat

Question 20

À quoi sert le premier contrôle (sans enzyme)?

Answer 20

Sert à évaluer s’il y a formation spontanée de produit à partir du substrat (sans réaction enzymatique) ou une autre réaction faisant varier le signal mesuré

Question 21

À quoi sert le deuxième contrôle (sans substrat)?

Answer 21

Sert à corriger pour toute déviation du signal causée par l’ajout de l’enzyme au mélange réactionnel (par exemple variation d’absorbante causée par l’ajout d’enzyme). Puisque dans ce cas, l’absorbante sert à calculer la concentration du substrat ou de produit, cèle induit une erreur de dosage.

Question 22

Quelles sont les principaux modes de régulation ?

Answer 22

• Substrat
• Produit
• Concentration d’enzyme
• Inhibiteurs
• Molécules de régulation (allostérie)
• Coopérativité (pour enzymes qui ont une structure quaternaire)
• Modification post-traductionnelle
• Isoformes
• Paramètres physico-chimiques (Temp. et pH)