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Immuno > Semaine 5 > Flashcards

Semaine 5 Flashcards

1
Q

Sur quoi sont basées les techniques d’immuno-essai?

A

Interactions entre l’antigène et l’anticorps

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Q

Qu’est-ce que permet le système bi-phasique (phase soluble et solide) des immuno-essais? (4)

A
  • Séparation
  • Purification
  • Détection
  • Quantification
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Q

Nommer la première technique développée des immuno-essais.

A

Radioimmunoessai

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4
Q

Sur quoi est basé un radioimmunoessai?

A

Compétition entre un antigène purifié radiomarqué et une solution qui contient lʼantigène à doser

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5
Q

Le radioimmunoessai est-il qualitatif ou quantitatif? Pourquoi?

A

Quantitatif : il repose sur une courbe d’étalonnage. Plus la radioactivité est faible, plus il y a d’antigène

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6
Q

Le radioimmunoessai permet de quantifier des anticorps ou des antigènes?

A

Antigènes

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7
Q

Que faut-il pour faire un radioimmunoessai? (4)

A
  • Anticorps spécifique pour lʼantigène fixé à un un substrat solide
  • Lʼantigène pur et radiomarqué
  • Antigène pur non-marqué en quantité connue (référence)
  • Un échantillon à analyser
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8
Q

Expliquer le principe de l’hémagglutination.

A

Chaque anticorps spécifique va lier 2 globules rouges ensemble, ce qui va former une tapis dans le fond du puit. S’il n’y a pas d’anticorps spécifique, les globules rouges vont rester dans le fond du puits.

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9
Q

Comment est calculé le titre d’un sérum?

A

Inverse de la plus grande dilution donnant une réaction positive

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10
Q

Nommer une application du test d’hémagglutination

A

Vérification de l’efficacité d’un vaccin contre l’Influenza

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11
Q

Donner 2 exemples de couplage lors d’immunoprécipitations (quelles billes peuvent être utilisées?)

A
  • Billes dʼagarose couplées aux Protéines A ou G (séparation par centrifugation)
  • Billes magnétiques couplés au ac. secondaires (séparation sur aimant)
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12
Q

Différentier les chromophores des fluorochromes.

A
  • Chromophores : composés qui absorbent la lumière

* Fluorochromes : re-émettent la lumière après excitation

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13
Q

Nommer 2 technologies issues de la fluorescence.

A

Microscopie à fluorescence

Cytométrie en flux

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14
Q

Qu’est-ce qu’est la cytométrie en flux?

A

Appareil qui va capter et même trier les différentes cellules selon les anticorps de différentes fluorescences (couleurs)

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15
Q

Que permet la cytométrie en flux?

A

Analyse de populations de cellules

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16
Q

Comment s’appelle le graphique issu de l’analyse des données de la cytométrie en flux?

A

Le dot-plot

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17
Q

Quel est l’avantage de regarder des résultats de cytométrie en flux sous la forme d’histogramme?

A

L’aire sous la courbe correspond au nombre de cellules.

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18
Q

Selon quel principe peut-on trier les cellules en cytométrie en flux?

A

En leur attribuant des charges

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19
Q

Avec quoi est couplé l’anticorps dans un ELISA?

A

Enzyme qui sera colorée plus tard

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20
Q

Différentier l’ELISA indirecte du sandwich.

A

Indirecte : Ag - Ac - Ac marqué

Sandwich : Ac - Ag - Ac marqué

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21
Q

Pourquoi est-ce important d’ajouter un agent de saturation dans les ELISA?

A

Pour éviter que les anticorps adhèrent de façon non-spécifique à la paroi du plastique

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22
Q

Comment se fait l’amplification du signal des ELISA?

A

Ajout d’un substrat incolore qui va réagir avec l’enzyme de l’anticorps et faire une forte coloration

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23
Q

Nommer 2 avantages de l’ELISA en sandwich

A
  • Pas de purification de l’antigène nécessaire

- Très spécifique (utilisation de 2 anticorps monoclonaux)

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24
Q

C’est quoi les essais multiplexes?

A

Utilisation de la cytométrie en flux pour faire plusieurs ELISA en même temps (anticorps reliés à des billes). ELISA en sandwich

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25
Q

Décrire brièvement les étapdes d’un Western Blot

A
  1. Migration de protéines sur SDS-PAGE
  2. Transfert des protéines sur une feuille polymérisée
  3. Ajout d’anticorps spécifiques couplés avec des enzymes
  4. Exposition des bandes
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26
Q

Nommer 3 façons de détecter le VIH

A
  • ELISA
  • Western Blot
  • PCR pour détecter l’ARN du virus
27
Q

Expliquer le principe du ‘‘dip-stick assay’’ ou du lateral flow (test de grossesse)

A

Même principe qu’un ELISA sandwich. L’antigène (hormone de grossesse) va rencontrer des anticorps marqués spécifiques, puis par capillarité, le complexe va rejoindre une ligne d’anticorps fixés reconnaissant aussi l’antigène.

28
Q

Comment peut-on vérifier si un test de grossesse a bien fonctionné?

A

Regarder la ligne de référence. Les anticorps fixés reconnaissent les premiers anticorps qui se lient à l’antigène et portent le marqueur coloré

29
Q

Où se développent les cellules T et B?

A

Cellules B: moelle osseuse

Cellules T: thymus

30
Q

Quels sont les objectifs du développement des cellules B? (2)

A
  • Expression d’un seul BCR/ cellule B (Exclusion allélique)

- Maximiser les chances de produire un BCR

31
Q

Quelles sont les 4 phases du développement des cellules B?

A
  1. Réarrangement VDJ des précurseurs B
  2. Reconnaissance du soi = élimination des cellules B immatures
  3. Reconnaissance du non soi = activation
  4. Cellules B activées -> Plasmocytes et cellules mémoires
32
Q

Quelle est la fonction du récepteur pré-B?

A

Vérification de l’existence d’une chaîne lourde fonctionnelle.

33
Q

Quel est le mécanisme qui permet à la cellule de survivre après la production d’une chaine lourde lors de la phase 1 du développement des cellules B?

A
  1. Fabrication de la chaine lourde (après VDJ)
  2. Ajout d’un surrogat de chaine légère
  3. Migration de la chaine lourde vers lla surface de la cellule
  4. Association à IgB et Iga
  5. Signal de survie (ou mort si pas d’association)
34
Q

Quelles sont les deux sous-unités du surrogat qui remplace la chaine légère?

A
  • VpréB

- Lambda 5

35
Q

Quelles sont les étapes de la première phase du développement des cellules B?

A
  1. Réarrangement VDJ du locus VH et vérification d’une chaine lourde fonctionnelle
  2. Prolifération (Rentabiliser chaine lourde) et réarr. VL (lambda ou kappa)
36
Q

Qu’est-ce que l’exclusion alléllique?

A

Ensemble de mécanismes qui assurent qu’une cellule B exprime seulement 1 type d’Ac (BCR)

37
Q

Comment se fait la formation des chaines légères lors de la phase 1 du développement des cellules B?

A
  1. À l’aide de l’exclusion allélique, il y a une recombinaison VJ du gène kappa sur 1 seul allèle
  2. Si récepteur non fonctionnel, il y a une recombinaison VJ du gène kappa sur l’autre allèle
  3. Si récepteur non fonctionnel, il y a une recombinaison VJ du gène lambda sur premier allèle
  4. Si récepteur non fonctionnel, il y a une recombinaison VJ du gène lambda sur l’autre allèle
  5. Si récepteur non fonctionnel, apoptose
38
Q

Quels sont les 3 mécanismes d’élimination des cellules B autoréactives?

A
  1. Délétion clonale (apoptose)
  2. Anergie (ne réagit pas)
  3. “Receptor editing” (VL)
39
Q

Décrivez le “receptor editing”.

A

Si une cellule B “adolescente” reconnait le soi, elle a l’opportunité de continuer la recombinaison des éléments VJ qui restent de la chaine légère

Si continue à reconnaitre le soi = mort

Sinon, maturation

40
Q

Qui a découvert les cellules T?

A

Jacques FAP Miller

41
Q

Quelles sont les 4 phases du développement des cellules T?

A
  1. Réarrangement des gènes de TCR dans les cellules précurseurs de cellules T
  2. Vérification de la reconnaissance du CMH et de la non-reconnaissance des antigènes du soi
  3. Activation par rencontre d’antigènes dans les organes lymphoïdes secondaires.
  4. Prolifération et migration pour éliminer l’infection
42
Q

Pourquoi le développement des cellules T est-il plus compliqué que celui des cellules B?

A
  • 2 type de cellules T (CD4/CMHII, CD8/CMHI)
  • Besoin d’une sélection positive pour la reconnaissance du CMH
  • Besoin d’un sélection négative pour la non-reconnaissance d’un antigène du soi.
43
Q

Ou se déroule le développement des cellules T?

A

Dans le thymus.

44
Q

Où se déroule les mécanismes de sélection précoces des cellules T?

A

Le cortex du thymus

45
Q

Où se déroule les mécanismes de sélection avancé des cellules T?

A

La médulla du thymus

46
Q

Comment s’appelle les cellules T au début de leur développement?

A

Thymocytes

47
Q

Comment sont guidé les thymocytes?

A

À l’aide de chimiokines

48
Q

Qu’est-ce que des cellules double négative?

A

Des cellules T en devenir qui n’ont pas de CD4 et de CD8

49
Q

Qu’est-ce que des cellules double positive?

A

Des cellules T en devenir qui exprime du CD4 et du CD8

50
Q

Qu’est-ce qu’une mort par négligence?

A

Une cellule double positive qui ne détecte pas le CMH va mourir.

51
Q

Qu’est-ce que l’Aiguillage de ligné?

A

La différenciation des cellules double positives en simple positive. CD4 ou CD8 dépend de l’affinité du TCR pour le CMHI ou II.

52
Q

Qu’est-ce que des cellules simple positive?

A

Des cellules T en devenir qui exprime du CD4 ou du CD8

53
Q

Décrivez les mécanismes impliqué dans la maturation des cellules double négatives jusqu’à l’expulsion des cellules T du thymus. (11)

A
  1. Cellule double-négative
  2. Réarrangement TCR(bêta)
  3. Checkpoint pre-TCR
  4. Prolifération
  5. Réarrangement TCR alpha
  6. Cellules double positive
  7. Mort par négligence (95%)
  8. Sélection positive/négative (négatif = liaison trop forte au CMH)
  9. Aiguillage des lignées
  10. Simple positif
  11. Expulsion du thymus.
54
Q

Qu’est-ce qu’un TCR bêta?

A

C’est l’équivalent des chaines lourdes des Ig qui se fait par recombinaison VDJ. Il y a aussi de l’exclusion allélique.

55
Q

Combien de temps prend la maturation des cellules T?

A

3 semaines

56
Q

Décrivez le checkpoint pre-TCR

A
  1. Réarrangement de la chaine bêta
  2. Association de pT(alpha) à la chaine bêta
  3. expression du pre-TCR à la surface et association au CD3.
  4. Signal de survie
57
Q

Vrai ou Faux. L’expression de CD3 est très faible.

A

Vrai

58
Q

Vrai ou Faux. lors du réarrangement TCR bêta, il y a de l’exclusion allélique

A

Vrai

59
Q

Vrai ou Faux. lors du réarrangement TCR alpha, il y a de l’exclusion allélique

A

Faux, car la plupart des cellules double positives meurent par négligence

60
Q

Qu’est-ce que la sélection négative?

A

Les cellules T meurent si:

  • Interaction du thymocyte trop forte avec le CMH
  • Reconnaissance spécifique des peptides du soi
61
Q

En quoi sont importante les cellules épithéliales médullaires?

A

Ces cellules sont utiles lors de la sélection négative des cellules doubles positives.

À l’aide du facteur de transcription AIRE (autoimmune regulator), elles expriment des protéines de la périphérie/autres organes (expression ectopique)

62
Q

Quel maladie héréditaire autoimmune est causé par un défaut génétique de AIRE?

A

APECED (autoimmune endocrinopathy-candidiasis-ectodermal dysplasia)

Défaut de la sélection négative.

63
Q

D’où viennent les précurseurs de cellules T qui arrivent dans le cortex du thymus?

A

Les veinules

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