Replikation och olika RNA typer Flashcards
Vad behövs för att separera de två DNA-strängarna?
Helikas för att separera strängarna och SSB (single strand bindning protein) för att stabilisera och och räta ut.
Var binder helikas?
Orgin of replication
Vad är topoisomeras?
Motverkar den positiva supercoilen som bildas när DNA-strängarna separeras av helikas
Vad är det för skillnad på topoisomeras I & topoisomeras II
Topoisomeras I:
Binder strax framför replikationsgaffeln och bryter genom kovalent bindning fosfodiesterbindningen på den ena strängen - så att supercoilen kan snurras upp.
⁃Energin från den brutna fofodiester-bindningen är lagrad i den nya fofotyrosin-bindning och kan användas för att
reversera reaktionen.
Topoisomeras II:
Bryter båda DNA-strängarna och används för att linda upp te.x två cirkulära dubbelhelixar som låst fast varandra.
Använder ATP för att bryta bindningar och öppna upp. Återförsluts sedan.
Hur fungerar sliding clamp?
Sliding Clamp behövs för att DNA-polymeras ska kunna syntetisera längrte DNA-sekvenser (den faller annars lätt av).
Clamp laddas på DNA-strängen av Clamp-loader som använder ATP för att öppna Clamp så den kan binda runt DNA-strängen.
Clamp-loader håller clamp inaktiv till det att DNA-polymeras bundit in.
Vad ingår i replikationsgaffeln?
Sliding Clamp + Clamp Loader Helikas DNA-polymeras DNA-primas DNA-ligase 1 (enzym)
Medhjälpnade:
SSB (single stranded binding protein)
Topoisomeras
Kromatin remodulleringskomplex
Histon chaperons
Vilka tre typer av DNA-polymeras finns det och vad är skillnaden?
DNA-primas och DNA- Polymeras alfa skapar ett komplex där primas skapar en RNA primer och Pol-alfa förlänger denna med ca 20 nk.
Sedan:
DNA-Polymeras delta förlänger resten av lagging strand
DNA-pol epsilon förlänger leading strand.
Hur ligeras okasakifragment?
DNA-polymeras åker fram till bakomliggande okasakifragment och gör att RNA-sek viker unden lite, då kan ett endonukleas klippa bort primern och DNA-ligas 1 ersätta den med DNA.
Vad är hairpins?
Enkelsträngas DNA eller RNA som basparar med sig själv - liknar en bobby-pin
I vilken riktning skapar replikerar DNA-pol?
Läser av ”parent strand” 3,-5’ och bygger därför den nya DNA-strängen 5’—3’, genom att fästa en ny nukleotid i 3’-ändens OH-grupp
Vad menas med replikationsbubbla?
När två helikas binder in mha av helikas loader bildas två st replikationsgafflar som går åt varsitt håll på DNA-strängen.
Detta skapar en ”bubbla”
Vad är en telomer?
I slutet av replikationen av lagging strand finns det ingenstans att fästa primersekv och därför ingen 3’-OH-ände för DNA-pol att fästa i.
Därför har våra kromosomer en ände kallad telomer som består av en upprepad sekv inte fyller ngn funkt i genomet och skyddar våra kromosomer mot att kortas ner.
Vad gör telomeras?
Enzymet känner igen telomeren på DNA:ts modersträng, och förlänger denna mha inbyggt RNA-templat.
När modersträngen är förlängd kan förlängningen fungera som fäste för DNA-pol alfa + primas
Hur skiljs färdigsyntetiserad helt kromosom från en som råkat gå sönder och måste repareras?
En T-loop bindas, kallas också för sheltering.
3’ överhäng som viks in och skapar en loop på slutet av kromosomen.
Vilka är det tre stegen för att kontrollera att replikationen blir korrekt?
- Val att rätt nk ger 1 fel/10^5 nk
- Proofreadning ger 1 fel/10^2 nk
- Mismatch repair ger 1 fel/10^2 nk
= 1 fel /10^9 nk
Hur går kontrollen av nk vi replikationen till?
Innan nk blir kovalent inbunden genomgår RNA-pol en strukturförändrning som låter den dubbelkolla att det är rätt nk.
Det är dessutom svårare att katalysera inbindning av fel nk.
Vad innebär proofreading (replikation) ?
DNA-pol är mkt känsligt för strukturen på den DNA keja den ska förlänga. Har den av misstag bundit in en felaktig nk som inte basparar korrekt kan den känna av den och dess exonukleas-del klipper bort den felaktiga nk.
Vad innebär mismatch repair?
Fångar upp mismatchade nk som missats av exonukleaset under proofreading.
MutS binder till den mismatchade basparet och MutL letar efter de ”nicks” som talar om vilket som är den nysyntetiserade strängen (om det är lagging strand som är ny)
MutS och MutL sitter i ett komplex och när MutL scannar så scrunchas strängen
I bakterier känner system igen de metyleringar som efter en tid bildas på templatet (MutH) och bildar ”nicks” på det ej metylerade nya strängen
Sedan bryts DNA-strängen mha exonukleas ner från ”nicket” hela vägen bort till den mismatchade nk.
Lagad av DNA-pol
Vilken typ av fel kan mismatch repair laga?
Insertion
deletion
Mismatch
Vilka typer av repair-system finns det för skadat DNA?
Base excision repair
Nukleotid excision repair
Translesion DNA-pol (större skador)
Nonhomologous end joining
Homologous rekombination
Vad innebär base excision repair?
Glykosylas klipper bort basen och ett endonukleas klipper sedan av socker-fosfaten.
DNA-pol + ligas lagar.
- klipper bort skadade baser som deaminerad cytosin (U).
- alkylerade eller oxiderade baser
-baser med öppnade ringar
C=C som blivit enkelbindning
Vad innebär nukleotid excision repair?
Lagar större skador i DNA:t orsakade av t.ex kovalenta modifieringar som tymin-dimerer/pyrimidin-dimerer
Från tobaksrök eller UV-strålning
Komplexet (excision nukleas) klipper av fosfodiester-backbone och DNA-pol + ligas lagar