Semaine 8 Flashcards
Que sont des anticorps monoclonaux?
- Anticorps qui proviennent d’un clone de cellule
- Lignée de cellules cultivables en labo et qui produit à l’infini des anticorps de spécificité donnée
Les deux types de technologies utilisées pour produire des anticorps?
- Anticorps polyclonaux (antisérums)
- Anticorps monoclonaux
Que sont des anticorps polyclonaux?
Anticorps qui comprennent un mélange d’anticorps qui réagissent tous contre le même antigène, mais reconnaissent différentes épitotes.
Que sont des anticorps monoclonaux?
Anticorps monoclonaux d’un même mélange sont tous identiques et ne reconnaissent qu’un seul épitote.
Comment produit-on des anticorps polyclonaux?
- Production simple
- Immunisation d’un animal avec l’antigène d’intérêt
- Prélèvement du sang de l’animal : on garde le sérum qui contient tous ces anticorps
Comment produit-on des anticorps monoclonaux?
- Production plus complexe
- Immunisation d’un animal avec l’antigène d’intérêt
- Récolte des lymph B de la rate
- Fusion de ces lymph B avec une lignée de ¢ myélomateuse immortelle (permet d’immortaliser les lymph B)
- Mise en culture des ¢ fusionnées une à une dans des puits : génération de clones qui produisent des anticorps d’une seule spécificité par puit.
Lors de la production d’anticorps monoclonaux, les lymph B récoltés de l’animal sont fusionnés avec des ¢ de myélomateuses immortelles. Ça permet quoi? Comment se nomme les nouvelles ¢ fusionnées?
- Permet d’immortalisation les lymph B.
- Hybridomes
Avantage principal des anticorps monoclonaux?
Continuité de la ressource
Avantage principal des anticorps polyclonaux?
Rapidité et coût plus faible
Comment peut-on produire des grandes quantités d’antisérums?
Il faut utiliser des animaux avec un grand volume sanguin (chèvres, lapins, chevaux…)
Quel animal est utilisé pour la production d’anticorps monoclonaux?
La souris
- La taille de l’animal n’a pas d’impact
- L’utilisation de la souris est moins coûteuse et les techniques de fusion y sont adaptées
Qu’est-ce que l’immunofluorescence?
Technique utilisant des anticorps marqués pour détecter spécifiquement des protéines dans des ¢.
- Possible d’utiliser anticorps spécifique (primaire) qui est directement conjugé
- Possible d’utiliser un 2ième anticorps conjugué qui reconnaît le premier (secondaire)
L’immunofluorescence s’apparente à quelle technique?
L’immunohistochimie
Qu’est-ce que l’immunohistochimie?
Technique qui utilise une réaction colorimétrique au lieu de la fluorescence comme méthode de détection
Qu’est-ce que l’ELISA?
- Technique qui permet de détecter une protéine en solution dans un mélange (anticorps, cytokine…).
Sur quoi est basé l’ELISA?
Basé sur la réaction entre des anticorps purifiés (mono ou polyclonaux) et des antigènes.
- Un des anticorps dans le test est conjugué à une enzyme qui induit la formation de couleur lorsqu’il réagit avec un substrat.
En clinique, comment est utilisé l’ELISA?
Utilisé de routine
- Quantitatif (courbe d’étalonnage)
- Anticorps anti-HIV? Anticorps anti-séropositif?
Qu’est-ce que la cytométrie en flux? Qu’est-ce qu’on peut mesurer par exemple?
Permet de mesurer les caractéristiques physiques et chimiques de ¢/particules lorsqu’elles sont transportées en suspension une à une devant un laser.
- Possible de mesurer la fluorescence à diverses longueurs d’ondes
Dans la cytométrie en flux, comment la lumière du laser est diffusée?
Diffusée en impactant les cellules
- Lumière est recueillie dans 3 directions différentes : corrélée avec la taille et l’autre corrélée avec la complexité
Vrai ou faux : la cytométrie en flux mesure tous les phénotypes et fonctions qui peuvent être détectés par un produit fluorescent associé aux cellules.
Vrai, mais les signaux de fluorescence peuvent être émis par la cellule elle-même (pas juste par anticorps couplé à un fluorochrome).
Qu’est-ce que le tri cellulaire ajouté à un appareil de cytométrie?
Séparation physique de cellules/particules d’intérêts à partir d’une population hétérogène.
Lors de la cytométrie en flux, comment les cellules sont-elles triées?
- ¢ sont aspirées de l’échantillon et injectées une par une (par une buse) dans un courant continu de solution
- Application d’une onde de vibration au jet = jet rompu = gouttes
- La lumière déviée et la fluorescence émisent (après interception cellule-faisceau) génèrent un signal qui est traité par le programme de tri afin de décider si la ¢ doit être isolée ou non
Qu’arrive-t-il aux cellules d’intérêt qui doivent être triées lors de la cytométrie en flux?
- elles sont détectées : le cytomètre donne une charge (+ ou -) à la goutte.
- Gouttes passent entre les plaques de déflexion fortement chargées → gouttes déviées du côté de la plaque de polarité opposée et collectées
La cytométrie est une technique qualitative ou quantitative?
Quantitative, chaque cellule est analysée de façon individuelle.
- Données peuvent être représentées sous forme de graphiques à points (1 ¢ = 1 point)
