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Immuno > Semaine 8 > Flashcards

Semaine 8 Flashcards

1
Q

Que sont des anticorps monoclonaux?

A
  • Anticorps qui proviennent d’un clone de cellule
  • Lignée de cellules cultivables en labo et qui produit à l’infini des anticorps de spécificité donnée
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Q

Les deux types de technologies utilisées pour produire des anticorps?

A
  • Anticorps polyclonaux (antisérums)
  • Anticorps monoclonaux
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Q

Que sont des anticorps polyclonaux?

A

Anticorps qui comprennent un mélange d’anticorps qui réagissent tous contre le même antigène, mais reconnaissent différentes épitotes.

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4
Q

Que sont des anticorps monoclonaux?

A

Anticorps monoclonaux d’un même mélange sont tous identiques et ne reconnaissent qu’un seul épitote.

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5
Q

Comment produit-on des anticorps polyclonaux?

A
  • Production simple
  1. Immunisation d’un animal avec l’antigène d’intérêt
  2. Prélèvement du sang de l’animal : on garde le sérum qui contient tous ces anticorps
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6
Q

Comment produit-on des anticorps monoclonaux?

A
  • Production plus complexe
  1. Immunisation d’un animal avec l’antigène d’intérêt
  2. Récolte des lymph B de la rate
  3. Fusion de ces lymph B avec une lignée de ¢ myélomateuse immortelle (permet d’immortaliser les lymph B)
  4. Mise en culture des ¢ fusionnées une à une dans des puits : génération de clones qui produisent des anticorps d’une seule spécificité par puit.
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7
Q

Lors de la production d’anticorps monoclonaux, les lymph B récoltés de l’animal sont fusionnés avec des ¢ de myélomateuses immortelles. Ça permet quoi? Comment se nomme les nouvelles ¢ fusionnées?

A
  • Permet d’immortalisation les lymph B.
  • Hybridomes
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8
Q

Avantage principal des anticorps monoclonaux?

A

Continuité de la ressource

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9
Q

Avantage principal des anticorps polyclonaux?

A

Rapidité et coût plus faible

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10
Q

Comment peut-on produire des grandes quantités d’antisérums?

A

Il faut utiliser des animaux avec un grand volume sanguin (chèvres, lapins, chevaux…)

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11
Q

Quel animal est utilisé pour la production d’anticorps monoclonaux?

A

La souris

  • La taille de l’animal n’a pas d’impact
  • L’utilisation de la souris est moins coûteuse et les techniques de fusion y sont adaptées
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12
Q

Qu’est-ce que l’immunofluorescence?

A

Technique utilisant des anticorps marqués pour détecter spécifiquement des protéines dans des ¢.

  • Possible d’utiliser anticorps spécifique (primaire) qui est directement conjugé
  • Possible d’utiliser un 2ième anticorps conjugué qui reconnaît le premier (secondaire)
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13
Q

L’immunofluorescence s’apparente à quelle technique?

A

L’immunohistochimie

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14
Q

Qu’est-ce que l’immunohistochimie?

A

Technique qui utilise une réaction colorimétrique au lieu de la fluorescence comme méthode de détection

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15
Q

Qu’est-ce que l’ELISA?

A
  • Technique qui permet de détecter une protéine en solution dans un mélange (anticorps, cytokine…).
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16
Q

Sur quoi est basé l’ELISA?

A

Basé sur la réaction entre des anticorps purifiés (mono ou polyclonaux) et des antigènes.

  • Un des anticorps dans le test est conjugué à une enzyme qui induit la formation de couleur lorsqu’il réagit avec un substrat.
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17
Q

En clinique, comment est utilisé l’ELISA?

A

Utilisé de routine
- Quantitatif (courbe d’étalonnage)
- Anticorps anti-HIV? Anticorps anti-séropositif?

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18
Q

Qu’est-ce que la cytométrie en flux? Qu’est-ce qu’on peut mesurer par exemple?

A

Permet de mesurer les caractéristiques physiques et chimiques de ¢/particules lorsqu’elles sont transportées en suspension une à une devant un laser.

  • Possible de mesurer la fluorescence à diverses longueurs d’ondes
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19
Q

Dans la cytométrie en flux, comment la lumière du laser est diffusée?

A

Diffusée en impactant les cellules

  • Lumière est recueillie dans 3 directions différentes : corrélée avec la taille et l’autre corrélée avec la complexité
20
Q

Vrai ou faux : la cytométrie en flux mesure tous les phénotypes et fonctions qui peuvent être détectés par un produit fluorescent associé aux cellules.

A

Vrai, mais les signaux de fluorescence peuvent être émis par la cellule elle-même (pas juste par anticorps couplé à un fluorochrome).

21
Q

Qu’est-ce que le tri cellulaire ajouté à un appareil de cytométrie?

A

Séparation physique de cellules/particules d’intérêts à partir d’une population hétérogène.

22
Q

Lors de la cytométrie en flux, comment les cellules sont-elles triées?

A
  1. ¢ sont aspirées de l’échantillon et injectées une par une (par une buse) dans un courant continu de solution
  2. Application d’une onde de vibration au jet = jet rompu = gouttes
  3. La lumière déviée et la fluorescence émisent (après interception cellule-faisceau) génèrent un signal qui est traité par le programme de tri afin de décider si la ¢ doit être isolée ou non
23
Q

Qu’arrive-t-il aux cellules d’intérêt qui doivent être triées lors de la cytométrie en flux?

A
  • elles sont détectées : le cytomètre donne une charge (+ ou -) à la goutte.
  • Gouttes passent entre les plaques de déflexion fortement chargées → gouttes déviées du côté de la plaque de polarité opposée et collectées
24
Q

La cytométrie est une technique qualitative ou quantitative?

A

Quantitative, chaque cellule est analysée de façon individuelle.

  • Données peuvent être représentées sous forme de graphiques à points (1 ¢ = 1 point)
25
Q

Que permet de mesurer la cytométrie?

A
  • Prolifération cellulaire
  • viabilité
  • phagocytose
  • activité mitochondriale
26
Q

Comment peut-on effectuer un tri des cellules du sang, considérant que celles-ci sont très hétérogènes?

A

Possible d’utiliser un gradient de densité pour obtenir des populations enrichies.

  • Utilisation de Ficoll (polysaccharide naturel de haut poids moléculaire) et de la centrifugation.
27
Q

Explique comment fonctionne la méthode de tri cellulaire utilisant Ficoll et la centrifugation.

A

Les lymphocytes et les monocytes ont une densité inférieure à celle du Ficoll → on peut obtenir une fraction enrichie en lymphocytes et en monocytes en centrifugeant du sang sur un coussin de Ficoll

  • Des propriétés différentes d’adhésion au plastique permettent ensuite de séparer les lymphocytes des monocytes.
28
Q

Vrai ou faux : on peut utiliser des anticorps spécifiques à des molécules de surface pour retirer une population particulière d’un mélange de cellule.

A

Vrai, possible en fixant des anticorps au fond d’une plaque.

  • Les cellules ayant l’antigène reconnu par l’anticorps à leur surface seront aussi fixées lorsque le mélange sera déposé dans le puit.
29
Q

Comment peut-on utiliser des billes magnétiques pour trier des cellules?

A
  • Des anticorps spécifiques pour des antigènes de surface sont couplés à des billes magnétiques.
  • Incubation des ¢ avec les anticorps : aimant pour séparer les cellules
30
Q

Avantages utilisation de billes magnétiques comme méthode de tri cellulaire?

A

Rapide et ne nécessite pas d’équipement sophistiqué

  • Permet de séparer lymph T du sang par exemple
31
Q

Que sont les groupes sanguins?

A

Antigènes formés de sucres (glycolipidiques) à la surfaces de érythrocytes (globules rouges)
- 3 groupes : A, B et O

32
Q

Qu’est-ce que l’agglutination des globules rouges?

A

Quand ils se rassemblent en paquets au lieu de rester en suspension dans le sérum

33
Q

Quand se produit l’agglutination des globules rouges? Qu’est-ce qui la cause?

A

Quand le sang du receveur contient des anticorps pouvant réagir avec les antigènes présents sur les érythrocytes du donneur.

  • C’est la structure multivalente des anticorps qui permet cela
34
Q

Avantages et inconvénients des anticorps polyclonaux?

A

Avantages :
- Temps et coûts de production bas
- Production en grande quantité d’anticorps
- Plusieurs épitotes reconnues

Inconvénients :
- Anticorps de spécificité mal définie
- Variabilité entre les lots (à recommencer quand le lot est terminé)

35
Q

Avantages et inconvénients des anticorps monoclonaux?

A

Avantages :
- Production en grande quantité d’anticorps spécifiques
- 1 épitote reconnues

Inconvénients :
- Temps et coûts de préparation élevés

36
Q

Comment fonctionne l’ELISA?

A
  • Permet de détecter quantitativement quelque chose, diverses utilisations
  • Utilisation d’anticorps conjugués avec un substrat
37
Q

Comment fonctionne le westernblot?

A
  • Immunobuvardage : Détection de protéines
  1. Séparation des protéines d’un échantillon en fonction de la charge
  2. Impaction des protéines sur une membrane
  3. Blocage (avec une protéine non-spécifique pas reconnue par les anticorps) : empêche anticorps de venir se coller de façon non-spécifique à la membrane
  4. Incubation avec anticorps spécifique primaire
  5. Incubation avec anticorps secondaire qui se lie au premier anticorps
38
Q

Pourquoi le westernblot est limite comme méthode quantitative?

A

Car il y a saturation du signal quand peu d’échantillons. Il faut s’assurer d’avoir les contrôles adéquats

39
Q

Comment fonctionne l’immunoprécipitation?

A

Précipitation de plusieurs protéines avec une action immunologique

  • Ajout de billes qui reconnaissent la portion Fc des anticorps, ce qui permet la séparation des cellules.
  • Purification
40
Q

Applications de la cytométrie en flux?

A
  • Identification de ¢ avec marqueurs de surface
  • Marquage intracellulaire
  • Quantification d’ADN
  • Tri/dénombrement ¢ avec marqueur fluorescent
  • Tri/identification de m-o
41
Q

Pourquoi il n’est pas possible de trier des lymphocytes avec des anticorps avec la chromatographie d’affinité?

A

Car les billes sont fixées aux anticorps → permet pas de séparer les anticorps, juste les antigènes car les anticorps restent dans la colonne avec les billes lors du lavage

42
Q

Qu’est-ce que la séparation de cellules (panning)?

A

Fixer dans un puit de plastique les anticorps voulus et éliminer les autres avec un lavage

43
Q

Séparation des cellules par gradient de densité?

A

Centrifugation!!!
- Permet de séparer des cellules avec des densités variables.
- Les lymphocytes sont conservés dans la partie plasmatique.

44
Q

Un individu de groupe A possède l’antigène ___ et des anticorps anti-___?

A

Antigène A et anticorps agglutinant anti-B

45
Q

Groupes sanguins : Rh?

A
  • Groupe d’antigènes présent sur les érythrocytes
  • Rh+ = antigènes Rh
46
Q

Groupes sanguins : donneur universel? Receveur universel?

A

O- et AB+

47
Q

Pourquoi un anticorps bon pour le westernblot n’est pas nécessairement efficace en immunofluorescence?

A

Pcq WB se fait après SDS-PAGE (conditions dénaturantes) : protéines sont dénaturées et réduites. L’immunofluorescence se fait sur des cellules : protéines en forme native

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